Tcnicas Histolgicas

MICROTOMIA DE ROTACION

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO

CTEDRA DE:
TCNICAS HISTOLGICAS
DOCENTE:
LIC. IVN PEAFIEL
TEMA:
Micrtomia de rotacin
GRUPO: N8
WILMER GUAMAN
WILIAN CHAGUARO
ANA NUEZ

TERCER SEMESTRE
PERIODO ACADMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016
RIOBAMBA ECUADOR
GRUPO N 8

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MICROTOMIA DE ROTACION

INTEGRANTES:
N-

APELLIDOS Y NOMBRES

Chaguaro Ramrez Wilian Ivn

Nuez Morejn Ana Lucia

Guamn Huaraca Wilmer Patricio

PARTICIPACIN
N-

25%

50%

75%

100%

Observacin
Colabor con todas las
necesidades requeridas,
para la elaboracin del
presente trabajo

100%

100%

Su colaboracin fue clave

para la correcta
elaboracin del trabajo.

100%

Trabaj correctamente, y
colabor en todo lo
necesario.

Objetivos General

Cal. Docente

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Identificar los factores que se requieren para realizar un corte del bloque de parafina en el
micrtomo.

Objetivos especficos
Conocer las partes por las que estn compuestas un micrtomo para poder utilizarlo de mejor
manera.
Conocer los diferentes tipos de cortes que se puede realizar en micrtomia para posteriormente
ser observadas.

MICRTOMO DE ROTACION:
Se obtienen cortes mediante un movimiento de deslizamiento del bloque sobre la cuchilla, o
viceversa. En estos micrtomos el movimiento lo proporciona directamente la mano y es de
ida y vuelta, siendo en la vuelta cuando se eleva la posicin del bloque, o de la cuchilla, una
distancia que nos da el grosor del corte.
El micrtomo de rotacin provoca el corte gracias a la transformacin de un movimiento de
rotacin en otro de ascenso y descenso del porta-muestras. En el movimiento de bajada sobre
la cuchilla se produce un acercamiento del porta-muestras hacia la cuchilla se segn el espacio
seleccionado. En el porta-muestras existe un sistema que permite orientar la superficie de corte
de la muestra respecto a la cuchilla. En estos micrtomos la cuchilla se mantiene fija durante
el proceso de corte, pero puede regularse el Angulo de ataque a la muestra.
Portabloques: en el que apoyamos el casete con la muestra. Avanza de forma discontinua sobre
una cuchilla gracias a un mecanismo regulable de cremallera. Propiamente se denomina
portabloques al dispositivo donde colocamos el materialtisular sumergido en algn medio de
inclusin, generalmente parafina. Los actuales portabloques llevan un sistema de pinzas que se
adaptan a cualquier tipo de base omolde. A su vez, el portabloques lleva un sistema de
orientacin que permiteconseguir la posicin en paralelo entre el bloque y la cuchilla.
Portacuchillas: consiste en un dispositivo de fijacin basado en una pinza que sujetay orienta
adecuadamente la cuchilla. Esta pinza permite variar el ngulo deinclinacin de la cuchilla, as
como su grado de aproximacin al portabloques.
Mecanismo de avance del portabloques sobre la cuchilla: sistema mecnico oelectrnico que
proporciona cortes sucesivos de tejido a partir del bloque.Actualmente se consiguen cortes de
hasta 1
Base: sirve para sustentar el microtomo a la mesa.
Caja: tambin llamada carcasa, aloja el mecanismo de engranajes de precisin y elmecanismo
para seleccionar el espesor de la seccin.
Manivela: est situada a la derecha del aparato; consiste en un volante con unamanilla y un
freno. En el volante hay una flecha pintada que indica la direccin enla que se debe mover la
manivela.

