DETERMINACION DE pH Y PREPARACION DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS Carol Ibarra, Andrs Rosero Laboratorio de Bioqumica I Programa de Qumica, Facultad de Ciencias Exactas

y Naturales Universidad de Nario, Ciudad Universitaria Torobajo, AA 1157 San Juan de Pasto. RESUMEN: Se prepararon 3 soluciones a partir de soluciones con concentracin conocida; se mezclaron cantidades diferentes de estas en 6 tubos de ensayo a los cuales se les agrego indicador creando una escala de pH de 3 a 5. Luego se tomaron 10 tubos de ensayo a los cuales se les agrego soluciones diferentes con concentracin conocida, se agrego un indicador y se procedi a medir el pH patrn basndose en la escala anterior, se les midi el pH con papel tornasol, con el pH metro y se calculo el pH terico; como siguiente paso se midi el pH de diferentes sustancias, luego se preparo la solucin buffer y se le realizando diferentes pruebas para medir la variacin de pH, por ltimo se realizaron diferentes clculos para preparara una solucin amortiguadora problema de fosfato 0.5 M a un pH de 7,5. PALABRAS CLAVE: Indicador, Concentracin, Variacin de pH, soluciones amortiguadores

INTRODUCCION

Segn la definicin de Bronsted (1879 1947) y Thomas Lowry (18741936) en 1923 un acido est definido como una molcula que cede protones (H+) y una base como la molcula que acepta el protn. El ejemplo ms claro es la molcula de agua ya que ella es anfiprotica sea se comporta como un acido liberando el protn y formando el Ion hidroxilo.

El ion acetato es la base conjugada del acido actico y el ion amonio es el acido conjugado del amoniaco. La acidez y la alcalinidad de una solucin se la expresa por medio del logaritmo negativo de la concentracin (mol / L) de los iones H+ presentes en ella; al valor obtenido se le llama pH de la solucin.

Cuando se comporta como una base, acepta un protn para formal el ion hidronio (H3O+). Cuando un cido y una base reaccionan, los productos son un nuevo cido y base, los cuales respectivamente se les llama acido y base conjugados. Por ejemplo:

Ahora si se conoce el valor de la concentracin de iones hidronio (H3O+) se puede calcular el valor de la concentracin de iones hidroxilo (OH) utilizando la siguiente ecuacin

Donde en soluciones acuosas KW se conoce como el producto inico del agua el cual es de 1x10-14 a 250C.

Las soluciones amortiguadoras son soluciones de cidos, HA, o bases dbiles con sales, NaA, de estos electrolitos, que tienen un ion comn y poseen la propiedad de mantener el pH de las soluciones ms o menos constantes a pesar de adiciones de cantidades pequeas de cidos o bases fuertes. El equilibrio involucrado es el del cido o la base dbil, en donde la concentracin del anion comn A, proviene casi exclusivamente de la sal, NaA. HA= H+ + AKa = [H+] x [ HCO3-] [HA] [H+] = Ka [HA] [A-] Ka = [ cido ] [ sal ] Ka es un valor constante y, se conoce el pH de la solucin sacando el logaritmo a la ecuacin que esta igualada a [H] y queda as: pH = pKa + log [A+] [HA] (Ec de Henderson Hasselbalch) Cada vez que se adiciona cierto nmero de moles de cido fuerte se observa un aumento de la [H+] y el equilibrio se rompe momentneamente. El sistema trata de restablecer el equilibrio, tratando de disminuir la [H+] aumentada, para lo cual se desplaza en el sentido inverso, aumentando la cantidad de cido HA y disminuyendo los iones de A-, manteniendo el pH ms o menos constante. Si estas mismas moles de cido fuerte se agregan al agua el pH cambia bruscamente. Las disoluciones amortiguadoras o tampn son muy importantes en los sistemas qumicos y biolgicos. El pH en el cuerpo humano vara mucho de un fluido a otro; por

