AMINOACIDOS Y PROTEINAS

I. INTRODUCCIN:
En el presente tema abordaremos aspectos generales sobre estructura y funcin
de los aminocidos y las protenas en el organismo, as como de los medios de
laboratorio para identificar a los mismos.
Por la importancia y el papel que desempea las protenas, es necesario conocer
la funcin de un grupo de ellas, como las protenas plasmticas, para tal efecto
realizaremos una revisin general de las mismas.
II. OBJETIVOS:
Conocer y determinar las diferentes propiedades fsicas y qumicas de los
aminocidos y protenas
Evaluar mediante pruebas fsicas y qumicas la presencia de aminocidos y
protenas en las diferentes muestras.
Emplear tcnicas de reconocimiento de aminocidos y de protenas.
III. FUNDAMENTO TEORICO:
Las protenas son bipolmeros de alto peso molecular, conformadas por unidades
monomricas bsicas, denominadas aminocidos, de los que 20 son
biolgicamente importantes. La unin entre aminocidos se forma mediante la
interaccin del grupo carboxilo de un aminocido con el grupo amino de otro para
formar un enlace peptdico. Siendo as que la adicin secuencial de aminocidos
origina un pptido y finalmente una protena.
Las protenas forman estructuras de diversas complejidad que podemos resumir
en las siguientes caractersticas biolgicas:
-

Ejercen y tienen relacin estrecha entre estructura y funcin (las del msculo
actan transluciendo energa mecnica).

Disponen de flexibilidad importante de su estructura, de ah su diversidad

infinita (hemoglobina, miosina , albmina, colgeno y todas en s).

Disponen de un mecanismo de formacin que posee fidelidad absoluta e

inmutable para cada protena (esto quiere decir que cada protena tiene una
funcin determinada en el organismo).
Entre las caractersticas fsicas y qumicas de las protenas sealamos las siguientes :

La gran masa molecular de las protenas determina su carcter coloidal en

soluciones acuosas, por lo que su dimetro en solucin es mayor a 0,001 um.
Esta propiedad coloidal les confiere una gran afinidad hacia el agua, siendo
por esto muy soluble en ella. Otras propiedades coloidales caractersticas de
las protenas son: sus diluciones tienen aspecto opalescente; producen el
fenmeno de Farady-Tyndall (ver difraccin); movimiento browniano (es el
movimiento permanente y desordenado de las partculas de materia muy
pequea (de micrmetros solamente) en el seo del agua y otros lquidos; se
debe a los choques de las partculas con las molculas del lquido, las cuales
segn la teora cintica de la materia, se hallan sometidas constantemente a
la agitacin trmica); no son filtradas por ultrafiltracin; poseen presin
osmtica, pueden ser separadas de otros compuestos por dilisis a travs de
una membrana semipermeable.

La solubilidad proteica en agua, les permite formar sales en agua y

disoluciones acuosas de sustancias polares. Esta propiedad esta ligada a la
hidratacin de sus molculas, por esto, cualquier factor que altere esta
propiedad provocar la disminucin de su solubilidad en agua y su
consecuente precipitacin. Esto ltimo podra lograrse al agregar a una
solucin acuosa proteica compuesta deshidratantes como alcohol, acetona,
soluciones de sales neutras de metales alcalinos y otros compuestos que
lograran la precipitacin proteica. Esta precipitacin (con sales alcalinas) no
produce la desnaturalizacin de las protenas, es as, que este procedimiento
es usado para separar protenas y mantener su actividad biolgica; l que no
ocurre si se utiliza metales pesados (acetato de plomo). En resumen, la
precipitacin de protenas, consiste en la prdida de sus propiedades

hidrfilas, adquiriendo caractersticas hidrfobas, con prdida de carga

elctrica.
-

Las protenas se comportan tambin, como electrlitos anfteros, es decir

que poseen simultneamente caractersticas de cidos y bases; se debe
tomar en cuenta que esta propiedad proteica deriva de sus bases
estructurales, los aminocidos. Un grupo anftero, como un aminocido,
puede disociar sus grupos amino y carboxlico de acuerdo al pH del medio,
siendo as que en medio cido, una protena se cargar positivamente y en el
medio alcalino ocurrir lo contrario.
Esta propiedad de los aminocidos en la estructura proteca, es utilizada para
la identificacin de las protenas por medio de la electroforesis o cromatografa
(esta ltima para diferenciar aminocidos y protenas).

Todas las reacciones para identificar aminocidos y protenas estn basadas

en la presencia de grupos qumicos, en los enlaces o en sus propiedades
fsico-qumicas. Las reacciones de reconocimiento pueden dividirse en dos
grupos independientes:

a.

