Sede Sede II

Semestre 3° SEMESTRE

Sección

Docente DRA. Jaqueline Santarelli da Silva

Catedra Microbiologia I

Unidad Unidad VII

Tema Antibióticos que actúan

sobre la función y
estructura del ADN.
 Antibióticos que actúan sobre la función y
estructura del ADN.

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 QUINOLONAS
• Años 70 : primera quinolona obtenida por síntesis, mientras
se trabajaba la cloroquina, fue el ÁCIDO NALIDIXICO.

• NO útil en infecciones sistémicas por:

- Pobre penetración tisular
- Limitado espectro bacteriano
- Rápida emergencia de resistencia
- Alto grado de cardiotoxicidad
- Frecuentes efectos adversos en el SNC si se administra en
dosis elevadas.

• Las nuevas quinolonas poseen un átomo de flúor en su molécula:

fluoroquinolonas.

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Antibióticos que actúan sobre la función y estructura
del ADN Fluoroquinolonas
• Mecanismo de acción: inhibe la actividad de la ADN girasa
o topoisomerasa II (en bacterias gramnegativas) y
topoisomerasa IV (en bacterias grampositivas), enzimas
esenciales para la supervivencia bacteriana.

• DNA gyrase / topoisomerase IV hace que la molécula de

ADN sea compacta y biológicamente activa.

• Al inhibir esta enzima, la molécula de ADN comienza a

ocupar un gran espacio dentro de la bacteria y sus extremos
libres determinan la síntesis incontrolada de ARN
mensajero y proteínas, determinando la muerte de la
bacteria.
 Mecanismo de resistencia

Mutación en el
gyr A ( gen
Gram negativos : quecodifica
Topoisomerasa II ( ADN subunidad A ) de
girasa) la ADN girasa

Gram positivos : topoisomerasa
IV (secundariamente sobre
topoisomerasa II)
Mutación en parC
(gen que codifica
la subunidad C de
la topoisomerasa
IV)

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 Antibióticos que actúan sobre la función y
estructura del ADN Fluoroquinolonas
- Ácido nalidíxico
Primer representante de quinolonas para uso clínico.
Activo contra enterobacterias.
Restringido al tratamiento de infecciones urinarias no complicadas y diarrea bacteriana.

- Norfloxacina
Activo contra enterobacterias y Pseudomonas aeruginosa.
Está indicado casi exclusivamente para el tratamiento y la profilaxis de infecciones urinarias no complicadas, prostatitis y profilaxis
primaria y secundaria de peritonitis bacteriana espontánea.

- Ciprofloxacina
Activo contra enterobacterias, y actividad constante en Pseudomonas aeruginosa. Aumento de la actividad en cocos gram positivos,
pero sin actividad para Streptococcus pneumoniae.
Indicado en infecciones urinarias, prostatitis, infecciones de la piel, infecciones de las articulaciones óseas, infecciones del tracto
gastrointestinal y algunas enfermedades de transmisión sexual. Presenta restricciones al tratamiento de las infecciones por Staphylococcus
aureus como monoterapia, debido al riesgo de una selección rápida de cepas previamente resistentes y el fracaso terapéutico posterior
durante el tratamiento. No está indicado para el tratamiento de la neumonía, ya que no tiene efecto sobre el neumococo.

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Antibióticos que actúan sobre la función y
estructura del ADN Fluoroquinolonas
Ofloxacina
Características similares a las presentadas por la ciprofloxacina, aunque su uso está restringido en el país a pacientes sometidos a
infecciones por Micobacterium tuberculosis, resistentes a los fármacos tuberculostáticos de primera línea.

Levofloxacina
Mantiene la actividad en enterobacterias y Pseudomonas aeruginosa y proporciona una cobertura constante para gram
positivos, incluidos Streptococcus pneumoniae y microorganismos atípicos como Legionella pneumophila, Micoplasma
pneumoniae y Chlamydophila pneumoniae.
La actividad antibacteriana segura en neumococo, Haemophyllus influenzae, Moraxella catarralis y bacterias atípicas es una opción
atractiva para el tratamiento empírico de la neumonía y la sinusitis, la traqueobronquitis y la laringitis bacteriana. Tratamiento de
infecciones de la piel, infecciones del tracto urinario, prostatitis, infecciones de las articulaciones óseas y diarrea bacteriana.

