AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL MEDIO AMBIENTE

I. OBJETIVO

Evaluar cualitativamente los microorganismos que se encuentran en el medio ambiente
Preparar los medios de cultivo para el desarrollo de los microorganismos

II. FUNDAMENTO

2.1 Medio de cultivo:


El medio de cultivo se emplea para tres fines principales:

Desarrollar y conservar cultivos
Estudiar la accin de los microorganismos sobre alguna sustancia del medio
Facilitar la produccin por los microorganismos en algn producto determinado o
combinacin de productos.

Los medios de cultivo varan en complejidad, la cual va desde los tejidos hasta las simples
mezclas de sales orgnicas. Muchos microorganismos requieren solo los medios de
cultivo orgnicos, otros necesitan medios especiales para su desarrollo o para ayudar a la
identificacin cuando las caractersticas del cultivo y las reaccin es especificas son los
factores determinantes

El medio de cultivo debe estar exento de sustancias que puedan inhibir el desarrollo de
los microorganismos que han de cultivarse.

2.2 Esterilizacin:

El autoclave es un instrumento para hervir el agua bajo presin y poder esterilizar desde
materiales de vidrio y los medios de cultivo, es decir liminar todo los microorganismos
presentes.

Para el manejo de la autoclave se debe de tener en cuenta lo siguiente:

Comprobar el nivel de agua y la carga
Cerrar hermticamente la tapa.
Abrir la vlvula de vapor y encender
Una vez que salga el vapor por la vlvula, esperar al menos cinco minutos para
expulsar todo el aire y cerrar la vlvula
Esperar que el manmetro descienda a cero y abrir entonces la llave de vapor.
Esperar unos 5 minutos y abrir la tapa, y despus de unos minutos quitar la carga.






III. MATERIALES Y METODOS

3.1 Materiales:


Placas Petri
Matraz Erlenmeyer
Bagueta
Probeta
Cocina elctrica
Algodn
Agua destilada
Agar plate count


3.2 Mtodos

Desarrollar la prctica teniendo en cuenta el siguiente procedimiento:

a) Preparacin del medio de cultivo

En un matraz disolver el agar en polvo con agua destilada, luego llevar al fuego
para su completa disolucin. Tapar la boca del Erlenmeyer con cierta cantidad de
algodn.

b) Esterilizar el medio de cultivo y las placas Petri

c) Plaquear y fijar un lugar determinado del ambiente que se quiera analizar, dejando
al descubierto las placas Petri por un espacio de 5 a 10 minutos. cumplido el
tiempo necesario, anotar el lugar, fecha y nombre del estudiante, luego incubar a
una temperatura de 25 a 30"C, por un espacio de 4 a 5 das.

d) Observar el desarrollo de colonias y determinar:

Numero de colonias
Frecuencias de tipos de colonias
Caractersticas particulares: color, aspecto general, etc.

IV. CUESTIONARIO

Definir y dar ejemplos de:

a) Bacterias mesfilas.

Presentan temperaturas mnimas de 10 15 C, ptimas de 25 40 C y mximas entre 35 -
47 C. La mayor parte de las bacterias - incluyendo las patgenas pertenecen a esta
categora. Algn grupo de las bacterias Mesfilas pertenece a la mayora de la flora que
se encuentra con mayor frecuencia en la leche, principalmente las bacterias lcticas


