Identificacin de Carbohidratos y

Protenas










Bioqumica - Salud Individual Biolog.


Elaborado por:
Departamento Ciencias Fisiolgicas.


Revisado por:
Dra. Zahira Quiones, MD
Enero 2004.


Santiago, Rep. Dominicana
rea Ciencias Fisiolgicas.
Departamento de Medicina. PUCMM

I. Introduccin

Los carbohidratos se presentan en forma de azcares, almidones y fibras, y son uno de
los tres principales macronutrientes que aportan energa al cuerpo humano (los otros son los
lpidos y las protenas). Actualmente est comprobado que al menos el 55% de las caloras
diarias que ingerimos deberan provenir de los carbohidratos.

Los carbohidratos o hidratos de carbono glcidos constituyen compuestos qumicos
formados principalmente por carbono, hidrgeno y oxgeno, elementos que se conjugan para
formar diversos tipos, en una proporcin generalmente de 1:2:1, respectivamente.

Estas biomolculas ejercen funciones fundamentales en los seres vivos, como: soporte
(celulosa), reserva de alimento (almidn), reserva energtica (glucgeno), energa inmediata
(glucosa).

Pueden clasificarse atendiendo a varios criterios: de acuerdo al nmero de monmeros
que constituyen al carbohidrato, al nmero de carbonos de sus monmeros, segn el grupo
funcional que posee ese monmero.

Los aminocidos, por su parte, son las unidades elementales constitutivas de las
denominadas protenas. En ocasiones, la hidrlisis de una protena da lugar a estructuras que
qumicamente son diferentes de los 20 aminocidos codificados por el ADN. En este caso, se
trata por lo general de modificaciones postraduccionales. Adems, hay aminocidos no
proteicos, que teniendo la misma estructura bsica de los aminocidos no forman parte de las
protenas.

Son sustancias cristalinas, casi siempre de sabor dulce; tienen tanto actividad cida como
propiedad bsica y presentan actividad ptica. Qumicamente son cidos carbnicos con, por lo
menos, un grupo amino por molcula.

En la naturaleza existen unos 20 aminocidos que pueden ser codificados por el ADN
humano. Cada uno de ellos tiene una estructura qumica diferente, pero tienen en comn, un
grupo carboxilo y un grupo amino (excepto la prolina que tiene un grupo imino) unidos al
denominado carbn quiral (excepto la glicina).

La frmula general para los 20 L- alfa aminocidos, a pH fisiolgico, es la siguiente:






Finalmente, deben mencionarse brevemente las protenas. El trmino "protena"
proviene de la palabra griega proteous, que significa primero. Las protenas son los compuestos
bioqumicos ms abundantes en los seres vivos. Son verdaderamente especiales por ser las
sustancias centrales en casi todos los procesos biolgicos.

A primera vista podra pensarse en las protenas como polmeros lineales de aminocidos
unidos entre s por medio de enlaces peptdicos. Sin embargo, la secuencia lineal de aminocidos
puede adoptar mltiples conformaciones en el espacio. La estructura primaria viene
determinada por la secuencia de aminocidos en la cadena proteica, es decir, el nmero de
aminocidos presentes y el orden en que estn enlazados. La conformacin espacial de una
protena se analiza en trminos de estructura secundaria y estructura terciaria. La estructura
secundaria es el plegamiento que la estructura primaria adopta gracias a la formacin de puentes
de hidrgeno entre los tomos que forman el enlace peptdico. La estructura terciaria, en
cambio, se refiere a la disposicin tridimensional de todos los tomos que componen la protena.
La asociacin de varias cadenas polipeptdicas origina un nivel superior de organizacin, la
llamada estructura cuaternaria. Por ltimo, la asociacin de protenas con otros tipos de
biomolculas para formar asociaciones supramoleculares con carcter permanente da lugar a la
estructura quinaria.

Presentan numerosas funciones. Por ejemplo, casi todas las enzimas estn compuestas de
estructuras proteicas. Las enzimas son los catalizadores que permiten que ocurran casi todas las
reacciones qumicas en los seres vivos. La vida, como la conocemos no sera posible sin las
enzimas. Junto con los lpidos, las protenas son los componentes estructurales de las membranas
celulares. Las protenas de las membranas ayudan a transportar sustancias a travs de la doble
capa lipdica y trabajan como sitios receptores de los neurotransmisores y de las hormonas.

