Análisis

Microbiológico
de formas
farmacéuticas NO
estériles
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

1. Presentación
2. Espectativas del curso

2
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

1. Introducción
2. Requisitos Regulatorios Para Productos No Estériles
3. Tipos de formas farmacéuticas no estériles
4. El Crecimiento Microbiano
5. Medios de Cultivo
6. Métodos de análisis generales
7. Desarrollo, Verificación & Validación de métodos
8. Identificación de Microorganismos (microorganismos patógenos)
9. Investigación de las Desviaciones de los Resultados Microbiológicos

3
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

1
Introducción

4
1. Introducción

MICROBIOLOGÍA

Mikros bios logos

• Microbiología: ciencia que estudia los microorganismos.

• Microorganismo: célula de pequeño tamaño que es capaz de llevar a cabo procesos

metabólicos y de crecimiento sin formar parte de un tejido multicelular.

5
1. Introducción

•DIFERENCIAS ENTRE HONGOS Y BACTERIAS

Eucariotas (Hongos y Levaduras) Procariotas (Bacterias)

• Núcleo diferenciado del citoplasma (ADN se

• Sin núcleo diferenciado, es decir, cuyo
encuentra dentro de un compartimiento
material genético se encuentra disperso en el
separado del resto de la célula)
citoplasma, reunido en una zona denominada
nucleoide.

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 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

2
Requisitos Regulatorios
Para Productos No
Estériles
7
2. Requisitos Regulatorios Para Productos No Estériles

EP/USP/JP
Capítulos: 5.1.4, 2.6.12 y 2.6.13
5.1.4. Microbiological quality of non-sterile pharmaceutical preparations and substances for
pharmaceutical use :

“The presence of certain micro-organisms in non-sterile preparations may have the potential to
reduce or even inactivate the therapeutic activity of the product and has a potential to adversely
affect the health of the patient”.

“Manufacturers therefore have to ensure a low bioburden of finished dosage forms by implementing
current guidelines on Good Manufacturing Practice during the manufacture, storage and distribution
of pharmaceutical preparations.”

PREVENIR y CONTROLAR LA CONTAMINACIÓN MICROBIANA DE

NUESTROS PRODUCTOS

8
2. Requisitos Regulatorios Para Productos No Estériles

¿Cómo lo hacemos?
-Control Ambiental de la planta:
- Agua: Purificada, potable
- Aire
- Superficie
- Exposición (Líneas de empaquetado primario de líquidos)
-Control Materias Primas y Producto Terminado (según EP):
- Depende de la forma farmacéutica
- Uso del fármaco

9
2. Requisitos Regulatorios Para Productos No Estériles

Funciones laboratorio de Microbiología:

10
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

3
Tipos de formas
farmacéuticas no
estériles
11
3. Tipos de formas farmacéuticas no estériles

Los criterios de aceptación recomendados según EP/USP:

1- Forma Farmacéutica
2- Indicación terapeútica
TAMC TYMC
Route of administration ( CFU/g or ( CFU/g or Specified micro-organisms
CFU/mL) CFU/mL)

Non-aqueous preparations for oral

103 102 Absence of Escherichia coli (1 g or 1 mL)
use

Aqueous preparations for oral

102 101 Absence of Escherichia coli (1 g or 1 mL)
use

Rectal use 103 102 -

Oromucosal, Gingival, Cutaneous, Absence of Staphylococcus aureus (1 g or 1 mL)

102 101
Nasal, Auricular use Absence of Pseudomonas aeruginosa (1 g or 1 mL)

Absence of Pseudomonas aeruginosa (1 g or 1 mL)

Vaginal use 102 101 Absence of Staphylococcus aureus (1 g or 1 mL)
Absence of Candida albicans (1 g or 1 mL)

Transdermal patches (limits for one

Absence of Staphylococcus aureus (1 patch)
patch including adhesive layer and 102 101
Absence of Pseudomonas aeruginosa (1 patch)
backing)

Absence of Staphylococcus aureus (1 g or 1 mL)

Inhalation use (special requirements
2 1 Absence of Pseudomonas aeruginosa (1 g or 1 mL)
apply to liquid preparations for 10 10
Absence of bile-tolerant gram-negative bacteria (1 g
nebulisation)
or 1 mL)
12
3. Tipos de formas farmacéuticas no estériles

Los criterios de aceptación recomendados según EP/USP:

• 101 UFC : significa que el recuento máximo aceptado es 20.
• 102 UFC significa que el recuento máximo aceptado es 200.
• 103 UFC significa que el recuento máximo aceptado es 2000.