Reacciones de precipitacin: que a su vez, pueden subdividirse en dos

grupos:
Precipitacin de protenas sin desnaturalizacin, por ejemplo utilizando sulfato
de amonio ((NH4)2SO4), cloruro de amonio (NH4Cl) o sulfato de sodio
(Na2SO4)
Precipitacin de protenas con desnaturalizacin que utilizan sales de metales
pesados (sales de plomo, de cobre, de mercurio y otras), o la temperatura
mayor a 80C, cidos inorgnicos y orgnicos

b.

Reacciones coloreadas: como la reaccin de Biuret, de la ninhidrina, del

cido perico, la xantoproteca, la Millon y muchas otras. Estas reacciones
permiten identificar a ciertos grupos de aminocidos de acuerdo a los grupos
funcionales que contengan.
En la prctica incidiremos en identificar aminocidos y protenas de diferentes
soluciones proteicas, por medio de estas tcnicas sencillas, que no implican el
uso de instrumentos sofisticados (hoy en da se disponen de tcnicas de

identificacin de aminocidos y protenas altamente especializadas, como

diversas formas de cromatografa automatizada, secuenciacin de protenas,
electroforesis

otras

que

pueden

ser

consultadas

en

libros

de

especializacin).
Las protenas son sustancias anfteras que pueden reaccionar con H2O de
una de estas 2 maneras:
Protena - COO- + H2O
NH3+

Protena - COO- + H2O

NH3+

Protena - COOH + OHNH3+

Protena - COOH + H3O

NH2+

Segn el nmero relativo de grupos carboxilo y amino libres en la molcula, la

protena en solucin dar reaccin cida o bsica. En otras palabras, algunas
molculas de protena en solucin acuosa se cargan positivamente y otras se
cargan negativamente. Para hacer una protena elctricamente neutra, en
solucin acuosa es necesario generalmente aadir una pequea cantidad de
cido o base de Bronsted. El pH en el que una protena determinada es
elctricamente neutra se conoce como punto isoelctrico de esa protena.
Todas las protenas son menos solubles en el punto isoelctrico y, algunas,
como la casena, la metaprotena, son insolubles.
Para la hidrlisis cida de una protena en los aminocidos que la componen
Se requiere una emisin de flujo muy prolongada.
Son macromolculas construidas a base de aminocidos, unidos por enlace
Peptdico as:

NH2 - C - H + H N H - C -

NH2 - C - H + NH -

C -

H + H2O
|

|
H2O

COOH

CO

COOH

Enlace peptdico

Las protenas contienen C, H, O, N, casi siempre S, a menudo P y a pequeas

cantidades de metales como MN, Fe, Mg, etc.
Actualmente hay ms de 26 aminocidos reconocidos, de estos unos 10 se
designa como aminocidos esenciales, ya que no pueden ser sintetizados por el
organismo, sino que son: Arginina, histidina, leucina, isoleucina, lisina, metionina,
fenilalanina, triptofano, treonina, valina varan algo, segn la especie animal.
Tanto aminocidos como protenas tienen carcter anftero, propiedad que deriva
de la presencia de los grupos cidos (carboxilo: -COOH); y bsicos (amino: -NH2),
simultneamente

en la molcula, cuya interaccin intramolecular cido-base

origina una forma bipolar: Zwitterion. Cualquier variacin del pH del medio dar
lugar a que predomine una de las cargas, de aqu que se puede comportar como
cido base, segn el pH del medio, as:
R

NH2 - C - H

R
|

(+)

NaOH + H3N - C - H + HCL NH3 -

C -

H
|

COOH

COO-

COOH

Anin

Zwitterion

Catin

Las protenas pueden ser desdobladas para crear formas intermedias de tamao
y diferentes propiedades, y esto se logra por medio de cidos, bases, enzimas: los
productos de la degradacin proteica, en orden decreciente de tamao y
complejidad son: Protenas proteasas peptonas polipticos - ppticos
aminocidos amoniaco nitrgeno elemental.
Las desnaturalizacin de protenas esta relacionada con cualquier modificacin de
su estructura, sin rompimiento del enlace peptdico. Esta se puede lograr con el
calor, sustancias qumicas, alcoholes, bases, etc.
Las reacciones cromticas son reacciones coloreadas de reconocimiento de las
protenas, generalmente de las protenas conjugadas que presentan ciertos
aminocidos especficos. Por ejemplo: la reaccin Xantoproteica: sirve para
reconocer ncleos aromticos.

III.- MATERIALES

Mechero Bunsen

Vaso de precipitados

Tubo de ensayo

Gradilla

Pinzas

Piceta

Reactivos

Muestra Problema( clara de huevo , leche evaporada ).

