INSTRUCCIN DE TRABAJO CODIGO PROPIETARIO INMUNOHEMATOLOGIA

Eluido. Procedimiento de Lui. PLI.22 REVISADO Sra. Carmen Franquet-

FECHA
24- marzo - 2007
REVISIN
01 APROBADO
Dr. Arturo Pereira

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I

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PLI 22. ELUIDO DE LOS HEMATIES (Procedimiento de Lui)

PRINCIPIO y METODO DE MEDIDA : Consiste en eluir (despegar) el anticuerpo de los hemates por
congelacin-descongelacin. Es el procedimiento de eleccin para los hemates de los recin nacidos afectos de
eritroblastosis.

MUESTRA :
Tipo: sangre total anticoagulada con EDTA Conservacin: 48 h a 4 C.
Volmen mnimo necesario: 2 mL Criterios de rechazo: muestra diluida o coagulada.

4. MATERIAL E INSTRUMENTACIN AUXILIAR:
Centrfuga de tubos. Bao termostatizado a 37 C.
Tubos de hemlisis. Congelador de -80 C.

REACTIVOS Y CONTROLES):
Panel de hemates reactivos de grupo A, B y O (4 2 C hasta la caducidad indicada en cada lote).
Solucin LISS (4 2 C hasta la caducidad indicada en cada lote).
Antiglobulina (4 2 C hasta la caducidad indicada en cada lote).
Hemates Control Coombs (4 2 C hasta la caducidad indicada en cada lote).

CONTROL INTERNO:
Frecuencia y criterios de aceptacin:
Sobrenadante del ltimo lavado de los hemates: controla que los hemates hayan sido suficientemente lavados y
que no queden anticuerpos del plasma que pudieran luego atribuirse al eluido. Se procesar en paralelo con el
tipaje del eluido y ha de ser negativo.
Acciones correctoras (en caso de no aceptacin del control interno): El resultado no es vlido, Se deber
repetir con lavado manual y revisar la centrfuga lavadora. Si persistiese el fallo del control interno, deber
descartarse el frasco de antiglobulina en uso y abrir uno nuevo.

CONTROL EXTERNO: No existe.
INSTRUCCIN DE TRABAJO CODIGO PROPIETARIO INMUNOHEMATOLOGIA
Eluido. Procedimiento de Lui. PLI.22 REVISADO Sra. Carmen Franquet-
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METODE OPERATIVO Y RESULTADOS:

I. Realizacin del eluido.
1. Calentar la muestra de sangre a 37 C durante 30 minutos.
2. Lavar los hemates cuatro veces con abundante PBS precalentado a 37 C. Reservar el sobrenadante del
ltimo lavado.
3. A un tubo de hemlisis, aadir 16 gotas de hemates concentrados y 4 gotas de solucin salina isotnica (o
proporcin similar: 8 gotas de hemates y 2 de solucin salina).
4. Agitar y esparcir la suspensin de hemates por las paredes del tubo. Cerrar con Parafilm.
5. Colocar el tubo en el congelador a T <-30 C, en posicin horizontal durante un mnimo de 30 minutos.
6. Descongelar colocando el tubo bajo un chorro de agua del grifo (con precaucin de que el agua no entre
dentro).
7. Centrifugar el tubo (3000 rpm x 10 minutos) y recoger el hemolizado sobrenadante. Prestar especial cuidado a
no aspirar los estromas de hemates. Conviene dejar 1-2 mm de sobrenadante sobre el fondo del tubo.

II. Tipaje del eluido.
El eluido de los hemates podr emplearse para investigar la presencia de anticuerpos IgG del sistema
ABO y/o anticuerpos irregulares por procedimientos en tubo. No es apropiado para ser estudiado en
tarjetas de gel.
Siempre se procesar en paralelo el sobrenadante del ltimo lavado, que deber ser negativo. Si este
control resultara positivo, invalida el resultado del eluido.


DOCUMENTACI DE REFERENCIA:
CS Fen, KC Kirkle,CA Eiche, DS de Jongh. The Lui elution technique. A simple and efficient method for eluting ABO
antibodies. Transfusion 1985; 25: 433-4.