UNIVERSIDAD AUTONOMA DE

ZACATECAS
FRANCISCO GARCÍA SALINAS
ÁREA DE CIENCIAS DE LA SALUD
UNIDAD ACADÉMICA DE
CIENCIAS QUÍMICAS
P.E. DE QUÍMICO FARMACÉUTICO
BIÓLOGO
QUINTO SEMESTRE GRUPO “C”

ALFA AMILASA SALIVAL

Presentan
 ABRAHAM LOPEZ ARELLANO
 CARLOS ALBRTO JASSO JASSO
 MARTIN MARTÍNEZ HERNÁNDEZ
 Objetivo
 Determinar las condiciones
óptimas en las cuales la AMILASA
SALIVAL
amilasa salival tiene su
mayor actividad enzimática.
ALMIDON
 Cuantificar la glucosa
producida por la enzima.

GLUCOSA
 Amilasa salival
 La amilasa salival es una enzima que posee la misma
especificidad que la amilasa del jugo pancreático: reduce
el almidón a moléculas de oligosacáridos.
 El pH óptimo de la amilasa salival es de alrededor de 7.
pero la enzima es activa a un pH de entre 4 a 11.
 La digestión de los carbohidratos comienza en
la boca, donde los alimentos se mezclan con la
Amilasa salival (ptialina) que degrada los
enlaces alfa 1,4 del almidón liberándose
Maltosa, Glucosa y dextrinas de almidón que
poseen todos los enlaces alfa 1, 6 de la
amilopectina.
 El almidón es una mezcla de dos polisacáridos,
amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%),
ambos formados por unidades de glucosa.
Preparación del Almidón al 2% (Sustrato)

Poner a calentar 20
Pesar 2 g de Almidón
mL de agua

Incorporar el almidón
Disolver el almidón disuelto al agua
en 20 mL de agua fría hirviendo durante 3
min.

Colocar la solución en
Llevarlo a la tarja y
un matraz de aforo de
esperar que enfrié
100 mL y aforar.
Preparación de soluciones buffer
pH=7

Realizar
cálculos para
preparar
soluciones
buffer de:

pH= pH= 9
3
 Amilasa
Amilasa Salival
Salival

Temperatura
Temperatura
pH
pH optimo
optimo [E]
[E] optimo
optimo [S]
[S] optimo
optimo Tiempo
Tiempo de
de reacción
reacción
adecuada
adecuada

Agregar
Agregar aa 33 tubos
tubos 2
2 Agregar
Agregar 2
2 mL
mL dede Agregar
Agregar 22 mL
mL de
de Agregar
Agregar 22 mL
mL de
de Agregar
Agregar 22 mL
mL de
de
mL de solución
mL de solución solución
solución buffer de
buffer de solución
solución buffer de
buffer de solución
solución buffer de
buffer de solución
solución buffer de
buffer de
Buffer
Buffer aa diferentes
diferentes pH
pH 7
7 pH
pH 77 pH
pH 77 pH
pH 77
pH 3,7,9.
pH 3,7,9.

Variar
Variar la
la
Agregar
Agregar 22 mL
mL de
de Agregar
Agregar 2
2 mL
mL de
de Agregar
Agregar 22 mL
mL de
de Agregar
Agregar 22 mL
mL de
de
concentración
concentración del
del
Almidón al
Almidón al 2% 2% Almidón al 2%
Almidón al 2% sustrato
sustrato sustrato
sustrato
sustrato
sustrato

Ponerlos
Ponerlos aa un
un baño
baño Ponerlos
Ponerlos aa un
un baño
baño Ponerlos
Ponerlos aa un
un baño
baño Ponerlos
Ponerlos aa un
un baño
baño
Variar
Variar la
la temperatura
temperatura
maria
maria de 37º C
de 37º C maria
maria de 37º C
de 37º C maria
maria de 37º C
de 37º C maria
maria de 37º C
de 37º C

Agregar
Agregar 22 mL
mL de
de Variar
Variar concentración
concentración Agregar
Agregar 2mL
2mL de
de la
la Agregar
Agregar 2mL
2mL de
de la
la Agregar
Agregar 2mL
2mL de
de la
la
Amilasa Salival
Amilasa Salival enzimática
enzimática enzima
enzima enzima
enzima enzima
enzima
 Prueba de Lugol

Agregar a una placa de

porcelana y una gota de lugol

Añadir una gota de la reacción

contenida en el tubo

Observar el color y parar

hasta que se haya hidrolizado

Repetir los pasos para los

demás tubos de ensaye
Cuantificación de Glucosa Colocar
Colocar 7
7 tubos
tubos de
de ensaye
ensaye de
de colocar
10x100 colocar en
en una
una celda
celda la
la solución
solución en
en otra
otra celda
celda colocar
colocar la
la muestra
muestra
10x100 en una gradilla yy
en una gradilla
blanco
marcarlos blanco (tubo
(tubo #1)
#1) y
y calibrar
calibrar el
el standar y
standar y anotar
anotar la
la absorbancia
absorbancia
marcarlos del
del 1-7
1-7 para
para espectrofotómetro. registrada
identificarlos espectrofotómetro. registrada en
en el
el espectro.
espectro.
identificarlos

retirar
retirar los
los tubos
tubos del del baño
baño maria
maria después
después sese irán
irán colocando
colocando cada
cada
adicionar
adicionar aa cada
cada tubo
tubo 1000
1000 y
y lllevarlos
lllevarlos al
al muestra
muestra que se tiene
que se tiene en
en lo
lo
microlitros
microlitros del
del reactivo(glucosa-
reactivo(glucosa- espectofotometro(ahi
espectofotometro(ahi se se llevara
llevara los
los tubos 3-7 y se tomaran las
tubos 3-7 y se tomaran las
LS
LS reactivo
reactivo enzimatico)
enzimatico) a
a cabo la lectura de
cabo la lectura de lecturas
lecturas correspondientes
correspondientes a a
absorbancia
absorbancia a a 505
505 nm)
nm) cada
cada uno.
uno.

