UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR

DE

SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE QUMICA, INGENIERA QUMICA E INGENIERA AGROINDUSTRIAL

E.A.P. INGENIERA QUMICA DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUMICA ORGNICA QUMICA ORGNICA PRCTICA N10:

BIOMOLECULAS: CARBOHIDRATOS - PROTEINAS

HORARIO: MIERCOLES, 2-6 pm PROFESOR: JUAN C. WOOLCOTT HURTADO FECHA DE REALIZACIN: 14/06/11 FECHA DE ENTREGA: 15/06/11 INTEGRANTES: ARONE SOTO, JIMMY RICHARD GARCA HANCCO, JUAN DIEGO REYNOSO BASURTO, MIGUEL DIOGENES 10070107 10070198 10070172

INTRODUCCIN

Los carbohidratos estn presentes fundamentalmente en los vegetales (frutas y hortalizas). En este grupo de alimentos, los carbohidratos son el grupo mayoritario despus del agua. Pueden suponer entre un 2-20% de la composicin total de los vegetales. El pepino, por ejemplo, tiene pocos carbohidratos, y los que ms tienen son los vegetales amilceos que son los que tienen una gran cantidad de concentracin de almidn. Los carbohidratos pueden ser diferentes en cuanto a su peso molecular, los hay simples y complejos. Los azcares simples ms importantes son la glucosa, la fructosa o la sacarosa. La importancia que tienen es por el sabor dulce que confieren a los alimentos lo que les hace mucho ms atractivos. Otro azcar importante pero este ya complejo es el almidn. Es la forma en la que el tejido vegetal reserva energa. El ser humano lo digiere y a veces lo almacena para energa. La mayor parte de los azcares que se obtienen en nuestra dieta provienen de los aadidos a los productos elaborados que tienen ms que los naturales. La sacarosa que se obtienen de la caa de azcar o de la remolacha es la que ms se utiliza. La lactosa es el ms importante de origen animal. Los carbohidratos se clasifican en: monosacridos, oligosacridos (2-20 monosacridos unidos) y polisacridos (ms de 20 monosacridos unidos).

RESUMEN

En el presente laboratorio vamos a trabajar con los carbohidratos y vamos a identificarlos con diferentes pruebas; ejemplos: Prueba de Molish: Es una reaccin general para carbohidratos que contienen ms de 5 tomos de carbono Prueba de Lugol: Es una prueba que se usa para identificar almidn. El color azul, se debe, posiblemente a la formacin de un complejo: Ioduro de almidn. Luego de esta experiencia vamos a poder diferenciar a los diferentes tipos de carbohidratos

PARTE TEORICA
LOS CARBOHIDRATOS
Los carbohidratos se presentan en forma de azcares, almidones y fibras, y son uno delos tres principales macronutrientes que aportan energa al cuerpo humano (los otros son los lpidos y las protenas). Actualmente est comprobado que al menos el 55% de las caloras diarias que ingerimos deberan provenir de los carbohidratos. Los carbohidratos o hidratos de carbono glcidos constituyen compuestos qumicos formados principalmente por carbono, hidrgeno y oxgeno, elementos que se conjugan para formar diversos tipos, en una proporcin generalmente de 1:2:1, respectivamente. Estas biomolculas ejercen funciones fundamentales en los seres vivos, como: soporte (celulosa), reserva de alimento (almidn), reserva energtica (glucgeno), energa inmediata (glucosa). Segn el nmero de unidades de azcares sencillos que posean se clasifican en: MONOSACRIDOS o azcares sencillos, que a su vez pueden ser ALDOSAS cuando contienen el grupo aldehdo o CETOSAS cuando contienen el grupo cetona. Los monosacridos naturales pertenecen a la serie D de los azcares y pueden tener entre tres y hasta siete tomos de carbono. DISACRIDOS que estn formados por dos monosacridos unidos entre s por enlaces glucosdicos. OLIGOSACRIDOS que tienen entre tres y diez monosacridos unidos tambin por enlaces glucosdicos. POLISACRIDOS que son polmeros naturales con varios miles de unidades de azcar sencillo ligadas entre s. De acuerdo con lo anterior, adems de reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los carbohidratos, es necesario diferenciar si se trata de un monosacrido tipo aldosa o cetosa, si es fcilmente oxidable o no, es decir si es un AZCAR REDUCTOR o no lo es, si es de cinco tomos de carbono (pentosa) o de seis tomos de carbono (hexosa), si es disacrido o polisacrido.

En este informe se presentara: el reconocimiento y diferenciacin usando algunos de las muchas pruebas que existen para ella. Ensayo de Molisch: La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por la reaccin de Molisch, que a cierto punto es la reaccin universal para cualquier carbohidrato. Se basa en la accin hidrolizante y deshidratante del cido sulfrico sobre los hidratos de carbono. En dicha reaccin el cido sulfrico cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos de la muestra y la deshidratacin a furfural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales se condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch (reaccin de Molisch) dando un producto coloreado (color violeta)

Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer polisacridos, particularmente el almidn por la formacin de una coloracin azlvioleta intensa y el glicgeno y las dextrinas por formacin de coloracin roja.

