UNIVERSIDAD JUÁREZ AUTÓNOMA DE

TABASCO
DIVISIÓN ACADÉMICA DE CIENCIAS
BÁSICAS

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

PRÁCTICA No. 9
PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPÁTICO

CATEDRATICO
JUAN JOSE DE LA CRUZ LOPEZ
FECHA DE ENTREGA:
14 DE NOVIEMBRE 2019

“GRUPO A”

INTEGRANTES
 CORDOVA PEREYRA MARIA GUADALUPE
 MINGO BURETA DANIELA
 PEREZ LOPEZ ALONDRA PATRICIA
 REYES ÁLVAREZ ENMANUEL
 SANCHEZ MARTINEZ ADILENE

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OBJETIVOS
 General:
Determinar los valores cuantitativos en suero de bilirrubina, albumina y
proteínas totales.

 Específicos:
Revisar conceptos generales sobre la anatomía y fisiología del hígado.
Describirlos principales trastornos hepáticos y las pruebas de laboratorio
utilizadas para su diagnóstico.
Realizar la Cuantificación de Proteínas totales, albúmina y bilirrubinas, así
como de los parámetros derivados.
Interpretar los resultados y realizar el diagnóstico por laboratorio

INTRODUCCIÓN
Los análisis de función hepática son utilizados para diagnosticar y supervisar
enfermedades o daño en el hígado. Miden los niveles de determinadas enzimas y
proteínas en la sangre. Algunos de estos análisis miden la forma en la que el hígado
está desempeñando sus funciones normales para producir proteínas y eliminar la
bilirrubina, un producto de desecho de la sangre. Otros análisis de función hepática
miden las enzimas que liberan las células del hígado en respuesta al daño o a la
enfermedad. Los resultados anormales en los análisis de función hepática no
siempre indican la presencia de una enfermedad en el hígado.
Histológicamente, el hígado está constituido por dos unidades celulares como son
el hepatocito y las células de Kupffer, las cuales se disponen de una forma particular
junto con el sistema arterial y venoso constituyendo el «acino hepático», que
representa la unidad estructural y funcional de la fisiología hepática. Las tareas
básicas del hígado son:
-Almacenar vitaminas, minerales, hierro y azúcares que nuestro organismo necesita
para funcionar correctamente.
-Procesar los alimentos y convertirlos en sustancias y energía que son esenciales
para nuestra correcta nutrición y para realizar nuestras actividades diarias.
-Descomponer sustancias químicas que entran o se producen en nuestro organismo
y son perjudiciales.
-Producir proteínas esenciales que nos ayudan a combatir infecciones y a coagular
la sangre.
-Controlar los niveles de hormonas y sustancias químicas que circulan en nuestro
torrente sanguíneo.

Los hepatocitos realizan todas las funciones clásicas del hígado (síntesis,
metabolización, etc.) mientras que las células de Kupffer tienen una función
inmunológica.

El hígado se encarga de realizar importantes funciones metabólicas que se

interrelacionan y coordinan con las de otros órganos y tejidos; por ello, la evaluación
de sus funciones resulta una tarea compleja. La sintomatología de las hepatopatías
es a menudo inespecífica y común a los trastornos de otros sistemas u órganos;

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aunque se pueden obtener datos valiosos a través de la historia clínica y el examen
físico, es necesario completar estas observaciones con las pruebas de laboratorio
y, frecuentemente, con estudios de gabinete.
Las principales pruebas de laboratorio que son de utilidad en el diagnóstico de los
padecimientos hepáticos se resumen a continuación:

-Albúmina y proteína total.

La albúmina es una de las diversas proteínas producidas en el hígado. El cuerpo
necesita estas proteínas para combatir infecciones y realizar otras funciones. Si los
niveles de albúmina y de proteína total son más bajos de lo normal, es posible que
el hígado presente alguna enfermedad o daño.

-Bilirrubinas
La bilirrubina es una sustancia producida durante la descomposición de los glóbulos
rojos. La bilirrubina pasa a través del hígado y se expulsa en las heces. Si los niveles
de bilirrubina (ictericia) son elevados, es posible que el hígado presente alguna
enfermedad o daño, o la presencia de ciertos tipos de anemia.

-Aspartato transaminasa
La AST es una enzima que ayuda a metabolizar los aminoácidos. Al igual que la
ALT, la AST normalmente está presente en la sangre en niveles bajos. Un aumento
en los niveles de AST puede indicar daño o enfermedad del hígado o daño
muscular.

