Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

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PRCTICA
Estudio de algunos factores que afectan el establecimiento de un
mtodo espectrofotomtrico.

Nombre: Rodrguez Elizarraras Miguel ngel

Grupo: 5QM1
Seccin: 2
Fecha de entrega: 27-oct-15
Nombre profesora: Marco

Objetivos

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Seleccionar tubos comunes de laboratorio para usarlos

como cubetaspara el espectrofotmetro.
Manejar algunos de los parmetros que intervienen en el
establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico.
Establecer las condiciones ptimas de losparmetros probados
para la aplicacin del mtodo.
Fundamento
El fundamento del equipo se basa en la cantidad de luz que es absorbida
y en la cantidad de luz que es transmitida cuando se le incide un haz de
luz monocromada a una muestra colorida, la resultante de la suma de la
luz transmitida ms la absorbida nos da igual a la intensidad de la luz
que le hacemos incidir. La eleccin de tubos adecuados se fundamenta
en escoger los que sean de paredes pticamente equivalentes y
dimetros regulares equivalentes. La reaccin se fundamenta en la
formacin de un complejo colorido entre el ion frrico presente en algn
tipo de muestra con el tiocianato, este complejo es de color rojo y puede
cuantificarse a 480 nanmetros.
Determinacin de Hierro. (Mtodo del Tiocianato.)
El hierro reacciona con el tiocianato dando un compuesto, soluble, de
color rojo intenso; el hierro ferroso no reacciona con el tiocianato.
Generalmente se supone que el color se debe al tiocianato frrico. El ion
frrico, Fe+++, da con el tiocianato distintos complejos de color rojo. El
complejo que predomina en solucin depende de la concentracin del
tiocianato. Al aumentar la concentracin de tiocianato, aumenta la
longitud de onda que corresponde a la absorcin mxima. Hay que
emplear gran exceso de tiocianato para aumentar la intensidad de la
coloracin. Deben estar presentes cidos fuertes (cido clorhdrico o
ntrico, concentracin 0.05 - 0.5 N) para evitar la hidrlisis del ion frrico.
No se recomienda el empleo de cido sulfrico porque los iones sulfato
forman complejos (poco estables) con el ion frrico.

+
6

Fe(aq) + SCN
+
3

(FeSCN)(aq)

DATOS EXPERIMENTALES
Tabla 1. Seleccin de tubos para ser usados como celdas.
Tubo No.

%T400 (H2O)

Tubo No.

%T400 (H2O)

Tubo No.

%T400
(NiSO4)

1
2
3
4
5

95
94.2
94.6
95
94.2

16
17
18
19
20

94.6
94.8
96.2
95
95.2

1
2
3
4
5

24.2
24
23.8
23.6
24.4

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94.3
95
96.2
96.4
95
93.8
94.2
96.4
95.2
95

7
8
9
10
11
12
13
14
15

6
7
8
9
10
11
12
13
14
15

24.6
24.6
24.8
23.4
23.6
23.4
23.8
24
24.6
24.8

-Explique, Qu son las superficies pticas equivalentes y el dimetro

interno
equivalente?
Las superficies pticas equivalentes de un conjunto de cubetas son
aquellas que estn libres de imperfecciones en la superficie, poseen una
superficie homognea, paredes de igual grosor, desvan la luz y
producen efectos pticos idnticos o similares. El dimetro interno
equivalente se refiere a que la luz atraviese la misma distancia en todas
las celdas, es decir, que el paso de luz sea el mismo en todos los tubos.
Tabla 2. Curva de calibracin de Fe+3 por el mtodo de NH4SCN.
Ejemplo del clculo de la A ajustada
(Concentracin del ion Fe+3)(Pendiente)
(0.0697)(0.1502): 0.0101
Tubo No.

Fe3+ (g/mL)

A480

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13

0
0.0697
0.1743
0.3487
0.6974
1.0461
2.4411
3.8360
5.2309
6.6258
8.0207
9.4157
10.8106

0
0.005
0.024
0.076
0.112
0.183
0.420
0.620
0.847
1.059
1.265
1.410
1.594

A ajustada por
regresin lineal
0
0.0104
0.0261
0.0523
0.1011
0.1571
0.3666
0.5761
0.7856
0.9951
1.2047
1.4142
1.6237

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Curva de calibracin de fe+3 por el mtodo del NH4SCN

1.8
1.6 f(x) = 0.15x + 0.03
R = 1
1.4
1.2
1
Absorbancia

Fe+3, curva de calibracin

Linear (Fe+3, curva de
calibracin )

0.8
0.6
0.4
0.2
0
0

10

12

Concentracion de Fe3+ (g/mL)

-Sigue esta reaccin la ley de Bouger y Beer? Explique.