Prueba de fermentacin: Las levaduras pueden fermentar diferentes azucares como glucosa, sacarosa, maltosa y lactosa.

PROTEINAS
Las protenas son los materiales que desempean un mayor numero de funciones en las clulas de todos los seres vivos. Por un lado, forman parte de la estructura bsica de los tejidos (msculos, tendones, piel, uas, etc.) y, por otro, desempean funciones metablicas y reguladoras (asimilacin de nutrientes, transporte de oxgeno y de grasas en la sangre, inactivacin de materiales txicos o peligrosos, etc.). Tambin son los elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico (ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraos en el sistema inmunitario. Son macromolculas orgnicas, constituidas bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en menor proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (I), etc...

Estos elementos qumicos se agrupan para formar unidades estructurales llamados AMINOCIDOS, a los cuales podramos considerar como los "ladrillos de los edificios moleculares proteicos". Se clasifican, de forma general, en Holoproteinas y Heteroproteinas segn estn formadas respectivamente slo por aminocidos o bien por aminocidos ms otras molculas o elementos adicionales no aminoacdicos. Reaccin de Biuret El reactivo de Biuret est formado por una disolucin de sulfato de cobre en medio alcalino, este reconoce el enlace peptdico de las protenas mediante la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos, lo que produce una coloracin rojo-violeta. Desnaturalizacin Si en una disolucin de protenas se producen cambios de pH, alteraciones en la concentracin, agitacin molecular o variaciones bruscas de temperatura, la solubilidad de las protenas puede verse reducida hasta el punto de producirse su precipitacin. Esto se debe a que los enlaces que mantienen la conformacin globular se rompen y la protena adopta la conformacin filamentosa. De este modo, la capa de molculas de agua no recubre completamente a las molculas proteicas, las cuales tienden a unirse entre s dando lugar a grandes partculas que precipitan. Adems, sus propiedades biocatalizadores desaparecen al alterarse el centro activo. Las protenas que se hallan en ese estado no pueden llevar a cabo la actividad para la que fueron diseadas, en resumen, no son funcionales. Esta variacin de la conformacin se denomina desnaturalizacin. La desnaturalizacin no afecta a los enlaces peptdicos: al volver a las condiciones normales, puede darse el caso de que la protena recupere la conformacin primitiva, lo que se denomina renaturalizacin. Ejemplos de desnaturalizacin son la leche cortada como consecuencia de la desnaturalizacin de la casena, la precipitacin de la clara de huevo al desnaturalizarse la ovoalbmina por efecto del calor o la fijacin de un peinado del cabello por efecto de calor sobre las queratinas del pelo.

DETALLES EXPERIMENTALES
A. CARBOHIDRATOS: Muestras: soluciones de sacarosa, glucosa y fructuosa al 10%, almidn 1% 1. PRUEBA DE MOLISH: En 4 tubos de ensayo coloque 1 mL aproximadamente en cada uno de las muestras indicadas. Aada 2 gotas de reactivo de Molish y mezcle bien. Incline el tubo y agregue cuidadosamente por las paredes del mismo, 1 mL de H2SO4 concentrado. La formacin de un anillo de color violeta en la interfase indicara reaccin positiva para carbohidratos. 2. PRUEBA DE LUGOL: Acidifique 1 mL aproximadamente de la solucin de almidn con HCl concentrado. Aada 1 o 2 gotas de solucin de lugol. La formacin de un color azul intenso indicara la presencia de almidn. 3. PRUEBA DE FERMENTACION. Disolver 2 g de levadura en 30 mL de agua en un mortero. Adicionar 20 g de harina sin preparar, homogenizar adecuadamente. Transvasar esta masa a una probeta de 100 mL Anotar el volumen registrado cada 10 minutos. Realice paralelamente una prueba adicionando adems 1.5 g de azcar. B. PROTEINAS: Preparacin de la solucin de Albmina: La albumina del huevo se filtra con algodn o gasa en un vaso. 50 mL del filtrado se aade a una probeta de 100 mL y se completa con agua destilada. Esta solucin es la muestra problema. 1. Reaccin de Bluret: Los grupos responsables de esta reaccin positiva son: R-CONH2, R-CSNH2, R-CH2NH2.en general la protena que da reaccin positiva debe tener en su molcula el grupo CONH- (enlace peptdico). Procedimiento: En un tubo de ensayo colocar 2 mL de solucin de albumina y 3 mL de NAOH al 10% y agregar gota a gota la solucin de CuSO4 al 0.5% hasta obtener un color purpura violeta. Tambin dan resultado positivo las sustancias que contienen mas de 2 grupos CONH- que tienen este grupo asociado a

otro grupo CSNH2-, -C(NH)NH2-, -CH2-CN, -CHNOH-CH2-, -CH2NNH2 En general dan positivo por tener una molcula los CCO-NH (enlace peptidico) 2. Reacciones de desnaturalizacin de protenas: En tubos de ensayo se colocan 2 mL de solucin de ovoalbmina. Luego se verificara la desnaturalizacin de la protena por efecto de: a. Adicin de 1 mL de acido concentrado b. Calentamiento durante un minuto, antese la temperatura de coagulacin. c. Adicionar 1 mL de algn solvente orgnico: alcohol, acetona, cloroformo. d. Adicionar 0.5 mL de solucin CuSO4 al 5%