ejemplo, el pH de la sangre es alrededor de 7.4, en tanto que el jugo gstrico humano es alrededor de 1.5. En la mayor parte de los casos, estos valores de pH que son crticos para el funcionamiento adecuado de las enzimas y del balance de la presin osmtica, se mantienen gracias a las disoluciones. Una disolucin amortiguadora debe contener una concentracin relativamente grande de cido para reaccionar con los iones OH- que se aadan; y tambin debe contener una concentracin semejante de base para que reaccione con la cantidad de iones H+ que se aadan. Adems, los componentes cidos y bsicos del amortiguador no deben consumirse el uno al otro en una reaccin de neutralizacin. Estos requerimientos se satisfacen con un par cido-base conjugado, por ejemplo, un cido dbil y su base conjugada (suministrada por una sal) o una base dbil y su cido conjugado (suministrada por una sal). La medicin de pH se efecta ya sea por un mtodo calorimtrico, por un electromtrico o por clculos analticos. Para este ltimo, se usa el pHmetro. El mtodo calorimtrico se basa en el uso de colorantes orgnicos complejos que cambian de color de acuerdo al valor del pH de una soluciona acuosa. Estas substancias se conocen como indicadores. Para la mayora de los casos, aquellos requieren de un rango de pH entre 4.0 y 8.4. El mtodo potenciometrico utiliza el sistema del electrodo que consiste de un sensor cuyo voltaje varia proporcionalmente a la actividad de iones hidrogeno de la solucin y un electrodo de referencia que proporciona un voltaje de referencia constante y estable. MATERIALES Y REACTIVOS Reactivos:

pH metro Papel indicador Sln HCl 0.1 M Sln CH3COOH 0.1 M Sln NH4OH 0.1 M Sln NH4Cl 0.1 M Acetato de amonio 0.1 M Fosfato di acido de sodio 1M Fosfato acido de sodio 1M Indicador azul de bromofenol

5.0

5.0

5.55

0.45

Materiales: Probeta: 100ml 8 beakers: 250ml Pipeta: 1ml, 5ml, 10ml 16 tubos de ensayo Baln volumtrico: 100ml, 25ml

2. Se tomo 10 tubos de ensayo y se agrego a cada uno 6 ml de sustancias con concentracin conocida preparadas en laboratorio a las cuales se les determino el pH terico, pH patrn y pH potenciometrico. Las sustancias preparadas en el laboratorio se muestran en la tabla 2. Tabla 2. tubo Sustancia(12 ml) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Agua destilada Agua de la llave HCl HCl HCl HCl CH3COOH NH4OH NH4Cl Acetato amonio

Concentracin (N) ----------------------------------------0.1 M 0.01 M 0.001 M 0.0001 M 0.1 M 0.1 M 0.1 M

METODOLOGA 1. Se realizaron los clculos para preparar las siguientes soluciones: 50 ml de HCL 0.1 N a partir de HCL 0.5N 50 ml de NaOH 0.1 N a partir de NaOH 0.5 N 0.5 ml de CH3COOH 0.1 N

1. Se preparo una escala coloreada de pH en 6 tubos numerados de 3 a 5 con unidades de 0.4 en 0.4, a los cuales se les agrego 3 gotas de indicador azul de bromofenol. En cada tubo se mezclo diferentes volmenes de las soluciones anteriormente preparada de CH3COOH, NaOH y agua destilada como se muestra en la tabla 1: Tabla 1. pH 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6
CH3COOH ml

de 0.1 M

A las anteriores soluciones preparadas a partir de soluciones de laboratorio se les determino los siguientes valores: a. A cada tubo de ensayo se le agrego 3 gotas de azul de bromofenol y se busco el equivalente ms cercano de acuerdo a la escala de pH que ya se haba elaborado anteriormente, siendo este el pH patrn. b. A las soluciones se les determino el pH por medio del papel tornasol siendo esta valoracin el pH de papel.