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Freno: es un tornillo que, accionndolo hacia afuera y/o girndolo sobre s mismoun cuarto de
vuelta, libera la manivela.
Manivela de recuperacin: est situada a la izquierda del microtomo. Una vezutilizado el
microtomo es conveniente hacerle volver a la posicin de inicio. Paraello se acciona la
manivela en sentido antihorario hasta que la base del brazoportabloques est cercano a la caja
de engranajes.

Realizacin de cortes
Los tejidos encastrados en parafina o plstico son fnamente rebandados (cortados) usando un
dispositivo llamado microtomo. Hay dos tipos de microtomos ms comunes: rotatorios y de
deslizamiento. En los del ltimo tipo, en bloque con la muestra permanece quieto y la cuchilla
es deslizada contra el tejido durante la brazada de corte, rebanando secciones individuales. El
microtomo de deslizamiento se reserva generalmente para muestras grandes tales como tallos
lignificados. como contraste al microtomo de deslizamiento donde la cuchilla se mueve en
relacin a la muestra, el microtomo de rotacin corta rebanadas de tejido moviendo el bloque
del material encastrado contra la superfiice de una cuchilla fija. Los microtomos de rotacin
son comunes a los microscopios de luz y electrnico.
Todos los microtomos de rotacin tienen un mecanismo de avance automtico que puede
establecer para que el bloque se mueva una distancia especfica hacia la cuchilla en cada
brazada. Un microtomo con un mecanismo de avance simple es adecuado slo para cortes
relativamente finos y para la mayora de material encastrado en parafina (5-12 m, o ms).
Como la grosor del corte desciende a menos de pocas micras, sin embargo, es necesario que el
bloque se retraiga alguna distancia (40-60m) despus de hacer una seccin. Esto asegura que
la muestra no golpea a la cuchilla cuando asciende, causando daos a la cuchilla y
comprimiendo el bloque. Este tipo de microtomo se llama microtomo rotatorio retrctil.
Como se realizan cortes de muestras incluidas en parafina de forma sucesiva, estas se adhieren
a la anterior y forman "cintas" de secciones en serie. Las muestras infiltradas en plstico no
forman habitualmente cintas pero pueden ser adheridas aplicando una fina cpa de pegamento a
las caras superior en inferior o encastrando el bloque en una mezcla de parafina y Permount.
Los cortes seriados de los tejidos son tiles por muchas razones. En la observacin de
mltiples cortes seriados del tejido intacto original, podemos reconstruir una imagen 3D
(tradicionalmente haciendo una imagen mental, pero ahora ms frecuentemente con
ordenador) y la organizacin interna del tejido aclarado. Ms an, secciones transversales y
longitudinales se necesitan habitualmente para deducir la organizacin de tejidos complejos, y
es a menudo necesario hacer series de cortes seriados para localizar una seccin mediana.
La delgadez de la seccin establecida por el microtomo es un valor aproximado slo y no
debera ser usado para medir la grosor de las secciones contando las mismas. Esto es, el
nmero de secciones multiplicado por el grosor de la seccin no da medidas ajustadas de
tejido. Ms an, las dimensiones del tejido se ven tambin afectadas por compresin durante la
realizacin de cortes y expansin o contraccin durante la fijacin y deshidratacin.

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Pasos generales
Los pasos relacionados en hacer y montar secciones de muestras de tejido encastrado se
generaliza en los siguientes:
1. Cortar bloques de parafina o de lstico que contengan una muestra del tejido cada una.
2. Montar los bloques con el tejido en una matriz soporte, hecha de madera o metal, y recortar
el bloque en una superfice rectangular o trapezoidal. Los mrgenes superior e inferior (los
bordes que miran a la cuchilla) deben estar paralelas para obtener una cinta recta.
3. Montar y ajustar el bloque sobre el microtomo.
4. Preparar la cuchilla del microtomo (afila una cuchilla de acero o haz cuchillas de cristal).
5. Haz secciones individuales o seriadas. Temporalmente guarda cintas (por ejemplo en cajas
de papel fotogrfico).
6. Cortar cintas de parafina que cubran el 75% de la superficie del portaobjetos para permitir
la expansin de la parafina.
7. Hacer flotar secciones individuales o cintas sobre agua ( 4% de formalina) en portaobjetos
subbed (subbing no es necesario para cortes realizados en plstico.
8. Calentar a 42C menos de 15 min en una placa calefactora para relajar las tira de secciones;
entonces quitar el lquido con una pipeta o absorbindolo con una toalla de papel doblada.
9. Secar overnight en un horno a 42C para asegurarse la adherencia al portaobjetos o en
microondas durante 15-30 minutos a 42C.

