UNIVERSIDAD

NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(UNIVERSIDAD DEL PERÚ, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE QUÍMICA E INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ANALÍTICA E INSTRUMENTACIÓN

INFORME N°6
CROMATOGRAFÍA DE GASES
“Determinación de alcoholes”

Profesor: Gerardo De Lama Castillo

Apellidos y Nombres: Anchelia Medina ,Jefferson Smith 15070151

Alarcón Ortiz, Jhonatan David 17070129

13/08/2020
1. RESUMEN
El objetivo de este laboratorio es conocer los
principios del manejo de equipos para el
análisis por cromatografía de gases para dos
muestras del pisco, para lo cual se procedió
preparando tres patrones de metanol a 100
ppm, 200 ppm, 400 ppm , luego se procedió a
la preparación de las dos muestras de pisco
usando volúmenes de 20 y 10 ml para cada
fiola de 25 ml , para todos los casos se usó el
patrón interno n-butanol , dando como
resultado 5 gráficas cuyas áreas sirvieron para
elaborar una ecuación que relaciona la
concentración del analito en mg/L y la relación
de áreas. Luego de proceder con los cálculos
se obtuvo el porcentaje de metanol de cada
muestra, 0.046703684% para la muestra de
20 ml y 0.047327625% para la muestra 10 ml.
Palabras clave:cromatografía,patrón
interno,pisco.
2.INTRODUCCIÓN
En 1906, el botánico Ruso M. Tswett realizó
un experimento que condujo al descubrimiento
de lo que hoy conocemos como
cromatografía. Colocó un extracto de
pigmentos vegetales en la parte superior de
una columna de vidrio rellena de carbonato de
calcio (CaCO3). Al agregar éter, observó que
la mezcla original se separaba en diversas
bandas coloridas que descendían a través de
la columna a diferentes velocidades.
Un rasgo característico de la cromatografía es
la presencia de dos fases; dispuestas de tal
manera que mientras una permanece
estacionaria dentro del sistema (fase
estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de
él (fase móvil). La clave de la separación en
cromatografía es que la velocidad con la que
se mueve cada sustancia depende de su
afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de
distribución). En el experimento de Tswett, la
separación de los pigmentos vegetales se
logró gracias a que cada uno de ellos tenía
una afinidad diferente por las fases. En
general, los componentes más afines a la fase
estacionaria avanzan lentamente (más
retenidos) mientras que los más afines a la
fase móvil (menos retenidos) se mueven con
mayor rapidez. Por consecuencia, el medio
cromatográfico (columna, placa o papel)
funciona como un controlador de la velocidad
de cada sustancia que constituye la mezcla,
logrando así su separación y mediante el uso
de un detector, su caracterización química.
3. MARCO TEÓRICO
La cromatografía de gases es una técnica
cromatográfica en la que la muestra se
volatiliza y se inyecta en la cabeza de un
mechero de una columna cromatográfica. La
elución se produce por el flujo de una fase
móvil de gas inerte. A diferencia de los otros
tipos de cromatografía, la fase móvil no
interactúa con las moléculas del analito; su
única función es la de transportar el analito a
través de la columna. Existen dos tipos de
cromatografía de gases (GC): la cromatografía
gas-sólido (GSC) y la cromatografía gas-
líquido (GLC), siendo esta última la que se
utiliza más ampliamente, y que se puede
