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Ap A
Ap A
Manual de Laboratorio
APENDICE A
COMPOSICION Y PREPARACION DE MEDIOS
DE CULTIVO
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MICROBIOLOGIA APLICADA
Manual de Laboratorio
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MICROBIOLOGIA APLICADA
Manual de Laboratorio
Frmula:
Ingredientes por litro.
Caldo Base Rojo de Fenol:
Peptona proteosa No. 3 Difco............. 10 g
Extracto de carne.................................. 1 g
Cloruro de sodio.................................... 5 g
Rojo de fenol.................................. 0.018 g
Carbohidrato deseado........................... 5 g
pH final: 7.4 0.2 a 25 C.
Mtodo de preparacin:
Base de Caldo Rojo de Fenol. Bacto Phenol Red Broth Base. (Difco).
1) Suspender 16 g de Bacto Base de Caldo Rojo de Fenol y 5 a 10 g (0.5 a 1.0%)
del carbohidrato deseado en 1 litro de agua destilada o desmineralizada.
2) Agitar para disolver completamente.
3) Distribuir en tubos de ensayo que contengan campana Durham.
4) Esterilizar en autoclave a 110 C durante 10 minutos o por filtracin y en
condiciones aspticas distribuir el medio en tubos estriles, con campana
Durham.
Si se prefiere, el medio basal puede ser preparado sin el carbohidrato y aadir
posteriormente una solucin del carbohidrato deseado esterilizada por filtracin
o en autoclave al medio basal previamente eterilizado y enfriado. (Difco)
Caldos Rojo de Fenol Carbohidratos. Bacto Phenol Red Carbohydrate
Broths. (Difco)
1) Suspender 21 g del caldo carbohidrato rojo de fenol apropiado en 1 litro de
agua destilada o desmineralizada y agitar para disolver completamente.
2) Distribuir en tubos conteniendo campana Durham.
3) Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin (121 C).
4. AGAR ALMIDON. Bacto Starch Agar.
Frmula:
Ingredientes por litro.
Extracto de carne...........................3
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MICROBIOLOGIA APLICADA
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3g
5g
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Nitrato de Potasio........................
1g
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Peptona........................................
15
Peptona Proteosa, Difco..............
5
Dextrosa.......................................
1
Lactosa........................................
10
Sacarosa......................................
10
Sulfato Ferroso............................ 0.2
Cloruro de Sodio............................ 5
Tiosulfato de Sodio...................... 0.3
Agar.............................................
12
Rojo de Fenol.......................... 0.024
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MICROBIOLOGIA APLICADA
Manual de Laboratorio
Mtodo de preparacin:
1) Suspender 36 g en 1 litro de agua destilada o desmineralizada.
2) Calentar a ebullicin para disolver completamente.
3) Distribuir en tubos a una profundidad de aproximadamente 3 pulgadas
aproximadamente 15 mL para tubos de tamao estndar.
4) Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin (121 C).
5) Dejar solidificar el medio en posicin vertical.
10. AGAR CITRATO DE SIMMONS. BACTO SIMMONS CITRATE AGAR.
(Difco).
Frmula:
Ingredientes por litro.
Sulfato de Magnesio..............................0.2
Difosfato de Amonio..................................1
Fosfato Dipotsico....................................1
Citrato de Sodio........................................2
Cloruro de Sodio.......................................5
Agar........................................................15
Azul de Bromotimol..............................0.08
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Peptona amortiguada............................. 7 g
Fosfato Dipotsico.................................. 5 g
Dextrosa.................................................
5g
pH final: 6.9 0.2 a 25 C.
Mtodo de preparacin:
1) Disolver 17 g en 1 litro de agua destilada o desmineralizada.
2) Distribuir en tubos, en volmenes de 10 mL.
3) Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin (121 C).
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MICROBIOLOGIA APLICADA
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Casitona..................................................
15
Dextrosa................................................. 5.5
Cloruro de Sodio.................................... 2.5
L-Cistena, Difco.................................... 0.5
Tioglicolato de Sodio.............................. 0.5
Agar..................................................... 0.75
Resarzurina........................................ 0.001
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MICROBIOLOGIA APLICADA
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Manual de Laboratorio
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Si el Agar Endo es inoculado el mismo da, puede ser usado sin esterilizar en
autoclave. Bajo estas condiciones el medio necesita ser calentado solamente a
ebullicin para disolver completamente antes de vaciarlo en las placas.
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Peptona de Casena.............................3.7 g
Tiopeptona............................................3.7
g
Triptosa.................................................7.5
g
Lactosa.................................................9.4
g
Fosfato de Potasio, Dibsico...............3.3 g
Fosfato de Potasio, Monobsico.........1.0 g
Cloruro de Sodio..................................3.7
g
Desoxicolato de Sodio........................ 0.1 g
Lauril Sulfato de Sodio........................0.05 g
Sulfito de Sodio...................................1.6
g
Fucsina Bsica................................... 0.8
g
Agar..................................................... 15
g
pH final: 7.2 0.2 a 25 C.
Mtodo de preparacin:
1) Suspender 51 g en 1 litro de agua destilada o desmineralizada a la cual han
sido aadidos 20 mL de alcohol etlico.
2) Calentar a ebullicin para disolver completamente.
3) Enfriar a 45-50 C.