Moxifloxacina
Evolucionó en potencia y en el espectro de acción antimicrobiana, con estreptococos que tienen valores de MIC mucho más altos para
Moxifloxacina en comparación con Levofloxacina.
Indicado para el tratamiento de infecciones respiratorias altas, neumonía e infecciones complejas de la piel y tejidos blandos, y puede
utilizarse tanto en monoterapia empírica. La ganancia de espectro también se justifica por la actividad en anaerobios, incluyendo
Bacteriodes flagilis, que contribuyó a su indicación en el tratamiento de infecciones del tracto intestinal menos grave, también como
monoterapia empírica.

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INDICACIONES MÁS IMPORTANTES:

•Infección urinaria complicada

•Prostatitis bacteriana
•Diarrea aguda Infecciosa
•Exacerbación infecciosa de fibrosis quistíca,
•tifoidea,
•portadores crónicos de Solmonella tipfiy
•otitis externa invasiva por P. aeruglnosa,
•osteomielitis por gram(-) y por estafilococos (asociadas a RFP).
•Puede emplearse en casos seleccionados de infección urinaria no
complicada, reagudizaclón de bronquitis crónica, neumonías intra y
extrahospitalarías, infecciones por gonococo (uretral y no uretral),
infecciones por Chlamydiá, Mycolasma pneumonlae (especialmente
ofloxacina, fleroxa cina), chancro blando, infección de píe diabético,
lepra, tuberculosis (especialmente cíprofloxacína y levofloxacina),
profilaxis en neutropenla.
Antibióticos que actúan sobre la función y estructura
del ADN Nitroimidazólicos
- Mecanismo de acción: se activa mediante un proceso de reducción, en el que el grupo nitro del fármaco actúa
como un receptor de electrones, lo que conduce a la liberación de compuestos tóxicos y radicales libres que actúan
sobre el ADN, inactivándolo y evitando la síntesis enzimática de bacterias. .

- Las bacterias aeróbicas no tienen enzimas que reducen el fármaco y, por lo tanto, no forman los compuestos
tóxicos intermedios con actividad antibacteriana.

- Excelente actividad contra bacterias anaerobias estrictas (cocos grampositivos, bacilos gramnegativos, bacilos
grampositivos) y ciertos protozoos que causan amebiasis, tricomoniasis y giardiasis.

- Usos principales: tratamiento de infecciones anaeróbicas, como cerebro, absceso pulmonar, bacteriemia,
infecciones de tejidos blandos, osteomielitis, infecciones orales y dentales, sinusitis crónica, infecciones
intraabdominales; terapia inicial en el tratamiento de la colitis seudomembranosa (por vía oral); indicado en el
tratamiento del tétanos, siendo considerado por algunos como el antimicrobiano de primera elección; Se puede
asociar con claritromicina o amoxicilina en el tratamiento de H. pylori y es eficaz en el tratamiento de la vaginosis
bacteriana (Gardnerella vaginalis).

Metronidazol
Antibióticos que actúan sobre la función y estructura del ADN
 Sulfonamidas + Trimetropim
• Las sulfonamidas tienen efecto bacteriostático e inhiben el metabolismo del ácido fólico, por
mecanismo competitivo. Las células humanas pueden aprovechar el folato exógeno para el
metabolismo, mientras que las bacterias dependen de la producción endógena.

• El sulfametoxazol se emplea comúnmente en asociación con el trimetoprim, una diamino-

pirimidina, asociación más conocida como cotrimoxazol. El efecto de las dos drogas es
sinérgico, pues actúan en pasos diferentes de la síntesis del ácido tetrahidrofólico (folínico),
necesaria para la síntesis de los ácidos nucleicos. El sulfametoxazol inhibe un paso
intermedio de la reacción y el trimetoprim inhibe la formación del metabolito activo del ácido
tetrahidrofólico al final del proceso.

