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AISLAMIENTO MICROBIANO:
TCNICAS DE AISLAMIENTO
MG. SONIA HERRERA SANCHEZ
MICROBIOLOGIA
INTRODUCCION(1)
En la naturaleza, la mayora de los microorganismos no se
encuentran aislados, sino integrados en poblaciones mixtas.
Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y de
sus propiedades, es necesario separar unos de otros y
trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axnicos
o puros.
Un cultivo axnico o puro es aquel que contiene un slo tipo
de microorganismo y que procede generalmente de una sola
clula; el crecimiento de sta origina, en medio slido, una
masa de clulas fcilmente visible que recibe el nombre de
colonia.
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INTRODUCCION(2)
Para obtener cultivos axnicos o puros a partir de una poblacin
microbiana mixta, se utilizan las denominadas tcnicas de aislamiento,
que fueron desarrolladas durante el siglo XIX.
En un principio, Lister utiliz diluciones seriadas en medio lquido con
esta finalidad, pero la presencia de contaminacin, es decir, de
microorganismos no deseados, dificult el aislamiento.
La escuela de Robert Koch introdujo los medios slidos,
complementados con agar, y las placas de Petri en Bacteriologa,
permitiendo as la separacin fsica de las colonias sobre la superficie del
medio de cultivo o en el interior del mismo.
El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies
microbianas
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METODOS DE AISLAMIENTO
Para aislar clulas individuales, los microorganismos han de
ser diluidos, debido al gran numero en que normalmente estn
presentes.
La dilucin se realiza, normalmente, por uno de los siguientes
sistemas:
Siembra por estra en placa
Vertido en placa
Extensin en placa.
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Mediante esta tcnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que
contenga un elevado nmero de bacterias.
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RESULTADOS
A) EXTENSIN EN SUPERFICIE
Tras el perodo de incubacin se examinarn las placas. Las colonias
aparecen sobre la superficie, distribuidas uniformemente si la siembra se
ha realizado de forma correcta. Podrn diferenciarse las colonias de
acuerdo a su tamao, forma, color, textura, etc.
Esta tcnica de siembra, adems de permitir que se distingan las colonias
por su morfologa, permite el recuento de microorganismos viables.
La expresin de este recuento se hace en "unidades formadoras de
colonias" (UFC) ya que cada una procede de un slo microorganismo (o
de un grupo de microorganismos, pues en algunos casos stos tienden a
formar agregados). A partir de las colonias aisladas, los microorganismos
pueden transferirse a otros medios de cultivo para su estudio.
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C) DILUCIN EN MASA
Aparecen las colonias distribuidas por toda la masa
del agar. Aquellas que estn en la superficie tendrn
distintas caractersticas, dependiendo del tipo
microbiano, mientras que las colonias que se
desarrollan en el interior, bajo la superficie del agar,
tienen forma lenticular, aunque los microorganismos
que formen las distintas colonias sean de distinto tipo.
Por tanto, las colonias que aparecen en la profundidad
del agar son siempre biconvexas y no se diferencian
unas de otras por su morfologa.
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Se busca tomar trozos de la zona de avance para incrementar las chances de aislar al
patgeno.
Los trozos de tejido vegetal se someten a una desinfeccin superficial.
En el caso de bacterias es posible macerar un trozo de tejido afectado y luego sembrar
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