Factores que influyen en la calidad de los cortes

Infiltracin: El tejido debe estar completamente infiltrado con el medio de imbibicin. Una
infiltracin incompleta se manifiesta desmigajndose los tejidos cortados o cayendo los tejidos
fuera de la seccin. Se puede intentar refundir el bloque de parafina para continuar la
infiltracin, pero puede resultar daino para el tejido. Los tejidos encastrados en plstico
generalmente no pueden ser reinfiltrados.
Orientacin: Los tejidos deben ser orientados en el bloque respecto a la cuchilla del
microtomo de manera que se produzcan cortes longitudinales o transversales. Cortando
muestras orientadas azarosamente dar como resultado cortes oblcuos, los cuales son difciles
o imposibles de interpretar.

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Rigidez: Los bloques de tejidos pueden ser montados firmemente a la matriz y la matriz al
microtomo. Dejando cualquier holgura puede dar como resultado cortes gruesos y finos
alternativamente en la realizacin de cortes seriados.
Temperatura: Un bloque de parafina que est demadiado caliente se comprimir durante la
realizacin de cortes seriados. si el bloque est demasiado fro, la parafina se vuelve
quebradiza y se podrn realizar o no cortes en serie. La temperatura no es un problema cuando
solemos realizar cortes en plstico. Los bloques pueden enfriarse metindolo en un colador de
t lleno con piezas de hielo seco sobre el bloque de parafina.
Humedad: Una baja humedad y la electricidad esttica resultante son frecuentemente un
problema cuando se realizan cortes en parafina, pero hay molestias particulares cuando se
hacen cortes en plstico. Los cortes se metern en la superficie del bloque despus de cortar y
hacer tiras hacindose imposible. Elegir un dia hmedo para realizar cortes en plstico, respira
sobre la superfice del bloque, haz hervir agua cerca del microtomo, "dispara" un arma
antiesttica en la seccin, o pon una gotita de agua en la cuchilla directamente bajo la zona
donde se est formando la tira. Cuanto todo esto falle, corta otro da.
Dureza del material: Los tejidos duros e insensibles se harn aicos y caern del medio de
encastrado. Este problema puede ser casi siempre localizado en una infiltracin deficiente.
Poner el tejido y poner en remojo el bloque en agua durante 1-4 das, cortar entonces.
La cuchilla del microtomo.
Las condiciones de una cuchilla de microtomo es uno de los factores ms importantes a la hora
de determinar la caliad de los cortes. Las cuchillas de metal para microtomo estn
extremadamente afiladas y necesitan ser mantenidas regularmente por un afilado. El afilado
del cuchillo produce un biselado poco profundo en la punta, cuyo ngulo, relativo a la
superficie del bloque con el tejido, es un factor determinante en la calidad durante la
realizacin de cortes. Demasiado superficial y la cuchilla comprimir el bloque sobre el
deslizamiento en el corte y sobre la recuperacin, dando como resultado cortes gruesos y
finos. Demasiado empinado y la cucilla rasgar en vez de cortar. Tericamente el ngulo de
corte ptimo son 4, sin embargo en la prctica, los ngulos vienen determinados
empricamente. La mayora de microtomos tienen reglas de unidades arbitrarias grabadas en el
soporte de la cuchilla. Cuando pruebes una cuchilla nueva, establece el ngulo en un valor
medio y corta un bloque de parafina vaco. Modifica el ngulo de la cuchilla usando
quedndote con aquel que de mejores tiras, entonces fija el ngulo en ese valor.
El material del cual est compuesta la cuchilla se tambin un factor importante en la
realizacin de cortes. Los medios de encastrado duro (plstico vs parafina) requieren una
cuchilla ms dura (vidrio vs metal). Por tanto, las cuchillas de parafina son generalmente de
acero, mientras que las cuchillas para cortar plstico estn hechas bien de tungsteno, vidrio, o
(raramente para microscopa ptica) de diamante. Las hojas desechables son una opcin muy
utilizada para realizar cortes en parafina. Estas cuchillas de acero inoxidable estn hechas para
usarse una vez y deberan desecharse despus que se hagan deslustradas. Las cuchillas

