ESTUDIO CITOQUMICO DE LIQUIDOS SEROSOS

Lic. Mercedes Catani Dr. Isidoro Prudente Dra. Rosario San Martn Dra. Silvia Zunino Torres

Hospital de Clnicas. Departamento de Laboratorio Clnico. Reparticin Hematologa y Citologa.

LQUIDO SEROSO:

Se denomina as al lquido que normalmente se encuentra en las cavidades serosas: -Cavidad pleural: 10-20 ml -Cavidad peritoneal: 50 ml -Cavidad pericrdica: 100 ml

DERRAME SEROSO:

Acumulacin patolgica de lquido en una cavidad serosa

Pleural (derrame pleural) Pericrdica (derrame pericrdico) Peritoneal (ascitis)

c. linftico Presin hidrosttica

Capilar sistmico

Presin coloidosmtica

Capilar pulmonar

serosa parietal

serosa visceral

MECANISMOS DE FORMACIN DE DERRAMES SEROSOS

p. hidrosttica p. coloidosmtica

Insuficiencia Cardaca Congestiva S.nefrtico Cirrosis

TRASUDADO

permeabilidad capilar

Infecciones E.. Inflamatorias Neoplasias

EXUDADO

obstruccin del drenaje linftico

Neoplasias Traumatismo

Los derrames serosos pueden presentarse como complicacin de distintas patologas. Su estudio citoqumico y bacteriolgico no slo proporciona una orientacin diagnstica sino que en algunas situaciones determina conductas teraputicas.

Examen macroscpico
ASPECTO
Hemorrgico Puncin traumtica, derrames neoplsicos, traumatismos, TEP No tiene valor diagnstico Sobrenadante lmpido: clulas Sobrenadante turbio: bacterias lpidos Derrames quilosos y seudoquilosos.

Hemtico o serohemtico Turbio

Opalescente, lechoso

Examen qumico
1.

Parmetros bioqumicos utilizados para diferenciar trasudados y exudados Parmetros bioqumicos para determinar la etiologa de un exudado

2.

Criterios de Light

Protenas lquido pleural Protenas sricas LDH liqudo pleural LDH srica

> 0.5

> 0.6 > 200 UI / L

LDH en lquido pleural

Se considera que el lquido es un exudado cuando cumple uno o ms de estos criterios

PARMETROS BIOQUMICOS UTILIZADOS PARA DIFERENCIAR TRASUDADOS de EXUDADOS PLEURALES Trasudado Protenas LDH Colesterol * 30 g / L 200 U / L 60 mg / dl Exudado 30 g / L 200 U / L 60 mg / dl

* Slo en lquidos pleurales , en lquidos de ascitis se utiliza como criterio para diferenciar derrames neoplsicos de no neoplsicos

PARAMETROS UTILIZADOS EN LIQUIDOS DE ASCITIS

Gradiente de Albmina

Albmina srica albmina lquido : >= 1.1 g/l = HTTP < 1.1 g/l = no HTP

Etiologa de un exudado pleural Parmetros bioqumicos

GLUCOSA pH TRIGLICRIDOS AMILASA CREATININA

GLUCOSA

Su concentracin es similar a la plasmtica en los trasudados y en la mayora de los exudados Valores 60 mg/dl pueden verse:
DERRAMES

PARANEUMNICOS COMPLICADOS
BK ENF.

REUMTICAS

NEOPLASIAS

pH

Slo tiene valor diagnstico cuando se determina en las mismas condiciones que el pH arterial Valores 7.2 pueden observarse en:
DERRAMES

PARANEUMNICOS COMPLICADOS
BK
Enf.

Reumticas

Neoplasias Acidosis

sistmica

Triglicridos

Su determinacin est indicada en lquidos de aspecto opalescente o lechoso y en aquellos con sobrenadante turbio. Permite diferenciar:
- derrames quilosos (obstruccin del drenaje linftico con acumulacin de linfa neoplasias-) -seudoquilosos ( por acumulacin de colesterol BK, AR-).

quiloso TG

seudoquiloso 50 mg/dl

110 mg/dl

Valores entre 50-110 mg/dl : estudio de quilomicrones

Lquido de Ascitis Parmetros Bioqumicos

Gradiente de Albmina

Albmina srica albmina lquido : >= 1.1 g/l = HTTP < 1.1 g/l = no HTP

Amilasa

Valores de amilasa mayores al lmite superior normal en suero pueden verse en derrames causados por:
Pancreatitis Rotura

esofgica

Neoplasias

Urea y creatinina

Su determinacin est indicada ante la sospecha de presencia de orina en la cavidad serosa

(estallido vesical, posoperatorio de ciruga abdominal).