-Fosfatasa alcalina
La ALP es una enzima que se encuentra en el hígado y los huesos y es importante
para descomponer las proteínas. Si los niveles de ALP son más altos de lo normal,
es posible que el hígado presente alguna enfermedad o daño, como una vía biliar
obstruida o ciertas enfermedades óseas.

- Gamma-glutamil-transferasa
La GGT es una enzima de la sangre. Si los niveles son más altos de lo normal, es
posible que el hígado o las vías biliares estén dañados.

-Deshidrogenasa láctica
La LD es una enzima que se encuentra en el hígado. Si los niveles son altos, es
posible que el hígado esté dañado, pero esto también ocurre en otros trastornos.

-Tiempo de protrombina
El TP es el tiempo que tarda la sangre en coagularse. Un aumento del TP puede
indicar daños en el hígado, pero también puede deberse a la toma de determinados
medicamentos anticoagulantes, como warfarina.

Determinación cuantitativa de proteínas totales

Significado clínico

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Las proteínas integran un grupo de macromoléculas bioquímicas mayores y
participan en una gran variedad defunciones del organismo, entre las que se
encuentran la respuesta inmunológica, el transporte de diversas moléculas, la
catálisis enzimática, la distribución de líquidos, el mantenimiento de la presión
oncótica del plasma y la participación en los procesos de la coagulación. Se dividen
en dos fracciones, albúmina y globulinas; con excepción de los componentes del
complemento y las inmunoglobulinas, casi todas las proteínas del suero se
producen en el hígado. Por ello, su determinación en el suero ofrece datos
importantes sobre el funcionamiento y alteraciones patológicas de diversas
actividades orgánicas, como son las gastrointestinales, hepáticas, hematológicas,
inmunológicas y renales.
Su determinación es útil en la detección de:
1) Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o aumento
en la concentración de proteínas específicas
2) Hipoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en la síntesis proteica,
perdida excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.

Determinación cuantitativa de Albúmina

Significado clínico
En el ensayo de proteínas séricas totales, se puede obtener información diagnóstica
útil para determinar la fracción de albúmina y las globulinas. Una inversión o cambio
significativo en la relación de albúmina y la globulina total se notó primero en
enfermedades del riñón y el hígado. Para determinar la relación de albúmina a
globulina (A/G), es común determinar proteína total y albúmina. Las globulinas se
calculan al restar la albúmina de la proteína total. El incremento de la albúmina en
el suero o hiperalbuminémia, casi siempre se debe a deshidratación del paciente.
La hipoalbuminemia ocurre en condiciones patológicas tales como perdida excesiva
de proteínas en el síndrome nefrótico, desnutrición, infecciones prolongadas,
quemaduras severas. Otras causas son disminución en la síntesis por una dieta
deciente, enfermedad hepática, malabsorción gamapatías de cadenas ligeras que
cursan con hipogamaglobulinemia.

Determinación cuantitativa de Bilirrubinas

Significado clínico
La bilirrubina es un tetra pirrol lineal liposoluble, que procede del metabolismo del
hem de varias proteínas, principalmente de la hemoglobina de los eritrocitos
maduros destruidos, y el resto es producto del catabolismo de hemoproteínas
tisulares como mioglobinas, catalasas, citocromos y de la eritropoyesis ineficaz. La
bilirrubina se conjuga en el retículo endoplásmico de las células hepáticas,
transformándose en glucurónido de bilirrubina, principal pigmento biliar que se
encuentra en la bilis. La ictericia es la decoloración amarillenta de la piel y la
esclerótica debida a hiperbilirrubinemia. La hiperbilirrubinemia no conjugada puede
ser motivada por la producción excesiva de bilirrubina debido a hemólisis, un
deterioro de la captación hepática o alteración en su conjugación. La
hiperbilirrubinemia conjugada se puede deber al deterioro de la excreción hepática,
provocado por enfermedad hepatocelular, sepsis, trastornos hereditarios u
obstrucción biliar extrahepática.
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FUNDAMENTO DEL MÉTODO

 Proteínas totales
Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con los iones cúpricos en medio
alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm. La
intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteínas totales
en la muestra. El reactivo también contiene yoduro como antioxidante

Imagen. Reacción de biuret, la reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a
partir de dos moléculas de urea, que es la más sencilla que da positiva esta reacción, común
a todas las moléculas que posean dos o más enlaces peptídicos consecutivos.