Podemos concluir que el coeficiente de correlacin de la curva de
calibracin se aproxima al valor de uno, todos los puntos siguen una
tendencia lineal, por lo cual existe una relacin de proporcionalidad
entre la absorbancia y la concentracin del in frrico y por lo tanto se
cumple con la ley de Bouger y Beer.
-Comente acerca de la sensibilidad del mtodo, el intervalo de
concentracin y escala de lectura til del aparato.
Como sabemos el valor de la pendiente determina la sensibilidad del
mtodo, en este caso se tiene una pendiente con un valor de 0.1502, es
decir, se produce un cambio de absorbancia de 0.1502 por cada
incremento de concentracin de analito de una unidad (1 g/mL). Con

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respecto al Intervalo de concentracin, se tiene que este va

de 0.06973-10.8106 g/mL de in frrico, que corresponde al intervalo
donde se obedece la ley de Bouger y Beer; la escala til de absorbancia
es de 0.005-1.594.
Tabla 3.1 Mtodo de Ringbom para determinar el %Ep.
Tubo No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13

Fe3+
(g/mL)
0
0.0697
0.1743
0.3487
0.6974
1.0461
2.4411
3.8360
5.2309
6.6258
8.0207
9.4157
10.8106

Log(Fe3+)

A480

%T

Absorbancia

0
-1.1567
-0.7587
-0.4575
-0.1565
0.0195
0.3875
0.5838
0.7185
0.8212
0.9042
0.9738
1.0338

0
0.005
0.0246
0.076
0.112
0.183
0.420
0.620
0.847
1.059
1.265
1.410
1.594

0
98.85
94.49
83.94
77.26
65.61
38.01
23.98
14.22
8.72
5.43
3.89
2.54

0
1.15
5.51
16.06
22.74
34.39
61.99
76.02
85.78
91.28
94.57
96.11
97.46

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Metodo de ringbom para determinar el % Error

120

100

80

60

Absorbancia

% Error

40

20

-1.5

-1

0
0

-0.5

0.5

1.5

Log(Fe3+)

* Intervalo de Fe3+ [0.0195-0.7185] su absorbancia [34.39-85.78]

Ya que en esta parte el intervalo se mantiene en una relacin lineal entre
A y el Fe3+ cumpliendo con la ley de Bouger y Beer.
* Determinacin de la pendiente:
m: 73.51

%Error: 230.3/73.51
%Error: 3.1329

Tabla 3.2 Lmite de deteccin del mtodo

Numero
1
2
3
4
5
6

Fe3+ (g/mL)
0
0.0697
0.1743
0.3487
0.6974
1.0461

Y
0
0.005
0.0246
0.076
0.112
0.183

Yi
0
0.0104
0.0261
0.0523
0.1011
0.1571

2.4411

0.420

0.3666

3.8360

0.620

0.5761

5.2309

0.847

0.7856

(y-yi)2
0
0.00002916
0.00000225
0.00056169
0.00011881
0.00067081
0.00285156
0.00192721
0.00376996

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10

6.6258

1.059

0.9951

11

8.0207

1.265

1.2047

12

9.4157

1.410

1.4142

13

10.8106

1.594

1.6237

0.00408321
0.00363609
1.764E-05
0.00088209
: 0.01855048

Sy/x = (0.01855048/13-2)^1/2: 0.04106

Curva de calibracion entre Observada y calculada(LDD)
1.8
1.6
1.4

f(x) = 0.15x + 0.03

R = 1

1.2
Y

1
Absorbancia

Linear (Y)

0.8

Yi

0.6
0.4
0.2
0
0

10

12

Concentracin Fe3+

LDD=3SBb
LDD= (3)( 0.04106)/(0.1502)= 0.8201 g/mL Fe3+

Tabla 4. Efecto del tiempo en la estabilidad del color

Tiempo (min)
0
30

A480
0.964
0.911

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60

0.869
0.827
0.703

90
120

Estabilidad del color con respecto al tiempo

1.2
1
0.8
Absorbancia

Estabilidad del color con

respecto al tiempo

0.6
0.4
0.2
0
0

20

40

60

80 100 120 140

Tiempo

-Es el color estable?