REACCIONES QUIMICAS
CARBOHIDRATOS PRUEBA DE MOLISCH Es una reaccin general para carbohidratos que contienen ms de 5 tomos de carbono, la reaccin se muestra en la siguiente figura:

PRUEBA DE LUGOL: Identificacin de polisacridos: identificacin de almidn mediante la prueba del Lugol: En solucin acuosa, la amilosa forma estructuras helicoidales lineales y la amilopectina ramificadas, gracias a la formacin de puentes de H entre los grupos OH de la glucosa y las molculas de H2O. Si a una dislucin de almidn de le aade I, esta toma un color azul intenso. Esta caracterstica es especfica del almidn, debido a su estructura, y se debe a la adsorcin del I por las cadenas helicoidales, especialmente de la amilosa. Por tanto no es una reaccin qumica, sino una interaccin fsica reversible por mtodos fsicos. Esto se puede comprobar fcilmente, pues al calentar la mezcla, el color azul desaparece, y al enfriarla vuelve a aparecer.

PROTEINAS REACCION DE BIURET: La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.

La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin, comn a todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus molculas. REACCION DE DESNATURALIZACION Este fenmeno genera la ruptura de los enlaces disulfuro y los puentes de hidrgeno, generando la exposicin de estos. Cuando la protena es desnaturalizada pierde sus funciones cmo : viscosidad, velocidad de difusin y la facilidad con que se cristalizan. La reversibilidad de la desnaturalizacin, depende que tan fuertes sean los agentes que desnaturalizaron la protena. Todo depende del grado de ruptura generado en los enlaces.

DISCUSION DE RESULTADOS

1.- PRUEBA DE MOLISH EN 4 TUBOS DE ENSAYO COLOCAR 1 ML DESACARASO, GLUCOSA Y FRUCTOSA RESPECTIVAMENTE . AADIMOS 2 GOTAS DEL REACTIVO DE MOLISCH, AHORA AGREGAMOS POR LAS PAREDES H2SO4 CONCENTRADO . SE
FORMA UN ANILLO DE COLOR VIOLETA QUE INDICABA LA PRESENCIA DE UN

CARBOHIDRATO .

DICHO ANILLO SE FORMA EN LA INTERFASE .

El reactivo de la prueba deshidrata pentosas para formar furfural (reaccin en la parte superior) y deshidrata hexosas para formar 5-hidroximetil furfural (reaccin en la parte inferior). El furfurales ms reaccionan presente con-naftol en el reactivo de prueba para producir un producto de color prpura (reaccin no se muestra).

2.- PRUEBA DE LUGOL DISOLVER 2 G DE LEVADURA EN 30 ML DE AGREGAMOS 20 G DE HARINA SIN PREPARAR SE

AGUA EN UN MORTERO, LUEGO

OBSERVA LA COLORACIN DE UN AZUL INTENSO LO QUE EVIDENCIABA LA

PRESENCIA DE UN ALMIDN.

El almidn en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color azul-violeta caracterstico.

1.- REACCIN DE BIURET Se forma un complejo color violeta para que demuestre que la Rx es positiva e identifica la existencia de protenas. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta

reaccin, comn a todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus molculas.

2.- DESNATURALIZACIN DE PROTENAS

CONCLUSIONES

La prueba de Molish es para la identificacin de carbohidratos. La aparicin de un anillo de rojo violeta es indicativo de la presencia de carbohidratos en la muestra La prueba de Molisch es una prueba cualitativa para la presencia de carbohidratos en una muestra de composicin desconocida. Para determinar la cantidad y naturaleza especfica de los carbohidratos se requieren otras pruebas. Las protenas producen una reaccin coloreada muy usada para la valoracin de los mismos con la reaccin del Biuret. Las protenas por sus uniones peptdicas reaccionan con los iones cpricos del reactivo en medio alcalino formando un complejo de color violeta. Las reacciones coloreadas en las protenas se dan debido a la variedad de aminocidos que reaccionan con varios productos. Muchas de estas reacciones son importantes para la deteccin y la estimacin cuantitativa de protenas y de sus aminocidos constituyentes.

RECOMENDACIONES

Se tiene que tener cuidado al ordenar los tubos llenos de la solucin de carbohidratos, porque una confusin con ellos dan malos datos. La prueba de fermentacin es una prueba muy cansada y larga, para eso hay que tener mucha paciencia. En la experiencia de desnaturalizacin, a l muestra de ovoalbmina no se le debe agregar agua, porque sino al calentarla, demorara en coagularse, y hasta tal vez no coagule.

BIBLIOGRAFIA

Juli G Peret, Universitat de Valncia, 2007 - 369 pginas John McMurry, Cengage Learning Editores, 2008 1352 pginas