 Albúmina
En 1964, el verde de bromocresol (BCG) fue reportado como útil en la determinación
cuantitativa de albúmina sérica por Bartholomew y Delaney, y por Rodkey. Esta
técnica de unión fue publicada nuevamente un año más tarde por Rodkey quien
describió un procedimiento colorimétrico inverso de BCG específico para la
albúmina a un pH 7.05 y 615nm.La albúmina reacciona específicamente (sin
separación previa) con la forma aniónica del BCG, el 3, 3’, 5, 5’-tetrabromo
́ a.La albumina en presencia del BCG a pH ligeramente ácido,
cresolsulfonftalein
produce un cambio de color del indicador de amarillo-verdoso a verde-azulado.
Albúmina + verde de bromocresol Complejo verde azulado
En solución acuosa, el BCG ioniza para dar la forma monoaniónico (amarillo), que
desprotona a pH elevado para dar lugar al forma dianiónica (azul), que se estabiliza
por resonancia.

Imagen. Estructura molecular del verde de bromocresol (C21H14Br405S)

Este método al igual que de púrpura de bromocresol requieren del uso de suero, ya
que suelen sobreestimar la concentración de albúmina en presencia de fibrinógeno

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y heparina. Además estos métodos tienden a ser inexactos si el patrón proteico
sérico es anormal; para lo que se recomienda el uso de métodos inmunoquímicos.
 Bilirrubina
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfaniĺ ico diazotado
midiéndose fotométricamente.De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubina-
glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, solo la primera reacciona en
medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la solubilización con
dimetilsulfóxido (DMSO) para que reaccione (bilirrubina indirecta). En la
determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa,
correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del color formado
es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la muestra ensayada.

MUESTRA
Suero o plasma

MATERIAL

MATERIALES REACTIVOS
Baño María Proteínas totales:
Espectrofotómetro Estándar: Disolución acuosa de
Cubetas para espectrofotómetro proteínas equivalente a 5 g/dL (50
Centrífuga g/L)
Tubos de ensaye Albumina:
Agua destilada Estándar: 3.45 g/dL
Micropipetas de 1000 L y 10 L
Puntas para micropipetas
Gradilla
Guantes desechables
Gasas o papel absorbente
Recipiente con cloro al 0.5 %

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METODOLOGÍA

ALBUMINA
PROCEDIMENTO

En tres tubos marcados (B) blanco, (S) estandar y

(D) desconocido, colocar:

Mezclar con varilla. Mantener los tubos entre 15 y 28°C durante

10 minutos. Leer en espectrofotómetro a 625 nm o en
fotocolorímetro con filtro rojo (620-650 nm) llevando a cero con el
Blanco de Reactivo

PROTEÍNAS TOTALES
PROCEDIMIENTO

Mezclar bien y dejar 10 min a

temperatura ambiente (20 - 25ºC).

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Lectura
 Longitud de onda: 540 nm
 Blanco: el contenido de BL
 Estabilidad del color: un mínimo de 3 horas.

BILIRRUBINA
procedimiento

Mezclar e incubar a temperatura ambiente (20 – 25

°C)

Leer exactamente a los 10 minutos

Lectura
Longitud de onda: 540 nm

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RESULTADOS

PROTEINA ALBUMINA BILIRRUBINA

BLANCO 0.000 0.000 0.000

ESTÁNDAR 0.364 0.673 0.333

CONTROL 0.223 0.505 0.278

MUESTRA 0.333 0.515 0.905

PROTEINAS
𝐴𝑏𝑠. 𝑃𝑅
𝑋5 = 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎𝑠/𝑑𝐿
𝐴𝑏𝑠. 𝑆𝑇
 (M)
0.333
𝑥5 𝑔/𝑑𝐿 = 4.57 𝑔/𝑑𝐿
0.364
 (CONTROL)
0.223
𝑋5 𝑔/𝑑𝐿 = 3.06𝑔/𝑑𝐿
0.364
ALBUMINA
 (M)
0.515 𝑔
(3.45 ) = 2.64 𝑔/𝑑𝐿
0.673 𝑑𝐿
 (CONTROL)
0.505 𝑔
(3.45 ) = 2.58 𝑔/𝑑𝐿
0.673 𝑑𝐿
 GLOBULINAS = Proteínas totales - Albumina
𝑔
(4.57 𝑔/𝑑𝐿) − (2.64 ) = 1.93 𝑔/𝑑𝐿
𝑑𝐿
 Relación Alb/ Globulina = Alb/ Globulina
𝐴 2.64 𝑔/𝑑𝐿
= = 1.36 𝑔/𝑑𝐿
𝑔 1.93 𝑔/𝑑𝐿