NaOH ml 0.7 0.42 1.0 2.15 4.1

H2O ml 5.83 5.58 5.0 3.85 1.9

5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

c. A las soluciones se les determino el pH por medio del pHmetro, siendo este valor el pH potenciometrico. d. Por ltimo se calculo tericamente el pH de cada solucin, siendo este el pH calculado. 6. Se rotularon 6 beakers (A F), en A se colocaron 20 ml de acido actico 0.5M, en b se colocaron 20ml de acetato de sodio, se midi el pH, luego se mezclaron midiendo el nuevo pH. En C se coloco 20ml de agua destilada + 2ml de HCl 0.5M, se mido el pH. En D se colocaron 20 ml de agua destilada + 3ml de NaOH 0.5M, se tomo el pH. A los beaker E y F se les coloco 20 ml de la solucin resultante de A y B, al beaker E se le adiciono 2 ml de HCl 0.5M y a F se le adiciono 2 ml de NaOH 0.5M, se midi el pH a cada una de ellas. Por ltimo se realizo los clculos para preparar un amortiguador de fosfato 0.5M a pH 7,5 y se midi su efectividad agregndole a este acido y base por separado para medir el pH observando as la capacidad amortiguadora. ANALISIS DE RESULTADOS 1. Preparacin de soluciones: Las soluciones inciales fueron preparadas utilizando la ley de la disolucin la cual se expresa de la siguiente ecuacin: Ec 1. C1V1 = C2V2 Despejando V1 se tiene: Ec 2. V1 = C2V2 / C1 Se procede a remplazar los valores: V1 = 0.1 x 6 / 0.5 = 1.2 ml

Este procedimiento se aplica para prepara las soluciones del primer punto y para preparar las soluciones utilizadas para hacer la escala del pH de la tabla 1 y las soluciones utilizadas para la determinacin del pH de la tabla 2. 2. Preparacin de la escala coloreada Con la combinacin de los volmenes de acido actico, hidrxido de sodio y agua especificados en la tabla 1. Se obtuvo una escala de pH como se muestra en la figura 1: Figura 1.

pH 3

pH 5

El azul de bromofenol es un indicador orgnico de formula C19H10O5SBr4, tiene un olor caracterstico este tiene un Intervalo de transicin visual: pH 3.0 (amarillo) - pH 4.6 (azul violeta o prpura), es irritante y poco nocivo, su estructura molecular se muestra en la figura 2: Fig 2.

Este es un compuesto orgnico cuya forma no disociada tiene un color diferente al de su acido o base conjugados. La disociacin del indicador (Ec 3).se acompaa de cambios en su estructura interna y concominante cambio de color Ec 3.
In + H2O LnH+ + OH-

3. Determinacin de pH por diferentes mtodos:

Para el cloruro de amonio: Se determino el pH de las 10 soluciones que estn descritas en la tabla 2. Obteniendo los valores (tabla 3.): Tabla 3.
tubo pH papel pH Potencio pH teorico pH Patron

Ec 7. pH = pkw pKB + log [NH4Cl] El pH patrn corresponde a los valores de pH aproximados obtenidos de la escala que se realizo con las variaciones de color del indicador azul de bromofenol con los valores de la tabla 1. El valor potenciometrico corresponde a los valores de pH medidos en el pHmetro.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

5 6 1 2 3 4 3 11 5 9

6.45 --------1.03 2.04 2.096 3.97 3.74 11.02 5.15 8.94

7 ------1 2 3 4 2.86 11.13 5.12 7

4 4 3 3.2 3.4 3.6 3.2 5 3.8 4

El pH terico de la tabla 3 se clculo de la siguiente forma:

Para el agua no se calcula el pH porque se supone que es neutra Para las diferentes concentraciones de HCl el cual es acido fuerte se dice que: Ec 4. pH = -Log (H+) Para el acido actico: Ec 5. pH = pKA- log [CH3COOH] Para el hidrxido de amonio: Ec 6. pH = pkw pKB + log [NH4OH]

1. Preparacin de una solucin amortiguadora: Tabla 4. Beaker pH medido A 10 ml ac actico 2,68 B 10 ml acetato de sodio 8.34 Solucin A + B 4.57 C + D + 20 ml de agua 5.80 C+ 2mL de HCl 1.83 D + 2mL de NaOH 11.98 E (A + B)+ 2mL de HCl 4.57 F (A + B)+ 2mL de 4.42 NaOH 2. Preparacin de una solucin buffer de fosfato 0.5 M y pH 7.5: pKa: 7.20 pH: 7.5 Concentracin: 0.5 M Aplicamos la formula de Henderson Hasselbalch: pH = pKa + log [A+] [HA] 7.5 7.20 = log [A+] [HA]

Antilog 0.3 =

[A+] [HA]