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desechables necesitan sujetarse al microtomo mediante un soporte universal para este tipo de
cuchillas. Las cuchillas desechables y el soporte encajan en el sopporte portacuchillas del
microtomo. Si las cuchillas desechables se cambian amenudo, la calidad de los cortes puede
ser tan buena como la obtenida de las cuchillas estandar de microtomo. El soporte y las hojas
pueden ser compradas en suministradores comunes.
Las cuchillas de microtomo vienen en cuatro perfiles, o caras, diseadas para cortar diferentes
medios de encastrado. Generalmente, slo se utilizan los de dos perfiles. El perfil C se usa
para cortar parafina. Este es el tipo ms comn de cuchilla de microtomo y puede ser
econmica. La cuchilla de tungsteno-carbido con perfil D es una cuchilla mucho ms dura y
robusta usada para cortar medios de encastracin en metacrsilato. (1)
Tipo Perfil

Usos

Una concavidad

Cortes en celoidina, materiales muy

blandos

Bicncava

Cortes en celoidina, materiales blandos

En cua

Cortes en parafina, celoidina,

(posiblemente) materiales blandos

Cortes de materiales duros: la mayora

Cua nica con perfil de los plsticos, madera; pueden estar
elevado
hechos de tungsteno-carbido para
realizar cortes en metacrilato.

Doble cua; perfil

elevado en un lado y Realizado en tungsteno-carbido para
poco profundo en la realizar cortes en metacrilato
otra; lados paralelos

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LAS TCNICAS PARA TENER UN BUEN CORTE DE TEJIDO EN MICROTOMO

Fije las muestras de manera adecuada
La fijacin es el paso ms importante al llevar a cabo las tcnicas de preparacin de muestras
histolgicas. No importa el cuidado con el que procese y seccione las muestras de tejido, los
detalles morfolgicos esenciales slo se mostrarn si el tejido
se fija de manera adecuada y rpida.
Casi siempre es ms difcil seccionar las muestras mal fijadas que aquellas que estn bien
fijadas.
Los tejidos mal fijados siempre mostraran menos caractersticas morfolgicas, aunque se
hayan procesado de manera ptima y con cuidado.
Procese el tejido de forma apropiada
Un bloque de parafina ser difcil de seccionar, a no ser que una muestra bien fijada sea
procesada de la manera adecuada
Las muestras pueden estar poco procesadas (muestra demasiado grande, programa
demasiado breve) o demasiado procesadas (programa demasiado largo para el tamao y la
naturaleza de la muestra). En ambos casos, puede ser difcil o imposible realizar un corte.

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Existen varias tcnicas que se pueden utilizar para obtener secciones de bloques difciles.
Si es difcil seccionar el bloque porque el tejido es duro, la superficie expuesta puede
empaparse en agua fra o en un agente reblandecedor, como una solucin de detergente
blando, suavizante o MollifexTM.
Para muestras calcificadas, puede aplicar un agente decalcificador, Durante 10 minutos o
ms, en el tejido expuesto, ello le permitir obtener varias secciones. Enjuague bien los
bloques antes de montarlos en el porta muestras del micrtomo y de volver a cortarlos, ya que
los rastros del agente de descalcificacin daaran la placa de presin del porta cuchillas.
El sistema Leica Paraffin Tape-Transfer est recomendado para obtener secciones de bloques
dificiles en los que la fijacin, el procesamiento o la infiltracin puede ser errnea y los
mtodos de corte normales no se realizan con xito.
Cuando es imposible obtener secciones de un bloque porque la muestra ha sido
incorrectamente procesada en primera instancia, puede ser posible reprocesarlo.