No, ya que se observa que el color va disminuyendo con respecto al
tiempo
-Cul es el tiempo ptimo para hacer las lecturas?
Entre los 60 y 120 minutos, ya que en este intervalo es donde se
observa menor variacin entre los datos.

Tabla 5. Efecto de la concentracin de SCN- en la determinacin de Fe3+

Tubo No.

SCN- (g/mL)

1
2
3
4
5

Fe3+
(g/mL)
0
20.925
20.925
20.925
20.925

SCN/Fe3+

A480

0
86.752
231.338
867.521
2891.736

0
0.132
0.247
0.428
0.588

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20.925
20.925
20.925
20.925

7
8
9

5783.47
8675.205
11566.94
14458.67

0.621
0.705
0.764
0.760

Efecto de la concentracin de SCN- en la determinacin de Fe3+

0.9
0.8
0.7
0.6
Efecto de la concentracin de
SCN- en la determinacin de
Fe3+

0.5
Absorbancia

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

5000

10000

15000

20000

SCN/Fe3+

-Qu concertacin de tiocianato recomienda?

Se recomienda una concentracin saturada de tiocianato, porque se
observ en la grfica que a concentraciones muy altas en nuestro caso a
partir de 8675.205 se da la mayor absorbancia por parte del complejo
colorido.
Tabla 6. Efecto del pH en el desarrollo de color de la reaccin
entre el Fe3+ y el SCN-.
Tubo No.
1
2
3
4
5
6

pH
1
1
1
6
8

A480
0.808
0.918
0.907
0.013
0.012

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Efecto del pH en el desarrollo de color de la reaccin entre el Fe3+ y el SCN-.

1
0.9
0.8
0.7
0.6
Absorbancia

Efecto del pH en el desarrollo

de color de la reaccin entre
el Fe3+ y el SCN-.

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

pH

-De qu manera influye el pH en el sistema colorido?

La forma en la que el pH influye en el sistema es un pH cido favorece la
reaccin al haber una concentracin de H+ en el medio, sin embargo,
conforme aumenta el pH, la concentracin de OH se va incrementando
y al ser ms electronegativo este in, compite con el SCN- formando un
producto de reaccin diferente al deseado.
Cul es el pH recomendado para que se efectu la reaccin?
El pH recomendado es de 1 a 3, ya que observamos los puntos ms altos
de absorbancia en estos valores de pH.
Tabla 7. Efecto de algunos aniones sobre la absorbancia
absoluta
Anin
A480 Inicial
A480 Final
Fluoruro
0.893
0.885
Oxalato
0.915
0.201|

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Tartrato
Fosfato

0.895

0.551

0.903

0.840

Efecto de algunos aniones sobre la absorbancia absoluta

Absorbancia

1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0

Fluoruro inicial
Fluoruro final
Oxalato inicial
Oxalato fianal
Tartrato inicial
Tartrato fianal
Fosfato inicial
Fosfato final
1
Anin

Cul es el efecto de los diferentes aniones sobre la reaccin entre el in

frrico
y
el
tiocianato?
El efecto es una competencia entre algunos aniones, como el tartrato y
oxalato por el hierro mientras que el fluoruro y el fosfato no presentan
algn efecto.

A qu se debe ese efecto?

A la diferencia de electronegatividades, mientras mayor sea la
electronegatividad del anin en comparacin con la del SCN-, se
favorecer el desarrollo otra reaccin a la que se quiere estudiar.
Tabla 8. Parmetros ptimos para el mtodo del tiocianato de
amonio para determinar iones frricos.
Parametro
pH
Tiempo
Concentracin de SCN-

Valor Optimo
1-3
60 y 120 minutos
Una concentracin saturada de tiocianato,
porque se observ en la grfica que a
concentraciones muy altas en nuestro
caso a partir de 8675.205 se da la mayor
absorbancia por parte del complejo

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colorido.

Lmite de concentracin con % Ep

minimo
Aniones que interfieren (en orden
creciente)
Lmite de deteccin del mtodo
(LDD)

