Carrera Profesional de Tecnología Médica

HISTOQUIMICA básica
LIC.TM. Ricardo Santos Salcedo.

Semestre III

oNicanor Rocca Ccaqquesto

oYakeline Arnado Cáceres
oHerver Montesinos
 INTRODUCCIÓN
 El análisis de los tejidos internos es posible a
través del microscopio óptico, para lo cual es
necesario hacer secciones lo suficientemente
delgadas que permitan el paso de la luz y de
esta manera la mejor observación de los tejidos.
 La microtomía es la técnica utilizada para cortar
secciones de tejidos y que aun después del
corte conservan todos los detalles estructurales
para su identificación y estudio al microscopio
 MICROTOMÍA
 La técnica que emplea un micrótomo
para cortar secciones finas y ultra
finas de Tejidos adheridas a una
sustancia de sustentación.

uso
La microtomía, es;
en parte una
técnica y en parte
un arte
MICROTOMO
 (del griego mikros, que significa
"pequeño", y temnein, que
significa "cortar").
 Es un instrumento de corte que
permite obtener rebanadas muy
finas de material, conocidas
como secciones. Los
microtomos son un instrumento
importante de
la microscopía porque permiten
la preparación de muestras para
su observación
en microscopios de luz
transmitida o de radiación de
electrones.
 COMPONENTES DE UN MICROTOMO
Aunque pueden variar de unos modelos a otros,
los componentes fundamentales de un
micrótomo son:
 PORTABLOQUES: En el que apoyamos el casete con la muestra.
Los actuales portabloques llevan un sistema de pinzas que se
adaptan a cualquier tipo de base o molde. A su vez, el portabloques
lleva un sistema de orientación que permite conseguir la posición en
paralelo entre el bloque y la cuchilla.
 PORTACUCHILLAS: Consiste en un dispositivo de fijación basado
en una pinza que sujeta y orienta adecuadamente la cuchilla.
 MECANISMO DE AVANCE DEL PORTABLOQUES SOBRE LA
CUCHILLA: Sistema mecánico o electrónico que proporciona cortes
sucesivos de tejido a partir del bloque.
•BASE: sirve para sustentar el micrótomo a la mesa.
•CAJA: también llamada carcasa, aloja el mecanismo de engranajes de precisión y
el mecanismo para seleccionar el espesor de la sección.
•MANIVELA: está situada a la derecha del aparato; consiste en un volante con
una manilla y un freno.
 TIPOS DE MICROTOMO
 Micrótomo de oscilación o balanceo
 Micrótomo de rotación o tipo Minot
 Micrótomo de deslizamiento
 Micrótomo de congelación
 Criostato o criotomo
 Ultra micrótomo
Para escoger un micrótomo se
tendrá en cuenta:
 La necesidad de proceder sin previa
inclusión.
 Las dimensiones medias y extremas de la
muestra a cortar.
 El tipo de bloques.
 La necesidad de obtener secciones
seriadas.
 El grosor de las secciones en función de
los tamaños celulares.
 El tiempo disponible para obtener las
secciones.
Micrótomo de oscilación o balanceo
Posee un sistema de
avance de tornillo y las
secciones se obtienen
por un sistema oscilatorio
de palanca que realiza el
portabloque sobre la
cuchilla al vascular sobre
ella.
 Ventajas: simplicidad y
bajo coste
 Desventajas: no permite
obtener secciones
seriadas
Micrótomo de rotación o tipo
Minot
Es el más empleado.
El portabloque se mueve de arriba abajo.
El portabloques avanza de manera
automática y constante, en cada vuelta
del mango.
 Ventajas:
 Al tener mas peso, tiene más precisión,
permite obtener secciones seriadas muy
finas.
 Desventajas:
 El elevado precio debido a la
complejidad del mecanismo de avance,
que además dificulta y encarece las
reparaciones.
 La imposibilidad de cortar con él tejidos
incluidos en celoidina, en gelatina y en
propilén glicol.
 Micrótomo de deslizamiento
 Existen principalmente dos tipos según se movilice el
portabloques, sobre la cuchilla permaneciendo esta fija, o
viceversa, en ambos casos.
 El movimiento que produce el corte es el avance y
retroceso de la porción móvil sobre unas guías metálicas.
 1º modelo: deslizantes o de tipo Leizls es más estable y
proporciona mejor calidad de corte ya que la vibración de
la cuchilla se elimina al permanecer fija.
 2º modelo: es el que tiene una cuchilla móvil también
llamado Rehicher-Jung, este modelo está en desuso
 3º modelo: este existía es el tipo tetrander que se utiliza
para realizar secciones macro-microscópicas de órganos
completos. La cuchilla está fija y lo que se desliza es el
objeto. Se monta sobre una mesa especial.
 Ventajas:
 Por su diseño ocasiona pocas averías.
 Permite regular de forma exacta la presión de la cuchilla sobre el
tejido.
 Debido al tamaño de la cuchilla permite seccionar bloques titulares
de gran tamaño.
 Por la disposición de esta cuchilla permite cortar bloques incluidos
en celoidina.
 Inconvenientes:
 No permite realizar cortes seriados, con lo cual se enlentece el
proceso.
 La exposición de la cuchilla puede provocar accidentes
 Es casi imposible obtener secciones de un espesor inferior a 8
micras.
 Micrótomo de congelación
 Se utiliza para efectuar secciones de tejido
congelado y por tanto no deshidratado. La
congelación se consigue haciendo circular CO2 por
el interior del portabloques procedente de una
bombona y de esta forma el gas cuando se
expande provoca el enfriamiento del tejido. Una vez
congelada las secciones de trabajan con una
cuchilla que se encuentra sobre un eje fijo de
manera que el avance lo realiza el portabloques por
un mecanismo directo del tornillo.
 Inconvenientes:
 Necesita CO2 y los cortes generalmente son
mayores de 10 micras y se dificulta el estiramiento.
 El microtomo de congelación ha sido desplazado
por el criostato, solo se utiliza para el sistema
nervioso, para estudios arquitecturales e
histoquímicas
Criostato o criotomo
 Consta de un micrótomo de tipo Minot. Semejante
al convencional de parafina que está incluido en una
cámara de congelación permite obtener cortes de
material sin fijar a -20ºC o incluso a -60.
 La obtención de secciones seriadas es posible gracias
a la existencia de un sistema antienrrollamiento que
obliga al corte a deslizarse sobre la superficie de la
cuchilla, en los mas modernos es posible optar por el
corte manual o motorizado, así como enfriar
rápidamente la muestra, a menos 60ºC por medio de
isopentano o nitrógeno líquido.
 Ventajas:
 Con el se obtienen cortes mas delgados que con el
micrótomo de congelación de 4 micras o incluso
 Se utiliza no solo para intraoperatorias en estudios
histoenzimáticos o inmunohistoquímicos.
Criostato - Criótomo
El uso del criostato se destina a
cortes no fijados y no incluidos