Se encuentran valores aumentados de urea y creatinina en el lquido seroso y valores normales de creatinina en sangre.

Citologa de lquidos de cavidades serosas

Citologa de lquidos de cavidades serosas

Normalmente procedentes de:

revestimiento seroso : clula mesotelial

sistema monoctico / macrofgico capilares subserosos

Clula mesotelial
NORMAL

Redondeada 18 a 40 u (25 u) Ncleo central ovoide 2 a 3 nuclolos Citoplasma denso adelgazado en periferia Aisladas o en grupos de menos de 12 clulas (ventana)

Clula mesotelial
REACTIVA Mayor basofilia citoplsmica Bordes bien delimitados Discreto grado de anisocariosis

Clula mesotelial

INVOLUTIVA Derrames crnicos Degeneracin vacuolar

Macrfago

45 % clulas normales en peritoneo. (CD68+) 15 100 u (30 u) Ncleo excntrico arrionado Citop. claro,finamente vacuolado (encaje) Material fagocitado Formas multinucleadas y gigantes slo en serositis reumtica

Clulas procedentes de capilares subserosos

Glbulos rojos. Puncin (1 ul/mm3) Hemorragia. PMN. % variable. Inflamacin. Infarto. Linfocitos. Procesos benignos: Formas T NA. viral, TBC, neoplasias Eosinfilos. (10%) Infeccin viral, parasitaria, mesenquimopatas, TEP, Ntx, Htx.

Cuadros citolgicos patolgicos

Clulas en proporciones variables dependiendo de la causa, duracin y complicaciones del derrame.

Inflamacin . Inespecfica . Especfica TBC TEP Cirrosis heptica Derrames neoplsicos

Inflamacin

Inespecfica. -clulas mesoteliales y PMN

- IC - NA - sobreinfeccin PMN +50%: - pleura: empiema - ascitis: PBE : recuento en cmara de Neubauer PMN > 250/ mm3 - DPCA: GB > 100/ mm3 50% PMN

Inflamacin
- AR - macrfagos - m. gigantes multinucleados - material necrtico granular Especfica. eosinfilo.

- LES - cl.LE 30% pleuritis lpica. - cl. mesoteliales y eosinfilos

TBC

En pleura

- infiltrado linfocitario crnico sin reaccin mesotelial. En peritoneo - infiltrado linfocitario crnico con reaccin mesotelial y macrofgica.

TEP
Necrosis hemorrgica subpleural con reaccin inflamatoria perilesional.

Citologa pleomrfica :
- fondo hemorrgico. - reaccin mesotelial a/v con alt. citomorfolgicas. - macrfagos con grnulos de hemosiderina. - PMN y linfocitos.

Cirrosis heptica
Celularidad pleomrfica: clulas mesoteliales, macrfagos, linfocitos, y PMN. Puede observarse hepatocitos como clulas epiteliales polidricas con ncleo central y disposicin acinar (no debe confundirse con metstasis)

Derrame neoplsico

Mayor frecuencia corresponde a adenocarcinomas de pulmn, mama, ovario. Tendencia a formar grupos celulares cohesivos, tridimensionales o seudoacinos, cuyas clulas presentan variadas atipas citomorfolgicas. El mesotelioma ( neoplasia de la serosa ) es muy poco frecuente.

MARCADORES TUMORALES

MARCADORES TUMORALES

Sustancia producida por la clula neoplsica que refleja su crecimiento y/o actividad, y permite conocer la presencia, evolucin o respuesta teraputica de un tumor maligno. Incluye: 1)productos detectables in situ en el tumor o sus metstasis y 2) productos liberados a la sangre y detectables en suero. Al 1 grupo dedicaremos nuestra atencin.