NaOH

CuSO4

HNO3

Reactivo Milln ( HNO3 + Hg0 )

AgNO3

Acido Actico

Acido Nitrico

PARTE EXPERIMENTAL
REACCION CON LOS METALES PESADOS
En un tubo de ensayo se agrega albmina y luego se le echa AgNO3 a otro tubo
de ensayo albmina y CuSO4 de esta forma observamos si se forma algun ppdo.
Si esto ocurre entonces se trata de una protena.

a) Con el sulfato de Cobre , CuSO4

- ALBUMINA

CH2 CH COOH

CH2 CH-COO -

+ CuSO4

NH2

NH2

Celeste lechoso
- CASEINA

COO-

COOH
H2N

CuSO4

R2

H2N C - H
R2
Celeste lechoso

b) Con el Nitrato de Plata, AgNO3

- ALBUMINA

Cu

+ SO42-

CH2 CH COO-

CH2 CH - COOH + AgNO3

NH2

NH3

blanco

- CASEINA
COO-

COOH
H2N C H

AgNO3

H2N C H

R2

Ag

NO3-

R2

REACCION DE BIURET ( REACCION DE FEHLING )

Es la formacin de compuestos coloreados de violeta de las protenas en medio
fuerte alcalino de las sales de Cu la reaccin empleada mediante ROONH2 , R
CS NH2 , en un tubo colocar 2 ml de albumina + 3ml de NaOH + gota a gota
CuSO4 hasta dar ppdo. Violeta.
- CON ALBUMINA

CH2 CH COOH

NaOH

CuSO4

NH2

CH2 CH H2N

OC-O
Cu

CO O

M2N C CH2

Na2SO4

H2O

- CASEINA
COOH
H2N C H

NaOH

CuSO4

R2

R2 CH H2N

O = CO
Cu

Na2SO4

H2O

NH2 CH R2-

CO - O
(morado)

REACCION DE XANTOPROTEICA
A cada uno de los tubos se le agrega cido ntrico e hidrxido de sodio y notamos
Lo siguiente.

- ALBMINA : da una coloracin amarilla al ppdo.

NaOH
CH2 CH COOH + HNO3

NO2

NH2

- CASEINA : da una coloracin amarillenta al ppdo.

NO2
NaOH
H2N C H

HNO3

R2

OH

REACCION DE MILLON
A cada uno de los tubos se le agrega el reactivo MILLON que es ( Hg0 + HNO3)
- ALBUMINA
Hg
CH2 CH - COOH

NH2OH
Hg

NH2

CH2 CH C6H5

NO2-

NO3-

NH2
(Rosado)

- CASEINA

Hg
H2N C H

NH2OH

Hg

R2

Hg
( rojo)

IV.CONCLUSIONES:

Cuando se hierve la solucin de una protena con otra sea nitrato y nitrito
mercrico, se forma un cogulo o una coloracin rojo pardo. Se debe al grupo
fenlico.

Cuando las protenas se tratan por cidos ntrico concentrado dan una
coloracin amarilla que pasa a naranja por adiccin de amoniaco. Se debe a
los ncleos aromticos que se nitran formando cidos pcrico y despus de
amonio por el amoniaco.

Es la coloracin amarilla que se produce en la piel en contacto con HNO3

Si a la solucin de la protena se agrega unas gotas de solucin de sulfato de

cobre, aparece una coloracin violeta, la dan las protenas y polipptidos, pero
no los aminocidos y los dipptidos y se debe a la presencia de los enlaces
peptdico.

Los reactivos de los alcaloides dan precipitado con la mayora de las protenas.

Debido a su carcter anftero, las protenas reaccionan con los cidos y con
las bases. Los cidos proteicos y alcali proteicos son insolubles en agua y en
solucin de sales neutras y se disocian en los cidos y en las bases diluidas,
pero precipitan en medio neutro. Las protenas recuperadas resultan
desnaturalizadas.

La prueba de zona se realiza para observar la formacin del anillo.

No hay aminocidos lquidos.

Tiene elevado punto de fusin (mayor de 260C).

Son solubles en H2O y es solvente polar.

A diferencia de los aminos y cidos carboxlicos, los aminocidos son slidos

cristalinos no voltiles que se

funden con descomposicin a temperaturas

relativamente elevadas.
-

Son insolubles en disolventes no polares, como ter de petrleo, benceno o

ter.

Sus soluciones acuosas se comportan como soluciones de sustancias de

elevado momento bipolar.

Las constantes de acidez y basicidad son extremadamente pequeas para

grupos COOH y NH2

V. RECOMENDACIONES:
-

Observar el cambio de coloracin en cada prueba realizada.

Utilizar la campana extractora en el momento de realizar las pruebas para

evitar inhalar gases txicos.

VI. BIBLIOGRAFA:

Qumica Orgnica

G. Devore, Muoz MENA

Qumica Orgnica

Morrison y Boyd

Bioqumica

Stryer, L. 2da. Edicin. San

Francisco California.