Las protenas son responsables del soporte estructural y del movimiento del cuerpo
humano. El tejido conectivo est compuesto de fibras proteicas fuertes que ayudan a unir la piel
y el hueso. Los tejidos musculares estn compuestos de protenas que se contraen; los huesos se
mueven por msculos que se contraen.

Otras funciones de las protenas incluyen el transporte y almacenamiento de iones y
molculas; por ejemplo, transportar el oxgeno de los pulmones a las clulas (hemoglobina).
Numerosas hormonas, agentes de comunicacin qumica, son estructuras proteicas. Una de las
lneas de defensa ms importantes contra los agentes infecciosos son las protenas denominadas
inmunoglobulinas.

Las protenas son polmeros de condensacin de los aminocidos, algunas protenas
contienen cientos de aminocidos, y en algunos casos miles, en estructuras de cadenas altamente
organizadas. La polimerizacin de los aminocidos se hace con la formacin de enlaces
peptdicos (amida), al unirse el grupo carboxilo del cido de un aminocido con el grupo amino
del siguiente aminocido y produciendo una molcula de agua. Por eso, la unin de varios
aminocidos origina los oligopptidos y polipptidos (protenas de ms de 50 aminocidos).


II. Objetivos

1. Estudiar la estructura, propiedades, funciones y clasificacin de los carbohidratos,
aminocidos, pptidos y protenas.
2. Conocer y demostrar pruebas que identifiquen aminocidos, protenas y/o
carbohidratos y su utilidad.
III. Equipos, materiales y reactivos

3a. Equipos
-Plato caliente

3b. Reactivos
-Solucin de ovoalbmina 10% (diluir 10 gramos en 100 mL)
-Solucin de glicina 0.1 M
-Soluciones de carbohidratos al 1%: glucosa, maltosa, manosa, ribosa, galactosa,
fructosa, sacarosa, lactosa
-Reactivo de Ninhidrina
-Reactivo de Biuret
-Reactivo de Milln
-HNO3 concentrado
-NH4OH concentrado
-Reactivo de Molish
-H2SO4 concentrado
-Reactivo de Benedict
-Reactivo de Seliwanoff
-Agua destilada

3c. Materiales
-Tubos de ensayo
-Probetas de 10 mL
-Vasos de precipitado 50, 500 mL
-Goteros
-Gradillas
-Pinzas para tubos de ensayo
-Crayones
-Botelln de lavado
-Servilletas
-Gafas protectoras

IV. Procedimiento

Experimento No. 1: Identificacin de Aminocidos y Protenas

1. Reaccin de Ninhidrina

Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminocidos libres. Los
aminocidos, en general reaccionan con la ninhidrina (hidrato de hicelohidrandeno) cuando son
calentados con un exceso de la misma. Todos los aminocidos que poseen un grupo amino libre
reaccionan y forman dixido de carbono, amonaco y un aldehdo que contiene un tomo de
carbono menos que el compuesto original. Esta reaccin da lugar a la formacin de un producto
color azul o prpura (que posteriormente puede ser utilizado para cuantificar el aminocido). En
el caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un grupo imino, la
coloracin final es amarilla. El amonaco, la mayora de los polipptidos y las protenas pueden
desarrollar coloracin en esta reaccin, pero a diferencia de los aminocidos, no liberan CO2.
Recuerde que la coloracin azulada o violeta ser proporcional a la concentracin del
aminocido.


La reaccin entre una aminocido y la ninhidrina es la siguiente:




Realizacin de la prueba: se toman y rotulan tres tubos de ensayo Pyrex diferentes (1, 2 y
3). En cada uno de ellos se depositan 2 mL de solucin de ovoalbmina 10%, solucin de
glicina 0.1 M y agua destilada, respectivamente. Luego se aaden 5 gotas del reactivo de
ninhidrina y se colocan los tubos en un bao de Mara a 100 C por 1 minuto. Deje enfriar.
Anote los resultados en la tabla No. 1 al final del formato de prctica.