los cortes que obtendremos no

serán seriados

se recogen uno a uno y llevan

un sistema de antienrollado
(antiroll)

se extrae colocando el
portaobjetos sobre la cuchilla
sin tocarla

El corte se adhiere al
portaobjetos por efecto de la
diferencia de temperaturas
Ultramicrótomo
 El ultra micrótomo suele incorporar los siguientes
elementos:

 Sistema de iluminación múltiple con luz

incidente sobre el bloque,trasiluminación
de éste y campo oscuro.-
 Avance térmico o mecánico
controlado por un procesador que
permite el ajuste digital en pasos de 1 nm
 Platina porta cuchillas regulable y apta
para cuchillas de vidrio o diamante
 Sistema óptico con microscopio
estereoscópico de visión tridimensional
 Movimiento del brazo regulable por
motor.-
 Control para el avance macro y
micrométrico y regulación de la amplitud
velocidad de movimiento del brazo
 ULTRAMICROTOMO
• Son los micrótomos empleados para obtener
cortes ultrafinos
1.-
• Su base es la de un micrótomo de rotación
pero dotado de numerosas mejoras técnicas
2.- que permiten efectuar secciones más finas.

• tienen en común que la cuchilla está

fija,siendo el portabloques el que se mueve.
3.-

El tejido estará
El avance del bloque es regulable y, por lo tanto, incluido en plástico
permite obtener cortes a partir de 0.01µ *250ª-300A
CUCHILLAS DE MICROTOMO

Las cuchillas de micrótomo se fabrican en acero inoxidable y actualmente

son desechables.

4 TIPOS DE DISEÑO

1. BICÓNCAVA: se utiliza para cortar bloques de parafina en el

micrótomo de balanceo y en el de rotación; su principal inconveniente
es que vibran demasiado, pero si el tejido es blando se consiguen cortes
excelentes.
2. PLANO-CÓNCAVA: también denominadas A y B según sea mayor o
menor la concavidad de la cara no aplanada.

La A se emplea para cortar bloques de parafina en el microtomo de

deslizamiento mientras que la B se utiliza sobre tejidos incluidos en celoidina.

3. BIPLANA CON FACETA: se emplean para cortar los tejidos congelados

en micrótomos de gas carbónico, o bien cuando trabajamos con un tejido
muy duro.
4. BIPLANA: también llamada en cuña o de tipo C, se utilizan para
cortar bloques de parafina en micrótomos Minot o tejidos congelados
en el criostato. Es un tipo de cuchilla polivalente, por lo que se puede
utilizar para casi cualquier tipo de tejido, razón por la cual se impone
como la más frecuente en la práctica.
 Las cuchillas deben estar inclinadas en relación al plano de corte

ANGULO
Los mayores problemas que plantea la obtención de secciones en el micrótomo de
rotación derivan de una inadecuada orientación de la cuchilla.
Existen cuatro ángulos de control de la incidencia del bloque sobre lacuchilla:
ángulo de inclinación (I), ángulo de arrastre (A), ángulo de corte (C) y ángulolibre
(L).