con
con las
las absorbancias
absorbancias ya ya
llevar
llevar estos
estos tubos
tubos a
a baño
baño maria
maria estos
estos tubos
tubos estaran
estaran dentro
dentro del
del determinadas
determinadas podremos
podremos
por
por 10 minutos, con
10 minutos, con baño
baño maria 37 C otros
maria 37 C otros 5
5 calcular
calcular la
la cantidad
cantidad dede glucosa
glucosa
temperatura
temperatura de
de 37°C
37°C minutos
minutos aprox
aprox que
que tiene cada muestra y
tiene cada muestra y saber
saber
cual es el factor óptimo
cual es el factor óptimo

en
en los
los tubos
tubos del
del 3-7
3-7 se
se
despues
despues adicionar
adicionar al
al tubo
tubo #2,
#2, adicionaran
adicionaran 10 microlitros de
10 microlitros de las
las
10 microlitros de glucosa
10 microlitros de glucosa muestras
muestras que contengan la
que contengan la
solucion
solucion standar
standar enzima(en
enzima(en el
el tubo
tubo que
que
corresponda)
corresponda)
 Datos del reactivo:
Grupo Mer Lab Glucosa-LS

Química Clínica

Código 8001502 GLUCOSA-LS

Presentación 1x 250ml

• Glucosa solución estándar (100ml/dl)

• Glucosa –LS reactivo enzimático.

100
Factor= Solución Estándar

Factor x Absorbancia=Glucosa (mg/dL)

RESULTADOS.
 pH Óptimo
Tubos 1 2 3

pH 3 7 9

[E] 2ml 2 mL 2 mL

[S] 2 mL 2 mL 2 mL

Temperatura 37 °C  

Tiempo 46 seg 15seg 82 seg

Lugol hidrolizo hidrolizo hidrolizo

 Concentración Enzimática óptima
tubo 1 2 3 4 5
Solución buffer 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
ph 7

T centigrados 37 37 37 37 37

Concentración de 0.5ml 1ml 1.5ml 2ml 2.5ml

enzima

Concentración de 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml

sustrato
 Lecturas de Absorbancia
Numero de Absorbacias a 505 nm Promedio Cantidad de glucosa en mg/dl
tubo de
absorbanci
as
1 0.005 0.004 0.006 0.005 3.90625
2 0.019 0.017 0.019 0.018 14.0625
3 0.020 0.020 0.020 0.020 15.625
4 0.060 0.063 0.062 0.061
47.65625
5 0.047 0.047 0.046 0.046 35.9375
 ABSORBANCIAS VARIACION ENZIMA
0.07

0.06

0.05

0.04

ABSORBANCIAS VARIACION ENZIMA

0.03

0.02

0.01

0
1
2
3
4
5
Concentración de Sustrato óptimo
tubo 1 2 3 4 5
Solución 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
buffer pH 7
T centigrados 37 37 37 37 37

Concentració 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml

n de enzima

Concentració 0.5ml 1ml 2ml 3ml 4ml

n de sustrato
 Lecturas de
Absorbancia
Numero de Absorbacias a 505 nm Promedio de Cantidad de glucosa en
tubo absorbancias mg/dl

1 0.001 0.0030 0.003 0.002 1.5625

2 0.003 0.003 0.003 0.003 2.3437

3 0.079 0.079 0.079 0.079 61.7187

4 0.054 0.059 0.060 0.057 44.5312

5 0.032 0.033 0.032 0.032 25.2604

 ABSORBACIAS VARIACION SUSTRATO
0.08

0.07

0.06

0.05

0.04
ABSORBACIAS VARIACION SUSTRATO

0.03

0.02

0.01

0
1
2
3
4
5
 Temperatura Óptima
tubo 1 2 3 4 5

Solución buffer 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml

ph 7
T centigrados 20 30 37 40 50

Concentración de 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml

enzima
Concentración de 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
sustrato
Tiempo 1.30 min 1.32 min 46 seg 1.40 min 1.55min
 Velocidad de Reacción
Tubos 1
pH 7
[E] 2ml
[S] 2ml
Temperatura 37
Lectura de Absorbancia
Tiempo El necesario
Lugol 15 seg
Tubos Absorbancia
Glucosa 71.78 mg/dL
15 seg 0.229
Discusión
La enzima que utilizamos fue la amilasa salival y un sustrato de almidón,
como todas las enzimas ésta tiene sus condiciones óptimas en donde su
actividad enzimática es máxima, por lo cual utilizamos procesos en los
cuales variamos estas condiciones para determinar el punto ó ptimo en
cada condició n en la cual esta actividad enzimá tica era mayor.
Conclusión
Variando los distintos factores que modifican la actividad enzimática de la alfa
amilasa salival pudimos determinar las condiciones óptimas a las que trabaja de
mejor manera.
 Bibliografía
 Berne Y Levy Fisiologia. Matthew N.
Levy,Bruce M. Koeppen, Bruce A. Stanton.
Pág-452 Elsevier España, 2006- 836 pág.
 Cox M. M. y Nelson, D.L. (2006). Lehninger.
Principios de Bioquímica. Barcelona. Editorial
Omega