2. Reaccin de Biuret

El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado formado por la
condensacin de dos molculas de rea con eliminacin de amonaco. Esta reaccin est dada
por aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos
directamente o a travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno. El reactivo de Biuret
contiene Cu2SO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La
reaccin se basa en la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.
Esta ltima reaccin provoca un cambio de coloracin: violeta prpura o violeta rosado. Debe
sealarse que el color depende de la naturaleza de las protenas; protenas y pptidos dan un
color rosado; la gelatina da un color azul.

Realizacin de la prueba: se toman y rotulan tres tubos de ensayo diferentes (1, 2 y 3).
En cada uno de ellos se depositan 2 mL de solucin de ovoalbmina 10%, solucin de glicina 0.1
M y agua destilada, respectivamente. Luego se aaden 2 mL del reactivo de Biuret. NO SE
APLICA CALOR. Anote los resultados en la tabla No. 1 al final del formato de prctica.


3. Reaccin de Milln

La reaccin del Milln se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molcula
proteica. Cualquier compuesto fenlico que no est sustituido en la posicin 3,5 como la
tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reaccin. De estos compuestos,
slo la tirosina est presente en las protenas, de manera que slo las protenas que tienen este
aminocido ofrecen resultados positivos.

En esta prueba los compuestos mercricos en medio fuertemente cido (cido ntrico del
reactivo) se condensan con el grupo fenlico formando un compuesto de color rojo ladrillo o
rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgnicas en gran
cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Milln es precipitado y se vuelve negativo, razn
por la cual este reactivo no se usa para medir albmina en orina.

Debe tomarse en cuenta que en el caso de que la solucin a examinar sea muy alcalina,
debe ser previamente neutralizada, ya que el lcali precipitara al ion mercurio en forma de xidos
amarillos. Adems, protenas como la ovoalbmina producen un precipitado blanco que
progresivamente por accin del calor se torna rojo; pero, las peptonas, dan solamente una
solucin de color rojo.

Realizacin de la prueba: se toman y rotulan tres tubos de ensayo Pyrex diferentes (1, 2 y
3). En cada uno de ellos se depositan 2 mL de solucin de ovoalbmina 10%, solucin de
glicina 0.1 M y agua destilada, respectivamente. Se aaden 3 4 gotas del reactivo de milln y se
colocan los tubos en un bao de Mara a 100 C por 1-2 minutos. Se observan los cambios. Si
no llega a desarrollarse color, pueden aadirse 2 3 gotas ms del reactivo de Milln y calentar
nuevamente por igual perodo de tiempo. CUIDADO! Evite el exceso de reactivo ya que
puede producir un color amarillo que no es indicativo de positividad. Anote los resultados en la
tabla No. 1 al final del formato de prctica.

4. Reaccin de Xantoproteica

Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos. Esta reaccin se debe la presencia
de un grupo fenilo en la molcula proteica. Los complejos de la molcula proteica que son de
importancia en esta reaccin son la tirosina y el triptfano. La fenilalanina no reacciona en las
condiciones que se realiza en el laboratorio.

Para esta prueba se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos
obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio
fuertemente alcalino (formacin de cido picrmico o trinitrofenol). No puede realizarse esa
reaccin para identificar albmina en orina, por el color anaranjado de la reaccin final.

Realizacin de la prueba: se toman y rotulan tres tubos de ensayo Pyrex diferentes (1, 2 y
3). En cada uno de ellos se depositan 2 mL de solucin de ovoalbmina 10%, solucin de
glicina 0.1 M y agua destilada, respectivamente. Se aade 1mL de HNO3 concentrado.
CUIDADO AL AGREGAR EL CIDO! Se colocan los tubos en un bao de Mara a 100 C
por 1 minuto. Se observan los cambios. Deje enfriar. Aada cuidadosamente solucin de
hidrxido de amonio concentrado (hidrxido de sodio concentrado) en exceso. Observe la
coloracin nuevamente. Anote los resultados en la tabla No. 1 al final del formato de prctica.





