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Practika 6 -Eosinofilos

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hipersensibilidad, eosinofilia
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Práctica de Fisiopatología 2010

Universidad Autónoma de Zacatecas ³Francisco García Salinas´ Área de Ciencias de la Salud Unidad Académica de Ciencias Químicas Químico Farmacéutico Biólogo
REPORTE DE PRÁCTICA: LABORATORIO DE FISIOPATOLOGIA PRACTICA 6

DETERMINACIÓN DE EOSINÓFILOS EN SECRECIÓN NASAL

*López Arellano Abraham Docente Rafael Alberto Cervantes Villagrana *5°Semestre Grupo ³C´ Programa educativo Q.F.B. UACQ, ACS, Campus UAZ Siglo XXI, carretera Zacatecas-Guadalajara Km 6 s/n ejido La Escondida Cp. 98160 Zacatecas Zac. Ciclo agosto-diciembre 2010 Octubre 2010 OBJETIVO Identificar la presencia de eosinófilos en muestras de secreción nasal. RESUMEN La aparición de eosinófilos en secreción nasal es un dato importante para la confirmación de algunas enfermedades alérgicas, por lo que para identificar algunos padecimientos de origen alérgico como la rinitis alérgica realizamos una extensión de secreción nasal en un portaobjetos y teñimos con colorante para células sanguíneas como lo es el de Wright-Giemsa e identificamos las distintas células sanguíneas de acuerdo a su morfología microscópica para esto hacemos una observación con microscopio óptico en distintos campos de la muestra.

Palabras clave: hipersensibilidad, alérgeno, eosinófilos, alergias, epítopes.

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Laboratorio de Fisiopatología
LÓPEZ ARELLANO ABRAHAM UAZ, ACS, UACQ, QFB, QUINTO SEMESTRE GRUPO C

Práctica de Fisiopatología 2010
INTRODUCCIÓN Y FUNDAMENTO Cuando se es alérgico a algo, el sistema inmunitario percibe equivocadamente esa sustancia como nociva para el cuerpo (las sustancias que provocan reacciones alérgicas se llaman alérgenos). El sistema inmunitario, en un intento de proteger al cuerpo contra algo que percibe como una amenaza, produce anticuerpos IgE contra el alérgeno. A su vez, estos anticuerpos hacen que determinadas células del cuerpo libren ciertas sustancias químicas al torrente sanguíneo, una de las cuales es la histamina. Las reacciones alérgicas pueden ser leves, como el moqueo de nariz o graves, como tener dificultades para respirar. Algunos tipos de alergia producen múltiples síntomas, y en casos raros, las reacciones alérgicas pueden ser muy graves, lo que se conoce como choque anafiláctico o reacción anafiláctica. ¿Qué son las alergias? Una alergia es una reacción desproporcionada del sistema inmunitario a una sustancia que es inofensiva para la mayoría de la gente. Pero en una persona alérgica, el sistema inmunitario trata a la sustancia como un invasor y reacciona de manera inapropiada, provocando síntomas que pueden ir de las molestias leves a problemas que pueden poner en peligro la vida de la persona. Tipos de alergias Hay cuatro categorías básicas de respuestas de hipersensibilidad 1) las de tipo 1 o mediadas por inmunoglobulinas de la clase IgE, que incluyen shock anafiláctico, fiebre del heno y asma bronquial, 2) Reacciones del tipo II o mediadas por anticuerpos del tipo IgG dirigidos contra antígenos presentes en la superficie de células que causan reacciones hemolíticas transfucionales por ejemplo.3)Reacciones del tipo III que incluyen anticuerpos IgG e IgM y son resultado de la formación de complejos de antígeno-anticuerpo insolubles que se depositan en los vasos sanguíneos o los riñones y causan lesiones tisulares localizadas, 4)Respuestas del tipo IV o mediadas por células T en las que los linfocitos T sensibilizados promueven una respuesta inflamatoria cuando se encuentran con el antígeno sensibilizante. Alérgeno En el contexto de una respuesta alérgica los antígenos suelen llamarse alérgenos. Los alérgenos típicos incluyen las proteínas del polen, los ácaros presentes en el polvo ambiental, la caspa de los animales, los alimentos y sustancias químicas como el antibiótico penicilina. La exposición al alérgeno puede tener lugar a través de la inhalación, la ingestión, la inyección o el contacto cutáneo.
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Mecanismo que ocurre en los procesos alergénicos