b) Bacterias termfilas.
Las bacterias termfilas son aquellas que se desarrollan a temperaturas superiores a
45C, pudiendo superar incluso los 100C (hipertermfilos) siempre que exista agua en
estado lquido, lo que se consigue si la presin es elevada como ocurre en las
profundidades ocenicas. Actualmente se estn descubriendo muchas especies nuevas
de bacterias termfilas en chimeneas hidrotermales de las profundidades marinas, como
es el caso de Rhodothermus obamensis en la Baha Tachibana (Japn) con un
crecimiento ptimo a 80C [Int J Syst. Bact, 46:1099-1104 (1996)], Deferribacter
desulfuricans en la montaa marina de Suiyo (Japn) con un crecimiento ptimo a 60-
65C [Int J Syst. Evol Microbiol, 53:839-846 (2003)], Marinithermus hydrothermalis aislada
a una profundidad de 1.385 metros [Int J Syst. Evol Microbiol, 53:59-65 (2003)],
o Thermodesulfobacterium hydrogeniphilum con un crecimiento ptimo a 75C [Int J Syst.
Evol Microbiol, 52:765-772 (2003)], entre otros.
Los termfilos se caracterizan a nivel de membrana porque poseen una proporcin alta de
lpidos saturados de cadena larga, lo que hace que tenga la fluidez adecuada a altas
temperaturas. En cuanto a las protenas, se ha visto que poseen gran estabilidad debido a
enlaces de tipo covalente e interacciones hidrofbicas.
El estudio de los termfilos se inici hace unos cuarenta aos pero se ha ido
intensificando cada vez ms ya que poseen enzimas diferentes que les permiten trabajar
en condiciones extremas y que tienen multitud de aplicaciones industriales. Se han
aislado enzimas como a-amilasas, DNasas y sernproteasas de la bacteria termfila
marina Pyrococcus furiosus , xilanasas termoestables de la bacteria Rhodothermus
marinus, etc.
Usos de las bacterias termfilas
Las industrias dedicadas a blanquear papel, textil y otros productos ven mejor usar para el
blanqueo el perxido de hidrgeno que el cloro txico, aunque sera deseable eliminar el
perxido una vez utilizado para que el agua empleada en el proceso pueda reutilizarse o
eliminarse al ambiente sin problema. Actualmente, el perxido del proceso se diluye en
grandes cantidades de agua limpia que suele tener alto coste o se trata con agentes como
bisulfito de sodio o hidrosulfito que dejan sal en el agua. Las enzimas catalasas convierten
el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno, pero los procesos de blanqueado industrial
se llevan a cabo a elevadas temperaturas, con lo que las catalasas disponibles
comercialmente se estropean rpidamente. Se han encontrado, en el Parque Nacional de
Yellowstone, bacterias termfilas que producen catalasas termoestables que podran
emplearse en el proceso de blanqueado sin que la elevada temperatura les afecte en
absoluto [Chemical & Engineering News, 26 Mayo (2003)]
Ejemplos: De este tipo son los organismos vivos que se desarrollan al lado de las fumarolas o
chimeneas hidrotermales en las profundidades del ocano como
Elanlido Riftia pachyptila
Bacterias metangenas
Que se desarrollan en las mismas condiciones.

c) Bacterias Psicrofilas.

Bacterias Psicrfilas son las que crecen a temperatura de refrigeracin. Son bacterias
Psicrfilas los miembros del gnero Speudomonas, Flaviobacterium Acinetobacter,
Alcalignes, Bacillus.

Crecen a partir de entre 5 a 5 C.

Las Psicrfilas Obligadas:

Tienen temperatura ptima a 15 18 C y temperatura mxima de 19 a 22 C; como por
ejemplo: Flavobacterium.

La bacteria Polaromonas bacuolata, recientemente aislada en aguas heladas de la
Antrtica es lo que pudiramosllamar un psicrfilo extremo. Tiene su ptimo de crecimiento en 4 C y
es incapaz de crecer a 14 C.

Las Psicrfilas Facultativas:

Tambin llamadas Psicrotrofas - presentan temperaturas ptimas en torno a los 20 30 C
y mxima, a los 35 C. Entre otras que son las Pseudomonas, Alcalgenes.

Adaptaciones Moleculares al Psicrofilia:

Los psicrfilos producen enzimas que funcionan ptimamente en fro y se desnaturalizan
rpidamente a temperaturas moderadas. Otra caracterstica de los psicrfilos si se
compara con los mesfilos, es que abajas temperaturas tiene lugar al proceso de
transporte activo lo que es una clara indicacin que la membrana de estos
microorganismos es de distinta naturaleza pues a bajas temperaturas pueden seguir
llevando a cabo su funcin. De hechos sus membranas contienen una mayor proporcin
de cidos grasos insaturados lo que ayuda a mantener el estado semifluido de la
membrana bajas temperaturas (las membranas compuestas de cidos grasos
saturados se haran poco fluidas y no funcionales a bajas temperatura)


RANGOS DE TEMPERATURA PARA EL CRECIEMINTO DE LOS MICROORGANISMOS

GRUPOS MINIMO (C) OPTIMO (C) MAXIMO (C)
Bacterias Mesofilas 5 - 15 30 - 40 40 - 47
Bacterias Termofilas 40 - 45 55 - 75 60 - 90
Bacterias Psicrofilos -5 - 5 12 - 15 15 - 20


















lndicar las diferencias entre mohos y hongos. Ponga ejemplos'

Dibujar las diferentes estructuras bacterianas

V. BIBLIOGRAFIA

Maria A. R. Control Microbiologico Lima Peru.

Collins C. H.- Metodos Microbiologicos