- Los principales representantes de la clase de sulfonamida son sulfametoxazol y

sulfadiazina. Entre los derivados de diaminopirimidina se encuentran trimetoprima
y pirimetamina. Actualmente, la combinación de sulfametoxazol y trimetoprima es
11 la más utilizada en la práctica clínica.
 MECANISMO DE ACCION
oLas sulfonamidas y las diaminopirimidinas se denominan conjuntamente fármacos antifólicos.

oTienen acción sinérgica.

oMecanismo de acción: las sulfonamidas y las diaminopirimidinas bloquean secuencialmente la biosíntesis

de tetrahidrofolatos (la forma activa del ácido folínico). Las sulfonamidas inhiben las sintetasas, que
transforman el ácido paraaminobenzoico (PABA) en ácido fólico. Las diaminopirimidinas inhiben las
reductasas, que reducen el ácido fólico a ácido folínico. En ausencia de la formación de tetrahidrofolatos, se
compromete la síntesis de bases nitrogenadas (purinas), que originarían ácidos nucleicos. Por lo tanto, el uso
asociado de sulfonamidas y diaminopirimidinas promueve el bloqueo secuencial en la vía de síntesis de
ácido folínico por parte de microorganismos sensibles

Por su mecanismo de acción, las sulfas son bacteriostáticas, y no bactericidas. La

presencia de mecanismos inmunológicos normales,es necesaria para completar la
acción de las sulfas. Las sulfonamidas impiden la incorporación de PABA a la molécula
de ácido fólico, dificultando su biosíntesis, que es esencial para el crecimiento y
12 multiplicación bacteriana.
 MECANISMO DE ACCION
• Los microorganismos sensibles son aquellos que
deben sintetizar su propio ácido fólico, o son
impermeables al ácido fólico de los líquidos
circundantes.
• Los microorganismos resistentes, son aquellos
que son permeables al ácido fólico o al igual que
las células del hombre requieren ácido fólico
preformado para normal desarrollo.

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 ESPECTRO ANTIBACTERIANO
• Las sulfonamidas, inhiben tanto a gérmenes
Gram + como Gram -.
• También inhiben Nocardia, Chlamydia
trachomatis, algunos protozoarios, y
algunas bacterias entéricas.

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 USOS TERAPEUTICOS
• Las sulfonamidas, inhiben tanto a gérmenes Gram + como Gram -.
• También inhiben Nocardia, Chlamydia trachomatis, algunos
protozoarios, y algunas bacterias entéricas.

Tratamiento y prevencion de neumonitis por Pneumocystis jiroveci.

- Tratamiento y prevencion de toxoplasmosis
- Tratamiento de nocardiosis.
Las siguientes infecciones podrian ser tratadas con cotrimoxazol de haber
evidencia que demuestre su sensibilidad y opcion terapeutica:
- ITU no complicada
- Otitis media aguda
-Exacerbacion de bronquitis cronica
-Celulitis

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Por qué es tan importante saber acerca de los antibióticos?
Orientar la
elección de la Determine la concentración
terapia inhibitoria mínima (MIC),
antimicrobiana es decir, la concentración
más adecuada. más baja de
antimicrobiano capaz de
INHIBIR el crecimiento
bacteriano.
Prueba de
sensibilidad a
los
antimicrobianos Prevenir la
Monitorear la (TSA) propagación de
evolución de la bacterias
resistencia multirresistentes
bacteriana.
 Por qué es tan importante saber acerca de los
antibióticos?
- Todos los pasos involucrados en la realización de la TSA, desde la selección de
los antimicrobianos a analizar hasta la interpretación de los resultados, están
estandarizados por organizaciones especializadas como:
Instituto de Normas Clínicas y de Laboratorio (CLSI, EE. UU.);
Sociedad Británica de Quimioterapia Antimicrobiana (BSAC, Reino Unido);
Comité de L'Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie (CA-
SFM, Francia).