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 BILIRRUBINA
4.48 𝑔/𝐿
𝑓 = 13.45 𝑚𝑔/𝑑𝐿
0.333
 (M)
𝑚𝑔
(0.905) (13.45 ) = 12.17 𝑚𝑔/𝑑𝐿
𝑑𝐿
 (CONTROL)
𝑚𝑔
(0.278) (13.45 ) = 3.73𝑚𝑔/𝑑𝐿
𝑑𝐿
Se acepta el control ya que se encuentra dentro del rango favorable.

 BILIRRUBINA DIRECTA = 9.3 mg/dL (conjugada)

 BILIRRUBINA INDIRECTA= 3.07 mg/dL (No conjugada)
 BI= BT – BD = 12.17 mg/dl m – 9.1 mg/dL = 3.07 mg/dl

ANÁLISIS Y DISCUCIÓN
Las reacciones que pudimos apreciar en esta práctica son del tipo química y
colorimétrica, esto dado por el cambio de color al reaccionar con otra molécula. En
el caso de las Proteínas Totales, da un complejo color violeta con máximo de
absorción a 540 nm; en el caso de la Albumina, reacciona en presencia del BCG a
pH ligeramente ácido, produce un cambio de color del indicador de amarillo-verdoso
a verde-azulado; y la Bilirrubina reacciona con el ácido sulfanílico en presencia de
cafeína, que da un azopigmento.
Los resultados que obtuvimos de Albumina, Proteínas Totales (PT) y Bilirrubina
total, al realizar la metodología descrita en cada uno de los insertos el valor de cada
control están en los rangos de aceptación para los controles patológicos, por lo que
los valores expresados en los cálculos correspondientes son aceptados y así se
pueden aprobar los resultados que se obtuvieron en las muestras, con la certeza de
que no son erróneos.
En PT y Albumina sus resultados nos dieron entre los valores patológicos, por lo
que se puede intuir que hay alguna anomalía presente, en el caso de PT hay un
indicio de hipoproteinemia, esto puede deberse a pérdidas renales, desnutrición,
infecciones prolongadas, etc.; en la Albumina sus resultados arrojan a una
hipoalbuminemia que ocurre en condiciones patológicas tales como pérdida
excesiva de proteínas en el síndrome nefrótico, desnutrición, infecciones
prolongadas, quemaduras severas. Otras causas son disminución en la síntesis por
una dieta deficiente, enfermedad hepática o malabsorción.
La bilirrubina directa nos dio un valor un tanto alto, la razón puede deberse a una
mala manipulación manual, mas sin embargo el control estaba entre el rango
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aceptable, por lo que para hacer los cálculos de bilirrubina indirecta se tuvo que
emplear un valor dado por el profesor, y así tener valores congruentes a la realidad.
CONCLUSIÓN
La realización correcta de un método manual y la certificación de un equipo de
espectrofotometría, son de gran importancia para aceptar resultados obtenidos de
una muestra, la concentración del control patológico de Proteínas Totales fue
aceptada, por lo que la presencia de hipoproteinemia puede estar relacionada a
una patología existente en el paciente. En el caso de la concentración del control
patológico de la Albumina fue aceptada, por lo que al presentarse la
hipoalbuminemia se ve una relación con el síndrome nefrótico debido a la perdida
excesiva de proteínas. Los resultados obtenidos nos ayudan a conocer el estado en
el que se encuentran estos parámetros y así poder detectar una alteración en la
fisiología del cuerpo, ayudando así a un diagnostico en relación al historial clínico
que presenta el paciente.

BIBLIOGRAFIA
1. Fody E. P.Función hepática: En Química clínica: principios, procedimientos y
correlaciones.Bishop, M. L.; Fody, E. P.;Schoeff L. E. McGraw-Hill.5a edición.
Pp 475-492.2.
2. Foundation for Medical. (2015). FUNCIÓN HEPÁTICA. 2019, de CLINIC
MAYO Sitio web: https://www.mayoclinic.org/es-es/tests-procedures/liver-
function-tests/about/pac-20394595.
3. HONCODE & ASSCAT. (2018). EL HIGADO. 2019, de ASSCAT(asociación
catalana de pacientes hepáticos) Sitio web: https://asscat-
hepatitis.org/consecuencias-hepaticas/el-higado/

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