DEMOSTRACION DEL PROCESO DE UREOGENESIS: ACCIN DE LA

ARGINASA

I.

INTRODUCCIN :
Cuando la llegada de aminocidos al hgado es alto. Como sucede
despus de la ingesta de de uno como una dieta rica en protenas.
Parte del exceso de aminocidos gracias al aumento de la sntesis
proteica as como por el incremento de su degradacin a urea y
sustrato glucognico o cetogenico dependiendo de cada aminocido y
su va oxidativa. Junto con el catabolismo del esqueleto de cada
aminocido, es necesario disponer de un medio eficaz de eliminacin
del nitrgeno de los grupos aminos para evitar la acumulacin hasta
niveles txicos de amoniaco y para que el hgado proceda a la sntesis
de urea, requiere de cantidad estequiometrias de amoniaco (en
forma de carbamil-P) y de aspartato.
El hombre y mamferos la sntesis de urea (ureognesis) se realiza a
partir del amoniaco (NH3) resultante de la desanimacin de los
aminocidos y el C02 proveniente de las descarboxilaciones (ciclo de
Krebs). La hidrolisis de la arginina es la fuente de la urea aunque este
aminocido se encuentra en todas las clulas. La formacin de urea
est particularmente limita al hgado; ya que es el nico tejido que
posee arginasa.
La arginasa (PM: 120.000) est constituida por cuatro subunidades,
cada de las cuales est unido un tomo de Mn 2+.
1. La ortina producto del desdoblamiento de la arginina, puede
ser utilizada de manera cclica al reaccionar con otra, molcula
de carbamil P y as formar citrulina a nivel mitocondrial en la
primera reaccin de la secuencia que conduce finalmente a la
sntesis de urea.
2. Citrulina (citoplasma)
3. Hidrlisis de Arginina ornitina + urea
Se ha estudiado que las enzimas del ciclo de la urea muestran
tambin respuestas adaptativas a los cambios en la ingesta proteica
guardando relacin con la excrecin urinaria de urea y a hormonas
como el glucagon y los glucocorticoides.
El objeto de esta prctica es de mostrar la accin de la arginasa sobre
la arginina para la sntesis de urea.

II.

MATERIAL :
A) Material Biolgico
Homogenizado heptico de rata al 20% en sacarosa 0.25 M.
B) Reactivos:
- Buffer fosfato 0.05 M, Ph 7.2
- Solucin de arginina 0.3 M

III.

Ureasa en polvo
Acido sulfrico 2/3 N
Tungstato de sodio al 10%
Reactivo de Nessler

PROCEDIMIENTO :
La preparacin del homogenizado heptico de rata al 25% en
sacarosa 0.25 M, se realiza tomando 10ml de homogenizado en un
tubo de ensayo y dejar en bao de agua a 60C durante 15 minutos
(tener cuidado en que no se eleve la temperatura a 60C). La
arginasa es estable bajo este tratamiento mientras que las dems
enzimas del hgado son precipitadas. Cumplidos los 15 minutos,
enfriar el tubo bajo un chorro de agua. Enseguida desechar, el
precipitados y quedara una solucin de color rojo ligeramente turbia
en donde se encuentra la enzima.
Armar los siguientes sistemas:
A.- Produccin de urea utilizando arginina (sustrato)
COMPONENTES

TUBO I

TUBO II

Buffer fosfato 0.05 M pH702

1.0ml

1.0ml

Sol. Arginina 0.3 M

0.5ml

---

---

0.5ml

---

---

0.5ml

0.5ml

Una pizca

Una pizca

---

---

H2SO4 2/3 N

1.0ml

1.0ml

Tungstato de sodio 10 %

1.0ml

1.0ml

agua destilada

6.0ml

6.0ml

Agua destilada
Pre-incubar a 37 C por 5
minutos
Homogenizado
heptico(arginasa)
Ureasa en polvo
Incubar a 37 C por 30 minutos

Mezclar y filtrar; el filtrado debe ser transparente; de lo

contrario volver a filtrar

B.- Determinacin de la urea mediante reactivos de Nessler

COMPONENTES

TUBO B

TUBO I

TUBO II

---

0,1ml

---

---

---

0,1ml

agua destilada

9,0ml

8,9ml

8,9ml

Reactivo de Nessler

1,0ml

1,0ml

1,0ml

Filtrado I
Filtrado II

En esta etapa se utiliza nuevos tubos de ensayo, a los cuales les

agrega el filtrado de la anterior. Los que no debern presentar
opalescencia ni turbidez.
IV.

RESULTADOS :

Figura n 1: Tubos sistema B: de izquierda a derecha; TUBO B;

TUBO I; TUBO II
V.

DISCUSIN :

El ciclo de la urea est dirigido por enzimas tal como la Arginasa; en

los tubos de los sistemas:
Tubo I: se agrego sustrato (Arginina), enzima (homogenizado
heptico-Arginasa) por lo que se obtuvo ornitina y urea la que se
degrado por accin de la ureasa liberando amoniaco siendo
reconocido por el reactivo de Nessler dando la coloracin que se
observa en la figura n 1
Tubo II: al no agregarle sustrato no se vio accin de la Arginasa, por
lo tanto no se obtuvo urea; ni coloracin.
VI.

CONCLUSIONES :
La Arginasa cumple una funcin crucial en el ciclo de la Urea,
convirtiendo la Arginina en Ornitina y Urea, a travs de una hidrlisis.
La urea (conteniendo dos grupos amino; siendo perjudicial su
acumulacin en iones amonio NH 4+) resultante se excreta mientas la
ornitina vuelve nuevamente al ciclo.

VII.

BIBLIOGRAFIA:
Stryer, L.; Bioqumica; 2002; Edit. Reverte. Espaa