- La mayoría de los laboratorios brasileños siguen los estándares recomendados

por CLSI. Sin embargo, cada institución debe seleccionar qué antimicrobianos
deben analizarse y notificarse a la TSA. Esta debería ser una decisión conjunta
entre el laboratorio de microbiología, el personal clínico, la farmacia, el comité
terapéutico y el comité de control de infecciones hospitalarias (CCIH).
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 Técnicas para la prueba de sensibilidad
antimicrobiana
Macrodilución
- Fue una de las primeras técnicas que se utilizaron para evaluar la sensibilidad a los
agentes antimicrobianos;

- Implica la preparación de diluciones en serie y logarítmicas de antimicrobianos en

un medio de cultivo líquido, lo que permitirá el crecimiento bacteriano;

-- Los tubos que contienen antimicrobianos se inoculan con una suspensión

bacteriana estandarizada de alrededor de 5 x 105 UFC / ml, se colocan bajo
incubación durante 16 a 20 horas, a 35 ± 2ºC y se inspeccionan visualmente para
mostrar el crecimiento bacteriano que se traduce en un aumento de turbidez

-- Un tubo transparente muestra que no hubo crecimiento bacteriano y representa la

concentración inhibitoria mínima.
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 Técnicas para la prueba de sensibilidad
antimicrobiana
Macrodilución
Ventajas
- Permite la determinación de resultados
cuantitativos, el CIM.

Desventajas
Fuente: www.anvisa.gov.br
- La cantidad de reactivos utilizados; Prueba de macrodilución. En la figura, el
- El espacio requerido para almacenar los MIC para este antimicrobiano es 32 µg / ml,
es decir, la concentración más baja donde no
tubos; se observa crecimiento bacteriano.
- La posibilidad de que ocurran errores
durante la preparación de las
concentraciones de antimicrobianos;
- Trabajo manual costoso en la preparación
de la prueba;
19 - Dependencia de la agudeza visual del
analizador.
 Técnicas para la prueba de sensibilidad
antimicrobiana
Microdilución
- Corresponde a la miniaturización de la técnica de macrodilución;
- Utiliza placas de plástico estériles, con 96 pocillos, con un fondo en forma de "U",
para permitir una mejor visualización del crecimiento bacteriano
- En esta placa, se coloca un número variable de antimicrobianos, alrededor de 12
fármacos, en diferentes concentraciones (4 a 8 diluciones logarítmicas);

- Las placas de microdilución pueden contener el antimicrobiano liofilizado o

congelado, y se inoculan con una suspensión bacteriana estandarizada alrededor
de 5 x 105 UFC / mL, se colocan bajo incubación durante 16 a 20 horas, a 35 ± 2ºC
y se inspeccionan visualmente para evidenciar que crecimiento bacteriano que se
traduce en una mayor turbidez.

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 Técnicas para la prueba de sensibilidad antimicrobiana
Microdilución
Ventajas
- Ahorro de espacio y reactivos debido a la miniaturización de la prueba de
dilución;
- La reproducibilidad de los resultados debido a la posibilidad de preparar
una gran cantidad de placas de la misma serie de diluciones de
antimicrobianos;
La generación de un resultado cuantitativo (CIM);
- La conveniencia de poder utilizar tarjetas prefabricadas y sistemas
computarizados;
- La identificación de las especies bacterianas se puede realizar
simultáneamente con la prueba de sensibilidad incorporando pruebas Fuente: www.anvisa.gov.br
Prueba de microdilución en caldo para
bioquímicas en las placas de microdilución.
polimixina B con concentraciones de
16 µg / ml (A) a 0.125 µg / ml (G) cada
Desventajas columna tiene un microorganismo.
- La inflexibilidad en la elección de los antimicrobianos que se probarán al
usar placas prefabricadas;
21- El costo de cada placa de microdilución.
 Técnicas para la prueba de sensibilidad
antimicrobiana
Ágar - Dilución
- Realizado mediante la incorporación de concentraciones en serie y
logarítmicas de un antimicrobiano a placas de Petri individuales que
contienen medio de cultivo;