llamar simplemente cromatografía de gases
(GC). En la GSC la fase estacionaria es sólida
y la retención de los analitos en ella se
produce mediante el proceso de adsorción.
Precisamente este proceso de adsorción, que
no es lineal, es el que ha provocado que este
tipo de cromatografía tenga aplicación
limitada, ya que la retención del analito sobre
la superficie es semipermanente y se obtienen
picos de elución con colas. Su única
aplicación es la separación de especies
gaseosas de bajo peso molecular. La GLC
utiliza como fase estacionaria moléculas de
líquido inmovilizadas sobre la superficie de un
sólido inerte. La GC se lleva a cabo en un
cromatógrafo de gases. Este consta de
diversos componentes como el gas portador,
el sistema de inyección de muestra, la
columna (generalmente dentro de un horno), y
el detector
4.DETALLES EXPERIMENTALES
Parámetros Cromatográficos:
Columna Capilar: SPB - 608; Longitud: 30 m x
0,53 nm DI x 0,5 μm; Fase móvil:
N2 ;Detector: FID; Temperatura del Horno:
100º C; Temperatura del Detector: 200ºC ;
Temperatura del Inyector: 150ºC; Volumen de
inyección: 0,1 μL.
4.1 Preparación de la solución patrón stock
y estándar interno
Estándar interno: Se midió 386 uL de n-
butanol y se llevó a fiola de 25 mL para
enrasar con etanol al 40%, la homogenización
de la solución se realizó por inversión.
Solución stock: Se midió 127 uL de metanol(ρ
= 0,7915) y se llevó a fiola de 100 mL para
enrasar con etanol al 40%, la homogenización
de la solución se realizó por inversión.
4.2 Preparación de las soluciones para la
curva de calibración
Estándar 1: Se midió 5 mL de la solución
stock y se llevó a fiola de 50 mL; antes de
enrasar se añadió 800 μL de solución
estándar interno, se enrasó la fiola con etanol
al 40% V/V%, la homogenización de la
solución se realizó por inversión.
Estándar 2: Se midió 10 mL de la solución
stock y se llevó a fiola de 50 mL; antes de
Tabla 1. Relaciones de áreas de
estándares y muestras
Área
Área Área n- Metanol/Área
Metanol Butanol n-Butanol
Bk 0 0 0
enrasar se añadió 800 μL de solución
estándar interno; se enrasó la fiola con etanol
al 40%, la homogenización de la solución se
realizó por inversión.
Estándar 3: Se midió 10 mL de solución stock
en fiola de 25 mL; antes de enrasar se añadió
400 μL de solución estándar interno; se
enrasó la fiola con etanol al 40% %, la
homogenización de la solución se realizó por
inversión.
4.3 Preparación de las soluciones de la
muestra
Preparación de la muestra: En una fiola de
25 mL se adicionó 20 mL de pisco, y en otra
fiola 10 mL de pisco, luego se añadió 400 μL
de solución estándar interno (n-butanol) a
cada fiola y se enrasó con agua bidestilada, la
homogenización de la solución se realizó por
inversión.
4.4 Determinación del contenido de
Metanol en mg/L y en %V/V MeOH
Para determinar el contenido de Metanol en
mg/L y en %V/V de las muestras se graficó
primero la curva de calibración(Gráfico 1) de
la relación de las áreas de metanol y n-
butanol( Tabla 1) de los estándares y sus
concentraciones de metanol en mg/L(Tabla 2).
Luego se procede a extrapolar la relación de
las áreas de las muestras en la ecuación
obtenida en la curva de calibración. Los
resultados se muestran en la Tabla 3.
St1 111.37 602 0.185
St2 209.86 613 0.342349
St3 393.89 599.14 0.657426
 Muestra1 298.1 615.7 0.484164