Experimento No. 2: Identificacin de Carbohidratos

1. Reaccin de Molisch

La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por la reaccin de
Molisch, que a cierto punto es la reaccin universal para cualquier carbohidrato.

Se basa en la accin hidrolizante y deshidratante del cido sulfrico sobre los hidratos de
carbono. En dicha reaccin el cido sulfrico cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos de
la muestra y la deshidratacin a furfural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas).
Estos furfurales se condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch (reaccin de Molisch)
dando un producto coloreado.

Realizacin de la prueba: se toman y rotulan nueve tubos de ensayo Pyrex diferentes (1
al 9). En cada uno de ellos se depositan 2 mL de las distintas soluciones de carbohidratos al 1%
(glucosa, fructosa, galactosa, manosa, ribosa, sacarosa, lactosa, maltosa) y agua destilada.
Agregue dos gotas de reactivo de Molisch y mezcle bien. Luego incline el tubo y deposite 1 mL
de H2SO4 concentrado deslizndolo lentamente por la pared del tubo. No mezcle. Slo coloque
el tubo en posicin vertical y observe la formacin del anillo rojo violeta que aparece en la zona
de contacto de los dos lquidos. Anote los resultados en la tabla No. 2 al final del formato de
prctica.

2. Reaccin de Benedict

Una de las reacciones ms comunes en la identificacin de carbohidratos es la reaccin
de Benedict. Esta reaccin es especfica para azcares con grupo reductores libres (C=O).
Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa y lactosa
tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos
reductores de sus componentes cuando sta es formada.

Se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en un medio alcalino. Este
Cu1+ se oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloracin positiva de la
reaccin. La coloracin depender de la concentracin de xido de cobre y sta a su vez de la
reduccin del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, dependiendo de la coloracin.

Realizacin de la prueba: se toman y rotulan nueve tubos de ensayo Pyrex diferentes (1
al 9). En cada uno de ellos se depositan 2 mL de las distintas soluciones de carbohidratos al 1%
(glucosa, fructosa, galactosa, manosa, ribosa, sacarosa, lactosa, maltosa) y agua destilada.
Agregue 2 mL del reactivo de Benedict y proceda a colocar los tubos de ensayo en un bao de
Mara a 100 C durante dos minutos. Deje enfriar y observe la coloracin en cada uno de los
tubos. Anote los resultados en la tabla No. 2 al final del formato de prctica.

3. Reaccin de Seliwanoff

Los carbohidratos se clasifican como cetosas o aldosas. Vale decir, que las cetosas en el
carbono 2 tienen una funcin cetona, que en presencia de un cido fuerte producen rpidamente
derivados furfricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina que est contenido en el
reactivo de Seliwanoff. La sacarosa (un disacrido formado por glucosa y fructosa) y la inulina
(un polisacrido de la fructosa) dan positiva la reaccin, ya que el HCl del reactivo provoca en
caliente la hidrlisis del compuesto liberando fructosa (responsable de la reaccin positiva).

Realizacin de la prueba: se toman y rotulan nueve tubos de ensayo Pyrex diferentes (1
al 9). En cada uno de ellos se depositan 2 mL de las distintas soluciones de carbohidratos al 1%
(glucosa, fructosa, galactosa, manosa, ribosa, sacarosa, lactosa, maltosa) y agua destilada.
Agregue 2 mL del reactivo de Seliwanoff y proceda a colocar los tubos de ensayo en un bao de
Mara a 100 C durante un minuto. Deje enfriar y observe la coloracin en cada uno de los
tubos. Anote los resultados en la tabla No. 2 al final del formato de prctica.





Tabla No. 1: Identificacin de Aminocidos y Protenas

Resultados Tubos
Ninhidrina Biuret Milln Xantoproteica
Ovoalbmina 10%
Glicina 0.1M
Agua destilada


Tabla No. 1: Identificacin de Carbohidratos

Resultados Tubos
Molisch Benedict Seliwanoff
Glucosa 1%
Maltosa 1%
Manosa 1%
Ribosa 1%
Galactosa 1%
Fructosa 1%
Lactosa 1%
Sacarosa 1%
Agua destilada