Este criterio tan flexible se debe a que el “analito” no es una sustancia química,
sino microorganismos vivos, que se caracterizan por:
• Su inherente variabilidad biológica,
• Los microorganismos no forman soluciones verdaderas en los productos, y no
se encuentran homogéneamente distribuida en el producto ni en la muestra.

13
3. Tipos de formas farmacéuticas no estériles

P.aeruginosa S.aureus C.albicans

14
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

4
El Crecimiento
Microbiano
15
4. El Crecimiento Microbiano

2 bacterias hijas IGUALES

entre sí e IGUALES a la
bacteria parental

16
4. El Crecimiento Microbiano

• Visualización del crecimiento

• Medios líquidos: turbidez y/o formación de sedimento.
• Medios Sólidos: colonias macroscópicamente visibles, algunas de cuyas características (tamaño,
forma, color, etc.) pueden contribuir a la identificación del microorganismo.

17
4. El Crecimiento Microbiano

• Medición del crecimiento

1. RECUENTO EN PLACA: se basa en la formación de una colonia a partir de cada

célula viable. No puede afirmarse que toda colonia derive de un solo microorganismo->
unidades ufc.
- Plaqueo: Superficie y en Profundidad.
- Membrana

Realizar diluciones seriadas 1/10 de una suspensión bacteriana o de una muestra en ensayo
y sembrar volúmenes.

Contaje acceptable: 30-300

18
4. El Crecimiento Microbiano

• Medición del crecimiento

19
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 1

20
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 2

21
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 3

22
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 4

23
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 5

24
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 6

25
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 7

26
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 8

27
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 9

28
4. El Crecimiento Microbiano

• PREPARACIÓN DE DILUCIONES SERIADAS – 10

29
4. El Crecimiento Microbiano

2. Nº Más Probable
• Se infiere matemáticamente el recuento de viables a partir de la fracción de cultivos en
tubos que no muestran crecimiento.

• Realizar varias diluciones de la muestra, inocular varias réplicas de las mismas en tubos
conteniendo un medio de cultivo apropiado y registrar el número de tubos con crecimiento
en cada dilución.

• Estadísticamente ineficiente, por lo que es necesario sembrar varios tubos con cada
dilución.

• Útil para el recuento de microorganismos en suspensiones con baja concentración o que

producen algún producto detectable en el medio, que permita diferenciarlo de otros
microorganismos presentes en la muestra., por ejemplo para el recuento de coliformes en
aguas.

30
4. El Crecimiento Microbiano

2. Nº Más Probable

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 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

EJERCICIO 1/DESCANSO

32
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

5
Medios de Cultivo

33
5. Medios de Cultivo

Solución que cuenta con los nutrientes necesarios para recuperar, multiplicar,
aislar e identificar los microorganismos bajo condiciones favorables de pH y
Temperatura.

Todo lo referente a su calidad es CRÍTICOS para el éxito de un laboratorio de

Microbiología. Es uno de los puntos clave que requieren gran atención en la
Inspecciones y Auditorías -> duda análisis.

34
 5. Medios de Cultivo

El desarrollo adecuado de los microorganismos en el medio

se ve afectado por:
• Disponibilidad de nutrientes adecuados
• Consistencia adecuada del medio
• Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases
• Condiciones adecuadas de humedad (un mínimo de humedad es necesaria)
• Luz ambiental (mejor oscuridad)
• pH
• Temperatura
• Esterilidad del medio (para evitar falsos positivos)

35
5. Medios de Cultivo

Clasificación según su aspecto:

Sólidos (TSA, SAB.C, MSA, CET, etc.)

Aspecto
Líquidos (TAT, MACBROTH, LACTOSA, etc.)

36
5. Medios de Cultivo

Según SUS PROPIEDADES

A. Medios comunes: microorganismos que no necesiten requerimientos especiales.

B. Medios de enriquecimiento: incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos
exigentes fastidiosos: leche, bilis, huevo, et.

C. Medios selectivos: favorecer el crecimiento de ciertas bacterias inhibiendo el desarrollo de otras, ya que poseen una
sustancia inhibitoria. Ejemplo: el agar Mac Conkey posee sales biliares y cristal violeta que inhiben las bacterias gram
positivas.

D. Medios diferenciales: poner en evidencia características bioquímicas diferenciar especies. Ejemplo: el agar EMB tiene
eosina y azul de metileno que nos permite diferenciar Escherichia coli la cual forma colonias verdes (con brillo
metálico a la luz reflejada), de otras enterobacterias que forman colonias de color rosa salmón.