Tipo II

Tipo I

Tipo IV

Tipo III

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Algunos alérgenos Los ácaros del polvo, el polen, El moho , Las cucarachas, Leche de vaca (o proteína de la leche de vaca),Soya, trigo, cacahuates, veneno de insectos, medicamentos, algunas sustancias químicas contenidas en distintos productos como cosméticos ,productos de belleza y algunos detergentes también la penicilina, resinas de hierbas venenosas, órganos trasplantados entre otros. Epítopes Los antígenos que en general son grandes y con estructuras químicas complejas, son degradadas biológicamente en unidades químicas menores o péptidos. Estos sitios separados y activos desde el punto de vista inmunitario se denominan determinantes antigénicos o epítopes. Es la forma molecular singular de un epítope la que es reconocida por un receptor específico de inmunoglobulina encontrada en la superficie del linfocito o por el sitio de unión al antígeno de un anticuerpo secretado. Un solo antígeno puede contener determinantes antigénicos múltiples, cada uno de los cuales estimula un clon distinto de linfocitos para producir un tipo único de anticuerpos Leucocitos involucrados en los procesos alérgicos El tipo I de hipersensibilidad está mediado por la inmunoglobulina E, que es liberada por mastocitos y basófilos El tipo II de hipersensibilidad se produce cuando los anticuerpos se ligan a antígenos localizados sobre las células propias del paciente, marcándolas para su destrucción. También recibe el nombre de hipersensibilidad dependiente de anticuerpos o citotóxica y es mediada por anticuerpos de tipo IgG e IgM. Los inmunocomplejos (agregados de antígenos, proteínas del complemento, y anticuerpos IgG e IgM) depositados en varios tejidos desencadenan la hipersensibilidad de tipo III. La hipersensibilidad de tipo IV (también conocida como "hipersensibilidad de tipo retardado") generalmente tarda entre dos y tres días en desarrollarse. Las reacciones de tipo IV están implicadas en muchas enfermedades autoinmunes e infecciosas, pero también incluyen dermatitis de contacto. Estas reacciones son mediadas por las células T, monocitos y macrófagos Las alteraciones alérgicas son producidas por desequilibrios a nivel de linfocitos T en sus poblaciones Th1 y Th2.Th1: funciones relacionadas con citotoxicidad y respuestas inflamatorias. Liberan IL-2 y lucha contra patógenos intracelulares como virus, bacterias y parásitos. Th2: estimulan con mayor eficacia a las células B para que proliferen y produzcan anticuerpos. Liberan IL-4, IL-5, IL-6, IL.13, su función principal es contra microorganismos de vida libre. Eosinófilos Un eosinófilo es un leucocito de tipo granulocito pequeño derivado de la médula ósea, que tiene una vida media en la circulación sanguínea de 3 a 4 días antes de migrar a los tejidos en donde permanecen durante varios días. Su desarrollo en la médula ósea es estimulado por diversas interleucinas, como la IL-5, la IL-3 y el factor estimulante de colonias granulocito-macrófago. Es característico su núcleo bilobulado, al igual que sus distintivos gránulos citoplásmicos. Estas proteínas granulares son responsables de muchas funciones proinflamatorias,
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principalmente en la patogénesis de las enfermedades alérgicas, como célula efectora de hipersensibilidad inmediata, así como en la muerte de parásitos. Una de las enzimas más importantes que contienen sus gránulos es la histaminasa, que se encarga de hidrolizar la histamina, regulando así la respuesta alérgica. Los gránulos están formados por un núcleo electrodenso rodeado por una matriz electrotransparente, y contienen cuatro clases principales de proteínas: proteína básica mayor (MBP), proteína catiónica del eosinófilo (ECP), peroxidasa del eosinófilo (EPO) y neurotoxina derivada del eosinófilo (EDN). Los eosinófilos son capaces de sintetizar de nuevo otros productos, como mediadores lipídicos (PAF, LTC4), citocinas (IL-3, IL-5, GM-CSF), quimiocinas (eotaxina) y óxido nítrico (NO). Función Los eosinófilos interaccionan con otras células por la expresión de múltiples receptores en su superficie. Además, son células fagocitarias que demuestran especial afinidad por los complejos antígeno-anticuerpo, por lo que la mayoría de los eosinófilos son atraídos por quimiotaxis. También los eosinófilos pueden ser atraídos por sustancias liberadas de los basófilos, como la histamina. Los eosinófilos pueden regular la respuesta alérgica y las reacciones de hipersensibilidad mediante la neutralización de la histamina por la histaminasa, y a su vez producir un factor inhibidor derivado de los eosinófilos para inhibir la desgranulación de las células cebadas o de los basófilos, que contienen sustancias vasoactivas. Los eosinófilos juegan un papel de defensa del huésped frente a microorganismos no fagocitables, poseen una función citotóxica (por sus proteínas granulares), inmunoreguladora (por las citocinas que libera) y son capaces de participar en la reparación y remodelación tisular (liberando TGF- ). Los mecanismos de acción de los eosinófilos mejor estudiados tienen que ver con la alergia y en la defensa contra parásitos. Sus receptores para IgA explican su fijación a los parásitos recubiertos previamente por esta inmunoglobulina, capacitándoles para destruir sus larvas, como acontece en la esquistosomiasis o bilharziasis. MATERIAL Y EQUIPO