4) Distribuir 4 mL en cajas Petri de 50-60 mm y dejar solidificar.
NOTAS:
Si se usan cajas Petri ms grandes distribuir suficiente medio para dar una
profundidad equivalente a las de las cajas de 60 mm.
El medio preparado presenta un color rosa, ligeramente opalescente, puede
tener un precipitado.
21. AGAR m-FC. BACTO m-FC MEDIUM (Difco)
Frmula:
Ingredientes por litro.
Triptosa...................................................10
Extracto de Levadura...............................3
Peptona Proteosa No. 3, Difco.................5
Lactosa................................................12.5
Sales Biliares No. 3.............................. 1.5
Cloruro de Sodio......................................5
Agar........................................................15
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MICROBIOLOGIA APLICADA
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Azul de Anilina........................................0.1
AGAR
Frmula:
Ingredientes por litro.
Peptona Proteosa No. 3, Difco....................10
Extracto de Levadura...................................10
Cloruro de Sodio............................................5
Glicerofosfato de Sodio................................10
Maltosa.........................................................20
Lactosa...........................................................1
Azida de Sodio............................................0.4
Prpura de Bromo Cresol.......................0.015
Agar.............................................................20
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MICROBIOLOGIA APLICADA
Manual de Laboratorio
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MICROBIOLOGIA APLICADA
Manual de Laboratorio
25. AGAR DE BILIS Y ESCULINA (BEA). BACTO BILE ESCULIN AGAR. (Difco)
Frmula:
Ingredientes por litro.
Extracto de carne.................................3 g
Peptona............................................... 5
Bilis de Buey......................................40
Esculina................................................1
Citrato Frrico...................................0.5
Agar...................................................15
g
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MICROBIOLOGIA APLICADA
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Extracto de carne.................................3 g
Triptona...............................................5
g
Dextrosa (Glucosa)..............................1 g
Agar...................................................15
g
pH final: 7.0 0.2 a 25 C.
Mtodo de preparacin:
1) Suspender 24 g en un litro de agua destilada o desmineralizada.
2) Calentar a ebullicin hasta completa disolucin.
3) Esterilizar en autoclave por 5 minutos a 15 libras de presin (121 C).
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MICROBIOLOGIA APLICADA
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Peptona Bacteriolgica......................................20 g
Glucosa...............................................................5 g
Cloruro de Sodio..................................................5
g
Fosfato de Sodio, Monobsico.........................2.7
g
Fosfato de Sodio, Dibsico...............................2.7 g
Azida de Sodio................................................. 0.3 g
Solucin Acuosa de Etil-Violeta 0.01% (P/V).... 5 mL
pH final: 6.8 0.2 a 25 C.
Mtodo de preparacin:
1) Disolver los componentes en agua destilada o desmineralizada. Si se requiere
doble concentracin disolver el doble de componentes.
2) Distribuir en tubos de 18 x 150 en volmenes de 10 mL.
3) Esterilizar en autoclave por 5 minutos a 15 libras de presin (121 C).
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Casitona (Difco).................................20
g
Acido Flico........................................ 2 mg
Glucosa...............................................1 g
Suero Fetal de Ternera (Fluido)....... 50 mL
Penicilina..................................500,000
U
Estreptomicina............................50,000 g
Agua Bidestilada..............................950 mL
pH final: 7.0 0.2 a 25 C.
Mtodo de preparacin:
1) Mezclar los componentes.
2) Esterilizar por filtracin.
NOTA:
Si se desea solidificar el medio agregarle 1% de Bacto agar, aadido de una
suspensin de cultivo de Aerobacter aerogenes muerto trmicamente.
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MICROBIOLOGIA APLICADA
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Mtodo de preparacin:
1) Mezclar los componentes.
2) Esterilizar por filtracin.
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g
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Mtodo de preparacin:
1) Disolver cada una de las sales en 400 mL de agua destilada o
desmineralizada.
2) Almacenar las 6 soluciones en frascos color mbar y en refrigeracin.
* Solucin patrn de Micronutrientes
Etilendiamintetractico........................50
Hidrxido de Potasio...........................31
Agua...............................................1000
g
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mL
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* Acido Brico................................11.42
Agua destilada...............................1000
g
mL
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Mtodo de preparacin:
1) En 800 mL de agua disolver una a una las tres primeras sales.
2) Disolver el silicato de sodio y el sulfato ferroso en 100 mL de agua, acidificar la
solucin con cido sulfrico y mezclarla con el resto del medio.
3) Disolver el Etilendiamintetractico de Sodio en 100 mL de agua, acidificar con
cido clorhdrico y mezclar con el resto del medio.
4) Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presin (121 C).
5) Al medio estril y en condiciones de asepsia agregar 1.0 mL de cada una de
las soluciones de vitaminas previamente esterilizadas por filtracin.
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MICROBIOLOGIA APLICADA
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Mtodo de preparacin:
1) Disolver y ajustar el pH entre 7 y 7.5
2) Esterilizar durante veinte minutos a 121 C.
3) Preparar por separado una solucin de sulfato ferroso y de amonio. 6 H2O al
1%, y esterilizar con vapor durante sesenta minutos por tres das seguidos.
4) Agregar 5 mL de esta solucin a 100 mL del medio en el momento de empleo.
El medio presenta un precipitado. Cultivar en anaerobiosis.
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