- Cada placa representa una concentración única de antibiótico;

- Las muestras bacterianas se inoculan simultáneamente en la superficie
de agar usando el multi-inoculador, que dispensa de 1 a 3 microlitros
que contienen aproximadamente el inóculo final de 1 x 104 UFC / ml, y
las placas se incuban durante 16 a 20 horas, a 35 ± 2ºC y se inspecciona
visualmente para mostrar crecimiento bacteriano.

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 Técnicas para la prueba de sensibilidad
antimicrobiana
Ágar - Dilución
Ventajas

- La capacidad de probar un gran número de muestras

simultáneamente;
- El costo relativamente bajo;
- Permitir la determinación cuantitativa del micrófono;
- Prueba de bacterias fastidiosas que no tienen un buen
crecimiento en el caldo, como Neisseria gonorrhoeae y
bacterias anaeróbicas.
Desventajas

Método muy laborioso para la preparación de placas y Fuente: www.anvisa.gov.br

inóculo bacteriano; Teste de ágar-diluição de imipenem para diferentes amostras
de P. aeruginosa.
Las placas de agar que contienen antimicrobianos deben
prepararse preferentemente el día en que se utilizan, ya
que la energía antimicrobiana puede perderse durante el
almacenamiento de la placa.
23
Técnicas para la prueba de sensibilidad antimicrobiana
Etest
- Etest® (AB Biodisk, Solna, Suecia) es una cinta de plástico disponible
comercialmente, impregnada por el aumento de las concentraciones de
antimicrobianos en la cara ventral y marcada, en la cara dorsal, con la
escala de las concentraciones probadas con el fin de facilitar la lectura de la
resultado.
- Esta prueba se basa en la difusión del gradiente antimicrobiano en el agar
para determinar la sensibilidad de la muestra bacteriana al antimicrobiano
analizado.
- - Con la ayuda de un hisopo, la muestra que contiene de 1 a 2 x 108
CFU/ml se siembra en la superficie de la placa de agar; después de 15
minutos, en promedio, las cintas Etest® se dispensan sobre el agar, las
placas se incuban, y la determinación del MIC se lee como el punto de
intersección entre la cinta Etest® y la zona de inhibición del crecimiento
del microorganismo, que toma la forma elíptica.
Técnicas para la prueba de sensibilidad antimicrobiana
Etest
Ventajas

-Flexibilidad en la elección de los antimicrobianos a probar;

- La fácil implementación y entrega de un resultado cuantitativo
(Fomin).

Desvantajas
-El alto costo de las cintas;
-El número limitado de antibióticos probados por placa.
*Se han observado diferencias en la determinación del FOMIN de
los antimicrobianos sensibles al pH entre la microdilución Etest®
y la microdilución del caldo. Estas diferencias se atribuirían al
cambio en el pH del medio causado por la incubación de la placa Fuente: www.anvisa.gov.br
Etest® al 5% de CO2. En esta situación, hay una disminución en la Prueba de sensibilidad
actividad antimicrobiana, como macrólidos y lincomicinas, antimicrobiana de muestras
causando el aumento del MIC. Como las placas de microdilución de P. aeruginosa mediante la
de caldo no necesitan ser incubadas en CO2, no hay cambios en el técnica Etest®
MIC secundario a un cambio significativo de pH.
Técnicas para la prueba de sensibilidad antimicrobiana
Difusión de disco
- Fue descrito en 1966 por Bauer y Kirby - Método Kirby-Bauer;

- Es uno de los métodos de sensibilidad más simples y confiables;

- Se realiza mediante la dispensación de los discos antimicrobianos en la placa de agar después de la

aplicación del inóculo bacteriano con aproximadamente 1 a 2 x 10 8 UFC / ml. Las placas se incuban
durante 16 a 24 horas en aire ambiente o al 5% de CO2 a 35 ± 2 ºC.