3.13%

Tartrato y Oxalato
0.8201 g/mL Fe3+

Discusiones
Empezamos con la seleccin de los tubos para ser usados como cubetas
y se toman como criterios el que la superficie de los mismos sea
homognea y de igual grosor, para que de esta manera se produzca una
dispersin de la luz anloga en todos los tubos, esto se logr al fijar un
valor de transmitancia arbitrario (%T=95) de tal forma que la lectura del
aparato no fuera mayor a 2%T. En nuestro caso los 20 tubos
seleccionados entraron en los criterios ya mencionados, una vez
realizado esto se procedi a realizar una curva de calibracin de fe3+
por el mtodo de NH4SCN donde existe una tendencia lineal en la curva
tipo, as que podemos decir que la curva cumple la ley de Bouger y Beer,
lo que podemos comprobar observando la ecuacin obtenida a partir del
grfico, en particular el valor de R2 o sea del coeficiente de correlacin
el cual es muy cercano a uno. Para el mtodo de ringbom se determinar
el intervalo ptimo de concentraciones y se realiz la linealizacin de la
curva para marcar el intervalo ptimo de concentraciones y obtener la
ecuacin de la recta para el clculo del error fotomtrico que fue de
3.13% lo que nos indica que se realiz un trabajo aceptable ya que el
porcentaje del error fotomtrico debe de ser menor o igual al 5% porque
ese es el error que manejan los espectrofotmetros que se encuentran
para uso en el laboratorio.
El lmite de deteccin del analito se puede definir como la concentracin
de analito que proporciona una seal igual a la seal del blanco ms tres
veces la desviacin estndar del blanco. Esto nos sirve para calcular la
concentracin mnima de analito que puede detectar nuestro mtodo
espectrofotomtrico, el cual se calcul mediante la desviacin estndar
del blanco y al sustituirlo en la ecuacin se encontr que este es de
0.8201 g/mL.
Una vez realizado esto se procedi a estudiar algunos factores que
afectan el diseo de un mtodo espectrofotomtrico, entre los cuales se
tienen los siguientes:
-Estabilidad del color en funcin del tiempo: la formacin de color se
llev a cabo de manera rpida experimentando un desvanecimiento al
incrementarse el tiempo de reposo, probablemente debido a la
descomposicin por la luz y/o por el calor, por lo cual no es estable el
color. Lo ideal sera que la reaccin de formacin de color sea rpida
para que los resultados analticos puedan obtenerse con rapidez, y que

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las especies coloreadas sean estables con el tiempo de forma

que no sea necesario realizar el anlisis en un tiempo prefijado.
-Efecto de la concentracin del cromgeno: se encontr que la
concentracin de tiocianato ptima para esta reaccin debe ser una
concentracin saturada de tiocianato, porque se observ en la grfica
que a concentraciones muy altas en nuestro caso a partir de 8675.205
se da la mayor absorbancia por parte del complejo colorido ya que a
esta concentracin la reaccin es prcticamente completa al haber
cantidades estequiomtricas de los reactivos, provocando que la adicin
de ms cromgeno de cmo resultado pequeos incrementos de la
absorbancia. Si por el contrario, la reaccin no es completa, la adicin de
cantidades crecientes de cromgeno, desplazar el equilibrio hacia la
formacin de ms especie coloreada, provocando un aumento en la
absorbancia.
-Efecto del pH: En nuestro caso el pH ptimo para que se lleve a cabo la
reaccin es de 1-3, al ir aumentando el pH, se incrementa la cantidad de
OH en el medio y al ser esta especie ms electronegativa que el
tiocianato se favorece otra reaccin a la que se pretende estudiar.
Cuando el control de pH es muy crtico se deben utilizar soluciones
reguladoras, o bien, ajustar el pH al valor deseado con ayuda de un
potencimetro.
*Efecto de algunos aniones: En este caso la diferencia de
electronegatividades
de
algunos
aniones
produce
reacciones
indeseables que modifican la formacin del color; tal es el caso del
Tartrato y del oxalato que al ser ms electronegativos que el tiocianato,
reaccionan con el Fe3+ originando otra sustancia con coloracin
diferente. En el caso del fosfato y fluoruro se produce una disminucin
pequea en la absorbancia, ya que la mayor parte del fierro reacciona
con el tiocianato y esto nos indica que no hay una gran diferencia en
electronegatividades entre estos dos aniones.
Conclusiones
Es posible usar tubos normales de ensaye como cubetas siempre y
cuando cumplan con ciertas caractersticas.
Los parmetros que pueden interferir en un mtodo
espectrofotomtrico son: pH, tiempo, temperatura, concentracin
del cromgeno, etc
La grfica de Ringbom permite determinar los lmites de
concentracin donde se presenta el mnimo error fotomtrico.
Bibliografa

Ayres. G.H. 1970. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 edicin.

Editorial Harla. Mxico, D.F. Pp. 475-488.

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Miller, J.C & J.N. Miller. 2002. Estadstica y Qimiometra

para Qumica Analtica. 4 edicin. Editorial Prentice Hall. Mxico,

Pp. 125-130.