30º

60º

5 y 8º

10 – 15°
ANGULO DE INCLINACION
 Las cuchillas deben estar inclinadas en relación al plano de corte

TIPOS DE CUCHILLAS PARA CADA MICROTOMO

Son fundamentales para la calidad del corte, ya que ésta depende

principalmente del estado general de la cuchilla.

1. CUCHILLAS DE ACERO y METAL: acero inoxidable, desechables.

2. CUCHILLAS DE VIDRIO: Son las que se emplean habitualmente
debido a su bajo coste y a que son desechables.

El vidrio que se utiliza es un vidrio cuya cristalización se lleva a cabo en

condiciones especiales de temperatura para evitar las tensiones
intramoleculares del mismo para que, cuando este vidrio se rompa para
fabricar la cuchilla, se dé origen a un filo muy nítido y cortante.
3. CUCHILLAS DE DIAMANTE:

Son de tipo multiuso y mucho más caras que las cuchillas de vidrio (3.000
€/unidad).

Su filo se obtiene mediante pulimentación.

Se emplean sobretodo para cortar tejidos muy duros, como los tejidos que
están calcificados o impregnados metálicamente, así como algunos tejidos no
animales y diversos minerales.

Antes de fijar la cuchilla al soporte del ultramicrotomo deberá colocarse

sobre ella un pequeño baño de flotación para recoger los cortes (si no lo trae
incorporado).
AFILADO, CONSERVACIÓN Y RENDIMIENTO
DE LA CUCHILLA

Los sistemas automáticos de afilado se basan en el empleo de máquinas de

afilar provistas de piedras giratorias a las que se agregan abrasivos y aceites
minerales. Desde el os primitivos modelos en los que el ajuste se realizaba
manualmente, se ha progresado hasta modernos instrumentos que permiten
controlar y modificar exactamente el ángulo de bisel según las necesidades
del caso (generalmente entre 15 y 80º).
•PORTACUCHILLAS: consiste en un dispositivo de fijación basado en una
pinza que sujeta y orienta adecuadamente la cuchilla. Esta pinza permite variar el
ángulo de inclinación de la cuchilla, así como su grado de aproximación al
portabloques.

•MECANISMO DE AVANCE DEL PORTABLOQUES SOBRE LA

CUCHILLA: sistema mecánico o electrónico que proporciona cortes
sucesivos de tejido a partir del bloque. Actualmente se consiguen cortes de
hasta 1µ
CORTES

OBTENCION DE CORTES FINOS : el tejido incluido en parafina

no puede ser seccionado a más de 20µ de grosor (1 A 10 um)

OBTENCIÓN DE CORTES SEMIFINOS

Entre 0.5 y 1µ de espesor que es teñida con una coloración estándar

de microscopía óptica (generalmente azul de toluidina ) o bien es
observada directamente al microscopio de contraste de fase con la
finalidad de comprobar previamente la naturaleza de las estructuras
contenidas en el tejido.

OBTENCION DE CORTESULTRAFINOS : Pueden ir 0.01

um
TECNICA
TECNICA
TECNICA
 Soluciones adherentes para porta
objetos
Albumina glicerinada de Meyer
Gelatina

Resinas y otros adhesivos de gran potencia:

resinas acrílicas de tipo araldita y epoxirresinas.(máx. adh.dificil manejo)

Habitualmente se utiliza una solución de resina en acetona en proporción 1:10
La poli-l-lisina constituye base para todos los portaobjetos comercializados como
el adhesivo incorporado (excelente con una min impreg , para los colorantes, y rvos
inmunológicos es de elección para tec . Inmunohistoquimicas sobre todo para
biología molecular en gral)
MEDIO DE INCLUSION

CELOIDINA no conservan sus propiedades de

consistencia

obtenidas en parafina, resinas plásticas o congelación

DEPENDIENDO DEL MICROTOMO.
Conclusiones

Es necesario conocer cada uno de los

micrótomos para darle su debido uso.
poseen idénticos principios básicos de
funcionamiento.
Para obtener un buen corte necesitamos de
una buena cuchilla, la cual dependerá para
una buen estiramiento del tejido , observación
tras su coloración
 BIBLIOGRAFIA
 http://etimologias.dechile.net/?microtomo
 http://es.scribd.com/doc/53678729/Tema-
5-El-Microtomo
 http://books.google.com.pe/books?id=5aD
01sQ9v3wC&pg=PA63&dq=microtomia&
hl=es&sa=X&ei=FCJ_Ub-NMqfC4AO-
_4CADw&ved=0CDAQ6AEwAA#v=one
page&q=microtomia&f=false
 http://es.scribd.com/doc/53678729/Tema-
5-El-Microtomo
GRACIAS