- Los diámetros de los halos de inhibición del crecimiento bacteriano alrededor de cada disco se miden en
milímetros.

- Cuando los halos de inhibición se correlacionan con los valores logarítmicos de la MIC mediante análisis
de regresión lineal, se encuentra una relación lineal consistente que muestra que el halo de inhibición es
inversamente proporcional a la MIC de ese antimicrobiano.

- En la práctica, los resultados de la prueba de difusión en disco se interpretan comparando el valor de la

zona de inhibición con los criterios publicados por CLSI. De esta manera, las muestras bacterianas se
clasifican como sensibles, resistentes o intermedias.
 Técnicas para la prueba de sensibilidad antimicrobiana
Difusión de disco
Ventajas
- Fácil ejecución; - Reproducibilidad; - Uso de reactivos de bajo costo; -
Resultados de una fácil interpretación clínica; - Flexibilidad en la elección de los
antimicrobianos y no requerimiento de equipo especial.

Desventajas
- No proporciona resultados cuantitativos, sino resultados cualitativos. -
Riguroso control de calidad, teniendo en cuenta que un gran número de variables
pueden afectar a las pruebas: preparación de medios de cultivo; control del pH
del medio; tiempo; temperatura y atmósfera de incubación; concentración de Fonte: www.anvisa.gov.br
inóculo; stock adecuado de discos de sensibilidad; precisión en la ejecución de la Teste de sensibilidade a
antimicrobianos de amostras de P.
técnica. - No estandarización de este método para algunas combinaciones de aeruginosa pela técnica de disco-
microorganismos y agentes antimicrobianos (S. pneumoniae versus difusão,
cefalosporinas y Acinetobacter spp. versus polimyxinas, por ejemplo); - Puede
que no sea adecuado para la detección de mecanismos de resistencia resultantes
de la producción de lactamasas (enterococcus versus ampicilina) y otros
mecanismos más complexos, como estafilococos con sensibilidad disminuida a
los glucopéptidos.
Técnicas para la prueba de sensibilidad antimicrobiana
Automatización
- Principais sistemas automatizados existe: Vitek®; Vitek-2® (bioMérieux,
Hazelwood, MO); Walk-Away® (DADE, West Sacramento, CA); BD
Phoenix®; - Lectura realizada desde sistemas de detección óptica capaces de
medir cambios discretos en el crecimiento bacteriano; - Las reacciones
ocurren en tarjetas que contienen cámaras pequeñas con antibióticos
liofilizados;
- Los resultados proporcionados son semicuantitativos, ya que evalúan de 2 a
4 diluciones e informan si hubo un crecimiento bacteriano por debajo o por
encima del MIC considerado para una especie determinada.
Técnicas para la prueba de sensibilidad antimicrobiana
Automatización
Ventajas
-Informes más rápidos de los resultados; -
Normalización intra e interlaboratorio; -
Identificación simultánea y TSA en un único
informe.
Desventajas
- Sistema caro - No proporcionar el resultado
exacto del MIC - Debido a que tienen un corto
período de incubación, las bacterias que
tienen mecanismos de resistencia inducibles
pueden no tener suficiente tiempo para
expresar su mecanismo de resistencia y ser
interpretadas por estos sistemas como
sensibles a un antimicrobiano, cuando en
realidad son resistentes.
Referencias

http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/rm_controle/opas_web/modulo3/gramn_lacta4.htm

http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/atm_racional/modulo1/res_principais2.htm

http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/rm_controle/opas_web/modulo1/conceitos.htm

http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1676-24442012000200004

https://farmacia.hc.ufg.br/up/734/o/Guia_de_Antimicrobianos_do_HC-UFG.pdf?1409055717

http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-40422010000300035

http://www.icb.usp.br/bmm/mariojac/index.php?option=com_content&view=article&id=47&Itemid=57&lang=br