Este bloque de pncreas no tiene una fijacin

suficiente y ha sido procesado utilizando un
Protocolo que era demasiado breve. Muestra los
efectos tpicos del procesamiento insuficiente que
ha ocasionado una considerable reduccin de la
muestra dentro de la parafina que tiene alrededor.
El tejido estaba suave y blando y era imposible de
cortar. Es preciso volver a reprocesarlo.

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REALICE LA INCLUSION DE LAS MUESTRAS CON CUIDADO

La inclusin es un paso importante que precisa una aproximacin cuidadosa.
Una inclusin poco cuidadosa puede hacer la microtoma mucho ms difcil.
No llenar lo suficiente el molde de inclusin puede dar lugar a una sujecin inestable en el
micrtomo y originar cortes de distinto espesor uno grueso y despus otro fino y otros
problemas.
Evitar llenar excesivamente los moldes de inclusin, porque esto puede interferir con la
alineacin correcta de la cara del bloque durante el corte.
Cualquier exceso de parafina en la parte exterior del molde de inclusin debera ser
eliminado antes de sujetarlo, para asegurarse de que el bloque est sujeto con firmeza durante
el seccionamiento.
La orientacin de la muestra es muy importante
COLOQUE EL MICROTOMO DE MANERA ADECUADA
La posicin del micrtomo en el laboratorio es importante.
Coloque el micrtomo en un lugar estable, lejos de rfagas de aire, puertas y puntos de paso.
Es muy importante que el personal no este distrado al usar el micrtomo por los riesgos de
lesionarse con cuchillas extremadamente afiladas.
Es preferible tener un suelo antideslizante en las inmediaciones de los micrtomos porque,
inevitablemente, los fragmentos de parafina caern al suelo y pueden originar una superficie
resbaladiza. Muchos laboratorios usan esterillas antideslizantes para que el entorno sea ms
seguro.
UTILICE LAS CARACTERISTICAS DE SEGURIDAD DE FORMA APROPIADA
Debe estar familiarizado con las caractersticas de seguridad del micrtomo que est
Utilizando y observar algunas normas bsicas durante el corte.
Las cuchillas reutilizables y desechables del micrtomo estn extremadamente afiladas y
pueden causar lesiones de carcter grave a no ser que se actu con el cuidado pertinente al
trabajar con ellas. Los accidentes se producen cuando un usuario esta distrado o no est
completamente concentrado.

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Use Pinzas o pincel en lugar de los dedos para coger las secciones o los fragmentos de
parafina de la cuchilla o de la cara del bloque.
Los micrtomos de rotacin Leica estn equipados con una proteccin de seguridad
(proteccin de la cuchilla o proteccin del dedo), un bloqueo del volante y un freno del
volante para garantizar que se trabaja con seguridad.
La proteccin de seguridad puede estar colocada para cubrir toda la longitud del filo.
El bloqueo del volante inmovilizara el porta muestras en la parte superior de la carrera de
corte; se debe utilizar al cambiar los bloques.
La proteccin debe estar colocada y el bloqueo del volante activado cuando un bloque est
siendo colocado o eliminado de la pinza porta bloques, o cuando se est realizando cualquier
manipulacin del bloque mientras la cuchilla est colocada. La proteccin tambin debe ser
utilizada cuando el micrtomo se deja sin supervisin.
El freno del volante bloqueara el micrtomo en cualquier posicin del mango; se utiliza al
realinear la cara del bloque o al ajustar el avance de desbaste.