Muestra2 151.9 605.8 0.250743

Tabla 2. Concentraciones de los

estándares
Vol
Vol Stock Vol
Stock n- Tota 5.ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE
Metanol Butanol l Metanol %Metan
(ml) (µl) (ml) (mg/L) ol (v/v) RESULTADOS
El coeficiente de determinación resultó
Bk 0 0 0 0 0
0.9987 muy cercano a 1 lo que significa que
St1 5 800 50 100.5205 0.0127 existe un ajuste correcto de los puntos
experimentales a la curva de calibrado.
St2 10 800 50 201.041 0.0254
La concentración(%v/v) del metanol en el
pisco de la primera muestra fue de 0.04671%
St3 10 400 25 402.082 0.0508
y de la segunda muestra fue de 0.04733% con
una diferencia de 0.00062% entre ambas
concentraciones lo que indica que las
técnicas utilizadas fueron precisas.

Tabla 3. Concentraciones de las

muestras y de pisco puro 6.CONCLUSIONES
Las concentraciones de metanol de los piscos
Vol Vol de la Muestra 1 y Muestra 2 son
Mue Stock n- Vol respectivamente 369.659 mg/L y 374.598
stra( Butanol( Tota Metanol( %Metanol
ml) ml) l(ml) mg/L) (v/v)
mg/L ambos inferiores al límite máximo
permitido de 1500 mg/L del Reglamento de la
Muestra Denominación de Origen Pisco (Consejo
1 20 400 25 295.728 0.03736
Regulador de la D.O. Pisco, 2011) de lo que
Muestra 25 se concluye que el pisco analizado es apto
2 10 400 149.839 0.01893 para consumo humano.
Pisco
puro de 7.REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Muestra
1 − − − 369.659 0.04671
● CONSEJO REGULADOR DE LA
Pisco DENOMINACIÓN DE ORIGEN
puro de
Muestra
PISCO. 2011. Reglamento de la
2 − − − 374.598 0.04733 Denominación de Origen Pisco. Lima-
Perú.
● SKOOG, DOUGLAS A.; HOLLER, F.
Gráfico 1
JAMES; CROUCH, STANLEY R.
 (2007). Principios del análisis
instrumental.
● LEANDRO CASTAÑO D. , MURILLO
P. , MENDEZ A. , JOLI J.
Composición de ácidos grasos de
sacha inchi (plukenetia volúbilis
linneo) y su relación con la
bioactividad del vegetal 2012
● CALONGE M, PÉREZ-PERTEJO Y,
ORDÓÑEZ C, REGUERA RM,
BALAÑA-FOUCE R Y ORDÓÑEZ D.
(2010). Determinación de residuos de
siete insecticidas organofosforados en
frutas mediante cromatografía de
gases con detector de
nitrógenofósforo y confirmación por
espectrometría de masas
● ÁNGELA. M. LÓPEZ C. , WILLIAM. F.
GARZÓN M. , MILTON ROSERO-
MOREANO , GONZALO TABORDA
O. (2015). Análisis de cocaína en
diferentes muestras por cromatografía
de gases con detector de ionización
de llama (CG-FID).
● DIEGO A. AHUMADA , LLARYS W.
APARICIO , JEAN C. FUENTES ,
JAIRO A. GUERRERO , BRENDA I.
CHECA. (2012). Comparación de dos
aproximaciones para la estimación de 8.ANEXOS
la incertidumbre en análisis de 8.1 Ventajas de la cromatografía de gases
residuos de plaguicidas mediante ● Análisis rápido (minutos)
cromatografía de gases. ● Eficiente, provee alta resolución
● PÉREZ A. , SEGURA A. , GARCÍA R. ● Sensible, detecta fácilmente ppm y
Residuos de plaguicidas frecuentemente ppb
organofosforados en cabezuela de ● No destructivo, acoplamiento en línea
brócoli (Brassica oleracea) (espectrometría de masas)
determinados por cromatografía de ● Análisis cuantitativo con alta exactitud
gases (RSD 1-5%)
● GUTIÉRREZ Y. , MARTÍNEZ M., ● Requiere un volumen de muestreo
ALARCÓN A.(2011). Caracterización pequeño (uL)
química por cromatografía de ● Confiable y relativamente simple
gases/espectrometría de masas de
dos extractos obtenidos de 8.2 Desventajas de la cromatografía de
Phyllanthus orbicularis HBK gases
● Está limitada a muestras volátiles
● No se puede utilizar en muestras
térmicamente lábiles
● Es difícil para muestras
grandes(preparativas)
● Requiere espectroscopía(MS)para
confirmar la identidad de una señal
8.3 Aplicaciones de la cromatografía de
gases en el área agroindustrial indicando
el analito, matriz, columna utilizada, gas
portador y detector.
Determinación de residuos de siete
insecticidas organofosforados en frutas
mediante cromatografía de gases con
detector de nitrógenofósforo y análisis de residuos de plaguicidas
confirmación por espectrometría de masas
El análisis de las muestras se hizo mediante
cromatografía de gases con detector de
nitrógeno/fósforo (NPD), acoplado a un
detector de espectrometría de masas
(GC/MS). Se utilizó un cromatógrafo de gases
Fisons Instruments mod. 8560, con un
detector de masas modelo MD800, equipado
con un inyector automático de muestras.
Condiciones cromatográficas: Los plaguicidas
fueron separados por GC en una columna
DB17 de 50% fenil-metilpolisiloxano (J & W
Scientific) de 30 m de longitud por 0.25 mm de
diámetro interno y 0.25 µm de espesor de
fase. Para la determinación con detector de
nitrógeno fósforo (NPD), se utilizaron las
siguientes condiciones cromatográficas.
Volumen de muestra 1 µL en splitless. Los