INMUNOCITOQUIMICA

.Definicin: tcnica que hace visible una reaccin antgeno - anticuerpo en muestras citolgicas. .Inmunohistoqumica (IHQ): si dicha reaccin se realiza sobre tejidos. .Aporta mayor sensibilidad diagnstica a los criterios exclusivamente morfolgicos.

METODOLOGIA

Se utilizan Ac Monoclonales (Moabs): poseen alta homogeneidad de lugares especficos de unin con el antgeno. Los antgenos no deben ser destruidos ni enmascarados por los procedimientos tcnicos. Fijador: debe estar en funcin de los grupos reactivos antignicos que se pretende demostrar.

METODOLOGIA

Fijador: debe buscar un equilibrio entre la preservacin de la morfologa y la inmunoreactividad. Se clasifican: 1) actan por precipitacin 2) actan estableciendo uniones cruzadas. Sistemas de revelado: hacen visible la reaccin (IFD, IFI). Aplicable a PAAF, derrames, bloques celulares, improntas, etc.

PANELES DE ANTICUERPOS

Los paneles de Moabs se realizan siguiendo 2 lneas: 1) por ANTIGENOS a estudiar 2) por TUMORES a detectar. 1)Por Antgenos a detectar: Ag Oncofetales : AFP, CEA. Mucinas: MUC1, MUC2, MUC3A, (CA-125, CA15-3, CA 27-29). Citoqueratinas: 8, 18, 19, (CIFRA, TPS, TPA). Enzimas e inhibidores: NSE, SCC.

Tumores a estudiar
CQ Carcinoma + Linfoma Sarcoma Melanoma VM LCA HMB 45 + + + + + + +

Adenocarcinoma vs Mesotelioma
AdenoC CEA CQ B Peso CQ A Peso CD 15 B 72.3 Desmina + + + + Mesotel. + + +

PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDOS SEROSOS

PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO DE LIQUIDOS SEROSOS

Recepcin

de la muestra

Los lquidos obtenidos por puncin sern remitidos rpidamente al laboratorio en 4 tubos a) tubo estril para estudio bacteriolgico. b) tubo seco sin anticoagulante para estudio bioqumico. c) tubo con anticoagulante para estudio citolgico. d) tubo en anaerobiosis para determinacin de pH.

Procesamiento
1) Macroscopa color aspecto presencia o no de cogulo presencia de restos tisulares 2) Centrifugacin convencional 2500 rpm 10

Procesamiento
3) Postcentrifugado sobrenadante - color
- aspecto

sedimento

- volumen - caractersticas -hemtico - capa blanca celular

Procesamiento
4) Estudio bioqumico del sobrenadante glucosa protenas totales colesterol LDH Tg (sobrenadante turbio) otras determinaciones - amilasa, urea, iones, etc.

Procesamiento
5) Citologa Frotis del sedimento resuspendido de centrifugacin convencional.

Citocentrifugacin Se realiza de rutina excepto en lquidos muy hemorrgicos o purulentos, o con una gran capa celular en el sedimento convencional. Se resuspende el sedimento en 250ul de sobrenadante y se carga la cpsula.

Ventajas de la citocentrifugacin

Mayor concentracin celular. Disposicin celular en monocapa evitando el solapamiento. Conserva intacta la morfologa celular. Permite realizacin de tcnicas inmunocitoqumicas.

La citocentrifugacin siempre debe ser realizada en forma paralela a la centrifugacin convencional que aporta la nocin cuantitativa de los elementos celulares.
De una serie de citologas de lquidos serosos que fueron negativas para atipas citomorfolgicas mediante centrifugacin convencional , 36 % resultaron positivos para citocentrifugacin.

Procesamiento
6 ) Secado de lo frotis al aire y tincin con MGG. Los tiempos de tincin son similares a los empleados en extendidos hematolgicos, debindose acortar a la mitad la etapa de Giemsa.

Confeccin del informe

Nombre del paciente Procedencia Datos filiatorios Tipo de material Estudio realizado - macroscopa - bioqumica - citologa - en suma diagnstico Fecha Firma responsable