-Portaobjetos con extremo esmerilado
-Hisopo de alginato -Colorante de Wright-Giemsa -Microscopio óptico
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PROCEDIMIENTOS (DIAGRAMAS) Obtención de la muestra

Preparar el material verificando que esta limpio

Preparar 2 extenciones en portaobjetos

Anotar la hora de obtención

Recostar al paciente para exponer las fosas nasales

Introducir un isopo al nivel del tabique nasal y tomar la muestra

Teñir la preparación despues de la obtención o fije con metanol por 1 min

Tinción

Sumergir la preparación en WrightGiemsa 2min.

Retirar el exceso de colorante.

Verificar la calidad de la tinción.

Retirar el colorante

Sumergir en solución de lavado 2 min.

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Observación

Observar en el menor aumento e identificar el área idonea

Obtener recuento diferencial de 100 celulas PMN

Reportar la cantidad e leucocitos por los menos en 10 campos microscópicos.

Cambiar a inmersión

Buscar eosinófilos y polimorfonucleares

RESULTADOS

DISCUSIÓN La muestra no fue realmente representativa ya que se tomo de un paciente sano por lo que solo pudimos observar un eosinófilo y un neutrofilo además de que muchos campos estaban sobre teñidos y se dificultaba la observación por lo que hay que poner atención para realizar una correcta tinción que permita una mejor
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observación y con ello una mejor determinación del número y tipo de células en la secreción.
CUESTIONARIO