En esta ilustracin, se ha colocado la proteccin de

seguridad roja en el micrtomo Leica RM2235 en su
posicin. Cubre por completo el filo de la cuchilla.
AJUSTE EL ANGULO DE INCLINACION DE LA CUCHILLA
DE FORMA PTIMA
El ngulo de inclinacin de la cuchilla se puede ajustar y debe ser configurado para un
rendimiento ptimo
MAXIMICE LA VIDA TIL DE LA CUCHILLA
Hay algunas estrategias simples para obtener la vida mxima de cada cuchilla.

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Al limpiar la cuchilla, evite arrastrar cualquier cosa a lo largo del filo, incluso las fibras de
celulosa pueden danarla.
Evite tocar el borde con cualquier objeto duro, como un pincel o unas pinzas.
Use la cuchilla sistemticamente, trabajando desde un extremo al otro. Esto le proporcionara
la mxima vida til a cada parte de la cuchilla.
ORIENTE LA MUESTRA DE MANERA ADECUADA
La orientacin de la muestra puede afectar a la facilidad con la que se puede obtener
una cinta e influye directamente sobre la calidad de la seccin.

TENGA CUIDADO AL EFECTUAR UN RECORTE, UN

REFRENTADO O UN DESBASTADO
En la microtoma, esta etapa requiere un excelente cuidado, ya que tejido importante
para el diagnstico se puede perder fcilmente o la superficie del bloque puede ser
daada.
Antes de iniciar el recorte, asegrese siempre de que todos los mecanismos de sujecin estn
apretados con seguridad.
El objetivo de recortar un bloque de forma adecuada es exponer el tejido con cautela en el
nivel en el que se pueda obtener una seccin representativa.

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El recorte normalmente se efecta con unos grosores de entre 10 y 30 m.

Al efectuar un recorte basto y rpido de tejidos quebradizos se corre el riesgo de daar la
superficie de la muestra2. Tenga especial precaucin al utilizar el dispositivo de recorte
mecnico a 30 m.
Como paso final, pula la cara del bloque cortando suavemente unas pocas secciones finas.
ASEGRESE DE QUE LOS BLOQUES ESTN FROS
El corte normalmente mejora cuando la muestra est bien incluida en parafina dura.
Por esta razn, la mayora de los bloques de parafina deben estar fros cuando se
cortan las secciones. El mtodo exacto utilizado para enfriar el bloque es importante.
La parafina fra proporciona un mejor soporte para los elementos duros en una muestra,
permitiendo que se obtengan secciones ms delgadas.
Coloque los bloques sobre una placa fra o sobre una superficie fra y hmeda durante unos
minutos (como la superficie de hielo derritindose).
El agua penetra un poco en la cara del bloque, hinchando los tejidos y haciendo los mas
adecuados para cortarlos. Esto tiene particular importancia en el caso de tejidos excesivamente
deshidratados, secos o que se desmigajan.
El hecho de colocar los bloques en el congelador puede ocasionar la ruptura de la superficie,
cuando el tejido se separa de la parafina que tiene alrededor. Esto puede hacer que sea mas
complicado obtener secciones cohesivas.

Las secciones de la izquierda fueron cortadas

de un bloque relativamente caliente, sin enfriar.
Las secciones de la derecha fueron cortadas del
mismo bloque despues de que se enfriara, sobre la
superficie de hielo derritiendose.

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Estudie la tecnica para cortar

Esta cinta ha sido cortada con una carrera lenta y

constante, a partir de un bloque bien procesado y
completamente frio.

Bibliografa
1. [En lnea]
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/tecnicas_de_histologia_vegetal/D
ocumentos/Cortes.htm

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https://www.google.com.ec/search?
q=bloques+de+parafina&biwrGAsmzeNXwu5AJ#tbm=isch&q=cortes+en+microt
omia
https://es.scribd.com/archive/plans?doc=53678729&escape=false&metadata=
%7B%22context%22%3A%22archive_view_restricted%22%2C%22page%22%3A
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