633 ml X

1L 0.1L

X = 63.3 ml

1.995 = [A+] [HA] Relacin (Base) (Acido) 1.995 1

Volumen de acido: 332 ml 1L X 0.1L

X = 33.2 ml

Parte total: 1.995 + 1 = 2.995 aprox = 3 Para la base: 3 100% 1.99 X

X = 66.33 % Base

Por lo anterior podemos decir que se necesitan 33.2 ml de fosfato acido mas 63.3 ml de fosfato bibsico; el pH terico es de 7.5 y el pH experimental es de 7.06, se le agrego unas gotas de NaOH hasta alcanzar el pH de 7.5 y se lo aforo. Como la relacin de porcentaje supera la mitad, se calcula el volumen para cada uno de los componentes determinando las cantidades de acido y de base para preparar la solucin buffer. Para observar la variacin de pH se le agrego al buffer obtenido inicialmente 1 ml de HCl y 1ml de NaOH obteniendo el siguiente resultado: ( Tabla 5.) Tabla 5. Sln (buffer pH 7.06) Buffrer + 1ml de HCl 0.1 M Buffre + 1 ml de NaOH 0.1 M

Para el acido: 3 100% 1 X X = 33.33 % Acido Moles de la base: 100 mol 63.33 0.5 mol X X = 0.3166 mol de la base Moles del acido: 100 mol 33.33 0.5 mol X X = 0.1666 mol del acido Concentracin para preparar un litro de de solucin: Para la base: M = 0.3166 mol = 0.3166 M 1L sln Para el acido: M = 0.1666mol = 0.1666 M 1L sln Se calculas los volmenes de acido y de base con la formula de las disoluciones (Ec 1): V1 para la base = 0.633 L (633 ml) V1 para el acido = 0.332 L (332 ml)

pH 6.57 7.08

En la tabla 1 se observa que no hay una variacin significativa de pH lo cual puede ser porque el agua tena un grado de acidez bajo (medido: 6.02); este es diferente al terico por las impurezas que el agua puede contener. Con respecto a los valores obtenidos con el pHmetro (Tabla 2) se puede decir que estos como son de uso general no estaban correctamente calibrados lo cual se evidencia en lo que ellos tardan en dar un valor estable dando origen a un error. Los recubrimientos del electrodo, los posibles cambios en la energa elctrica tambin pueden ser factores de

Se calculan los volmenes para preparar 100ml: Volumen de base:

interferencia adems de esto igualmente tambin puede influir el medio de trabajo y la limpieza del material. Los datos de la tabal 2 explican los cambios que se dan cuando agregamos al medio una cantidad de acido o base fuerte reflejndose este en la gran variacin de pH ya que aumentan o disminuyen la cantidad de iones hidronio en el medio que se est trabajando. En la preparacin del buffer de fosfato 0.5 M a pH 7.5 el pH calculado fue muy cercano al calculado. Cuando se realizo la prueba de amortiguamiento se observo que la variacin de pH fue muy pequea lo cual nos confirma la capacidad de amortiguamiento de la solucin ya que mantuvo un rango del pH. CONCLUSIONES 1. Los amortiguadores se usan en todos los tipos de reacciones qumicas en las que se desean mantener el pH de una solucin a un nivel relativamente constante 2. Para preparar una disolucin amortiguadora a un pH especifico, se seleccionara un cido dbil cuyo pKa sea parecido al pH deseado. esta seleccin no solo da el valor de pH correcto del sistema amortiguador sino que asegura que tengan cantidades comparables del cido y su base conjugada de la disolucin; que son prerrequisitos para el sistema amortiguador funcione con eficacia. 3. La capacidad amortiguadora de una solucin se define como el nmero de moles de un cido o de una base fuerte que ocasiona un cambio de una

unidad de pH a un litro del amortiguador. Esta premisa es de suma importancia en las ciencias ya que un cambio brusco de pH en un sistema biolgico puede causar perjuicios que afecten la integridad del humano. BIBLIOGRAFIA 1. SKOOG, West, Holler. Qumica Analtica. Ed Mc Graw Hill, Colombia 1998 Sptima edicin 2. Bohinski R. Bioqumica, quinta edicin, editorial Adisson Westey, Mxico 1998. 3. MURRAY RK et al. Bioqumica de Harper, 16 edicin, 2004 4. McKEE y McKEEE J. Bioqumica. McGraw-Hill-Interamericana, Mxico 2003