1.-Defina rinitis alérgica. (Rinoconjuntivitis alérgica) Es una enfermedad que afecta a la mucosa nasal y produce estornudos, picor, obstrucción, secreciones nasales y en ocasiones falta de olfato. Suele ser muy persistente y dar síntomas diarios, aunque dependiendo de la causa de la inflamación puede dar síntomas solo en temporada concretas. 2.- ¿Qué alérgenos son los productores de la rinitis alérgica? Rinitis alérgica perenne: puede estar causada por ácaros, hongos, epitelios de animales. Rinitis alérgica aperiódica: puede estar causada por hongos, epitelios de animales, profesional. Rinitis alérgica estacional: puede estar causada por polen de gramíneas, polen de pino polen de parietaria, polen de artemisa. 3.- ¿Cuál es la fisiopatología de la rinitis alérgica? Las rinitis alérgicas pueden ser divididas en los tipos perenne y estacional según la cronología de los síntomas. Las personas con el tipo perenne de rinitis alérgica experimentan síntomas durante todo el año mientras que las que sufren rinitis alérgica estacional presentan síntomas intensos en los periodos de exposición e gran cantidad e alérgenos. 4.- ¿Qué tipo de hipersensibilidad está involucrada en la rinitis alérgica? De tipo I mediadas por IgE que comienzan rápidamente. 5.- ¿Cuál es el cuadro clínico de la rinitis alérgica? Es una enfermedad que afecta a la mucosa nasal y produce estornudos, picor, obstrucción, secreciones nasales y en ocasiones falta de olfato. La rinitis alérgica no solo produce síntomas nasales sino que con frecuencia también se asocia con otros trastornos crónicos de las vías aéreas, como sinusitis y asma bronquial. Los ataques intensos pueden ser acompañados por malestar general, fatiga y dolor muscular por los estornudos. La fiebre está ausente. La obstrucción de los senos puede causar cefalea. En el adulto la complicación principal es la asociación de sinusitis polipoidea (en ocasiones con intolerancia a antiinflamatorios no esteroideos AINEs) o la apnea del sueño. En los niños la mala respiración puede producir alteraciones del sueño y deformidades en la dentición con la consiguiente necesidad de corrección por el odontólogo. 6.- ¿Qué prueba solicitaría para el diagnóstico de rinitis alérgica? su El diagnóstico va encaminado a definir los síntomas y su época de aparición, duración, su frecuencia y sus posibles desencadenantes.
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Se utiliza la rinoscopia anterior, que mediante un aparato (rinoscopio), se ve la mucosa nasal y se aprecian diferencias de coloración y de aumento del tamaño de los cornetes o la presencia de pólipos. Las pruebas cutáneas con alérgenos (ácaros del polvo doméstico, pólenes epitelios, etc..) nos ofrecen información de las posibles causas. La intensidad de la rinitis se puede medir mediante la obtención de las presiones de paso del aire a través de la nariz mediante la medición del pico inspiratorio nasal o la rinomanometría. La medición de células eosinófilas en el exudado nasal se usa cada vez menos por ser poco específico de cada rinitis y no ayuda al diagnóstico. 7.- Mencione los estudios que pediría para confirmar la enfermedad Una identificación microscópica de un número aumentado de eosinófilos en un extendido nasal y pruebas cutáneas para identificar los alérgenos causales. Como exploraciones complementarias, que nos dan información sobre complicaciones de sinusitis podemos utilizar la Rx senos ó el TAC de senos paranasales. 8.-Mencione los medicamentos que generalmente se usan para tratar alergias. El tratamiento en la mayoría de los casos incluye la administración de antihistamínicos y descongestivos por vía oral. Los corticosteroides intranasales son eficaces cuando se les utiliza de manera adecuada. EL cromolín intranasal, un fármaco que estabiliza a los mastocitos y previene se desgranulación, puede ser útil, sobre todo cuando se administra antes del contacto esperado con un alérgeno determinado. En algunos casos, el alergólogo también recomendará la inmunoterapia (vacunas para la alergia).

CONCLUSION Con esta observación aprendimos a determinar el número de eosinófilos en una muestra de secreción nasal lo cual es importante a la hora de diagnosticar una alergia en un paciente ya que al haber eosinofilia es un indicador prematuro de que se lleva a cabo una respuesta de hipersensibilidad además es relativamente fácil y rápida esta prueba.
REFERENCIAS

- Kumar V, Abbas A.K. y Fausto N. 2005 Robbins y Cotran Patología estructural y funcional 7ª ed., Editorial Elsevier Saunders España. -Porth M C. 2007. Fisiopatología. Salud-Enfermedad: un enfoque conceptual. 7ª ed. Editorial Médica Panamericana, México. -Ganong FW.2003 Fisiología Medica 22ª edición de manual moderno - http://www.tuotromedico.com/temas/rinitis.htm
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