gases y sus correspondientes presiones,
utilizados como fase móvil fueron: Helio (100
kPa), nitrógeno (80 kPa), hidrógeno (50 kPa) y
aire (100 kPa).
Análisis de cocaína en diferentes muestras
por cromatografía de gases con detector
de ionización de llama (CG-FID)
El análisis cuantitativo y cualitativo del analito
(cocaína tR=13,50 ± 0,25 min) se realizó por
medio de estándar de cocaína-HCl (Lipomed
COC156-HC), realizando una curva de
calibración con estándar interno (ntetracosano
C24 tR=11,50 ± 0,25 min) y una posterior
inyección por la técnica de cromatografíca de
gases acoplada a un detector de ionización de
llama (GC-FID). Se inyectó 1 µL de muestra
en un equipo Shimadzu referencia QP-2010
plus. Las condiciones fueron las siguientes: se
utilizó una columna DB-1 (30 m x 0,25 mm x
0,25 µm) con He como gas de arrastre y gas
auxiliar a un flujo de 1,4 mL/min y 28,6 mL/min
respectivamente. La temperatura del inyector
fue de 280 °C. El flujo del Split fue de 7,0
mL/min y su relación de 1:5. El flujo de purga
del septum de 3,0 mL/min. El detector se
utilizó con flujos de 30,0 mL/min de hidrógeno
y 300,0 mL/min de aire a una temperatura de
280 °C.
Comparación de dos aproximaciones para
la estimación de la incertidumbre en
mediante cromatografía de gases
El análisis cromatográfico se llevó a cabo en
un cromatógrafo de gases HP6890N con
inyector automático 7683 Agilent Technologies
con control electrónico de presión, equipado
con inyector split/splitless conectado a una
columna capilar HP-5 (30 m, 0,32 mm d.i, 0,25
µm) acoplada a un detector de nitrógeno-
fósforo (NPD). Las condiciones
cromatográficas empleadas en el análisis de
los plaguicidas fueron las siguientes: volumen
de inyección 2 µL; inyección en modo splitless
pulsado con presión de pulso de 275,8 kPa
durante 0,3 min; tiempo de purga de 2,00 min,
flujo de purga 40 mLmin-1 y temperatura de
inyector de 267 ºC. El gas portador fue helio.
Residuos de plaguicidas organofosforados
en cabezuela de brócoli (Brassica oleracea)
determinados por cromatografía de gases
Los análisis se realizaron en un cromatógrafo
de gases Clarus 500 Perkin–Elmer, equipado
con detector termoiónico (nitrógeno–fósforo),
un inyector automático (Perkin–Elmer)
operado en modo splitless con un volumen de
muestra de 1.0 µL, una columna capilar Elite 1
de 15 x 0.25 mm, ID x 0.25 µm de espesor de
la película. Se utilizó helio como gas de
arrastre, con una tasa de flujo de 17 mL y una
rampa de temperatura de 80 a 280 °C.
Adicionalmente, las muestras fueron leídas
bajo las mismas condiciones cromatográficas
con una columna Zebrón ZB–1701 de 30 x
0.25 mm, ID x 0.25 µm de espesor de la
película. Los resultados fueron utilizados de
manera confirmatoria, eliminando los picos
que aparecían únicamente en una de las
columnas.
Caracterización química por cromatografía
de gases/espectrometría de masas de dos
extractos obtenidos de Phyllanthus
orbicularis HBK
Los extractos se analizaron por CG acoplada
a EM utilizando un cromatógrafo de gases
Hewlett-Packard 6890 acoplado a un
espectrómetro de masas 5973. Las muestras
se redisolvieron en el mismo disolvente
utilizado para la extracción y se inyectaron
directamente en el equipo (1 µL, modo "split").
La separación se realizó en una columna
SPB-5 (5 m × 0,25 mm × 0,10 µm), utilizando
Helio como gas portador a un flujo de
1mL/min, siendo la temperatura del inyector
de 280 ºC. La temperatura inicial del horno fue
de 60 ºC por 2 min con programación de 4 ºC
por min hasta 100 ºC, incrementando a 10 ºC
por min hasta 290 ºC, la cual se mantuvo por
5min. El espectrómetro de masas fue operado
a 70 eV con un rango de masas desde 45-700
uma, siendo la temperatura de la fuente de
230 ºC. La identificación de los componentes
fue asignada por comparación de sus
espectros de masas con los ofrecidos por la
biblioteca del equipo (Base de datos NIST 98)
y los reportados en la literatura.

Composición de ácidos grasos de sacha

inchi (Plukenetia volúbilis Linneo) y su
relación con la bioactividad del vegetal
La identificación y cuantificación de los ácidos
grasos se llevó a cabo por cromatografía de
gases (CG-FID) y cromatografía de gases
acoplada a espectrometría masas (CG-EM),
previa derivatización a ésteres volátiles. Se
utilizó un cromatógrafo de gases AGILENT
6890N acoplado a masas AGILENT
TECHNOLOGIES NETWORK 5973 Mass
Selective Detector, Columna capilar 5%
difenil, 95% dimetil polisiloxano, WCOT Fused
Silica VF-5ms Varían 30m x 0,25mm x
0,25^m, Inyector: Gas portador: Helio,
Temperatura: 280°C Horno: Temperatura
inicial: 100 °C; temperatura final: 280 °C;
duración total: 53,50 minutos; detector de
masas Modo d-adquisición: scan; Rango de
masas bajo: 40, Rango de masas alto: 600.