E. Medios de identificación: poner en evidencia alguna cualidad bioquímica que nos permite reconocer la identidad de un
microorganismo. Ejemplo: el Agar Kligler que permite determinar la capacidad de un microorganismo de atacar un
hidrato de carbono específico, con producción o no de gas, junto con la posible producción de ácido

37
5. Medios de Cultivo

• Generales

38
5. Medios de Cultivo

• Selectivos y diferenciales

39
5. Medios de Cultivo

• Selectivos y diferenciales

40
5. Medios de Cultivo

• Selectivos y diferenciales

41
5. Medios de Cultivo

• Selectivos y diferenciales

42
5. Medios de Cultivo

• Selectivos y diferenciales

43
5. Medios de Cultivo

• Líquidos

44
5. Medios de Cultivo

• Líquidos

45
5. Medios de Cultivo

GESTIÓN DE LOS MEDIOS EN EL LABORATORIO

1- RECEPCIÓN MEDIOS COMPRADOS:

a) Registrar en cada envase la fecha de ingreso al laboratorio (día, mes y año).

b)Registrar en cada envase el número previamente asignado en el laboratorio.
c) Archivar el CoA
d)Revisar Hoja de Seguridad
e) Almacenar recomendaciones del fabricante:
• Medios deshidratados: Lugar seco, protegidos de la luz, 15-25ºC
• Placas: Nevera (2-8ºC)

46
5. Medios de Cultivo

GESTIÓN DE LOS MEDIOS EN EL LABORATORIO

2- PREPARACIÓN DE MEDIOS

Precauciones:

- Los recipientes deben estar limpios, ya que residuos de detergentes o restos de

otras sustancias puede causar efecto inhibitorio en la capacidad de crecimiento de
los microorganismos.
- Los recipientes destinados a la preparación de medios de cultivo deben ser lo
suficientemente grandes para agitar con facilidad.
- El agua para disolución de los medios debe ser Agua Purificada (NO MILLI-Q).
- Calentar si es necesario (ojo con caramelizar el medio)

47
5. Medios de Cultivo

GESTIÓN DE LOS MEDIOS EN EL LABORATORIO

2- PREPARACIÓN DE MEDIOS

Ajuste de pH

- El pH a cumplir que indica el fabricante del medio de cultivo, es el pH una vez que
el medio ha sido esterilizado.
- Medir antes de esterilización ajustar si es necesario: NaOH o HCL

48
5. Medios de Cultivo

GESTIÓN DE LOS MEDIOS EN EL LABORATORIO

3- ESTERILIZACIÓN

- TODOS los medios de cultivo que lo requieren deben ser esterilizados el mismo día de la
preparación y preferentemente dentro de las dos horas.
- Típicamente se usa 121 °C durante 15 minutos (Excepciones: Termolábiles (<Tª) y Filtración).
- Validación de los ciclos de esterilización:
- Garantizar la distribución de calor
- Identificar cargas mínimas y máximas-> SOLO usar esas cargas

49
5. Medios de Cultivo

CONTROL DE LOS MEDIOS

1- Control de ESTERILIDAD
Verificar que el medio está estéril-> Evitar falsos positivos. Ej. 30-35 °C / 3 días

2- GROWTH PROMOTION: En cada lote nuevo comprado o fabricado debe verificarse

frente a un medio previamente aprobado:
- Fertilidad: < 100 ufc. -----> crecimiento.
- Propiedades Inhibitorias: > 100 ufc -----> ausencia crecimiento.
- Propiedades indicativas: < 100 ufc. -----> aspecto y las reacciones bioquímicas ok.
- Identificar cargas mínimas y máximas-> SOLO usar esas cargas

- Ojo: No usar cepas con más de 5 pases (T5)

50
5. Medios de Cultivo

CONTROL DE LOS MEDIOS

Como aseguramos la concentración de microoganismo??

1-Estandarización del inóculo

2- Soluciones comerciales: Quanticult Bioball

51
5. Medios de Cultivo

CONTROL DE LOS MEDIOS (GROWTH PROMOTION)

2-Control de los medios

52
5. Medios de Cultivo

Medios de recuento

53
5. Medios de Cultivo

Medios para microorganismos específicos

54
5. Medios de Cultivo

Medios de recuento

55
5. Medios de Cultivo

CONTROL DE LOS MEDIOS (GROWTH PROMOTION)

Validación de los medios:

• Fecha de caducidad
• Condiciones de almacenamiento

• Protocolo (3 lotes):
• pH
• Apariencia
• Esterilidad
• Growth promotion

Video Seguridad: https://www.youtube.com/watch?v=RU3T1mFXM0U

56
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

6
Métodos de análisis
generales

57
6. Métodos de Análisis Generales

REQUISITOS PREVIOS

- CABINA DE FLUJO LAMINAR

- GUANTES ESTÉRILES

- MASCARILLA

- DESINFECTANTE

58
6. Métodos de Análisis Generales

MUESTREO AMBIENTAL
- Estático: Exposición

- Dinámico:

- Superficies

- Volumétrico

59
6. Métodos de Análisis Generales

ESQUEMA

Fuente de inóculo →Caldo de enriquecimiento → Aislamiento → Identificación

60
6. Métodos de Análisis Generales

MÉTODOS DE RECUENTO (EP)

61
6. Métodos de Análisis Generales

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO (EP)

62
6. Métodos de Análisis Generales

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO (LÍQUIDOS)

63
 Análisis Microbiológico
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DESCANSO

64
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

7
Desarrollo, Verificación
& Validación de
métodos
65
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

OBJETIVO: demostrar la aptitud de los métodos microbiológicos de

recuperación de microorganismos presentes en una muestra

MÉTODO -> ADECUADO Y CONFIABLE.

Sin esta demostración DUDA VERICIDAD RESULTADOS

VALIDACIÓN: demostrar que nuestra técnica analítica sirve para el propósito que fue
diseñada y que nuestros resultados son adecuados, confiables y representan
fehacientemente la calidad microbiológica de la muestra en análisis.

66
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

¿¿Por qué realizar validación??

67
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

LO EXIGEN:
• United States Pharmacopeia (USP)
• European Pharmacopoeia (Ph. Eur.)
• Norma ISO 17025 (International Standarization Organization)
• European Medicines Agency (EMEA)
• European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare
(EDQM)
• Federal Drug Administration (FDA)

68
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

IMPORTANTE: microorganismo se encuentra presente en una muestra, no

necesariamente significa que se lo pueda detectar, ya que:

1. No existe un medio de cultivo ideal de crecimiento para todos los microorganismos.

2. Las condiciones de incubación no siempre son apropiados para todos.
3. Muchos activos y formulaciones tienen inhibidores
4. Existen microorganismos viables no cultivables (VNC)

69
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

¿Cuándo realizarlo?
1- Nuevos: Productos y materias primas no validadas existentes en el laboratorio.
2- Modificación de formulación de un producto ya validado:
• Cambio de concentración del principio activo.
• Cambio del conservante.
• Cambio de concentración del conservante.
• Cambio de algún excipiente.
• Cambio en la relación de los conservantes y/o excipientes.
3- Cuando se cambian las condiciones experimentales de un método:
• Cambio de técnica de análisis (Ej., técnica de volcado en placa por técnica de
filtración por membranao viceversa)
• Cambio en la metodología (Ej., técnica de filtración por un sistema abierto a
filtración empleando una
• Cambio de un medio de cultivo
• Cambio de las condiciones de incubación
70
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

¿Cuándo realizarlo?

4- Cambia una exigencia regulatoria (armonización, cambio cepas de referencia..)

5- Cambio en las especificaciones:
• Introducción del producto en mercados con diferentes requerimientos
• Cambio en la vía de administración
• Cambio de forma farmacéutica

71
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

Objetivo de las Verificaciones:

DEMOSTRAR que, ni el material a ensayar, ni el ensayo al que

se somete la muestra inhiben la multiplicación y/o la
detección de los microorganismos que pudieran estar
presentes en ella.

72
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

1.Preparación de la muestra

73
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

2. Inoculación y dilución:
• Añadir inóculo ≤ 100 UFC
• Volumen inóculo ≤ 1 % del volumen del producto diluido.
• Ensayo sobre la muestra preparada con el factor de dilución más bajo posible.

Objetivo: recuperación 50-150 %

• Si no hay éxito en la recuperación de los microorganismos
• Aumentar dilución sin superar la especificación.
• Incluir neutralizante,
• Filtrar la muestra

74
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

75
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

76
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

77
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

CONSIDERACIONES
• Tiene el producto el agregado de un agente antimicrobiano?
• ¿Conozco si el producto o su formulación (principio activo y/o excipientes) poseen
propiedades antimicrobianas?
• ¿Conozco con anticipación cómo se comportarán los microorganismos frente a mi producto?
(En general responder esta pregunta es muy difícil pero en el caso que tengamos ensayados
productos con el mismo principio activo o parecida formulación esto nos permitirá definir
rápidamente la técnica a aplicar)
• ¿Qué propiedades químicas y físicas tiene el producto a ensayar?. Es importante poder
evaluar:
- Estructura
- Solubilidad
- pH en solución
- Capacidad quelante

78
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

EJERCICIO 2

79
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

EJEMPLOS
¿Qué observáis?

80
7. Desarrollo, Verificación & Validación de Met.

EJEMPLOS
¿Qué observáis?

81
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

8
Identificación de
Microorganismos
(patógenos)
82
8. Identificación de Microorganismos

TINCIÓN GRAM
-Cristal Violeta: penetra en todas las células bacterianas.

-Lugol: Forma un complejo insoluble con el cristal violeta.

-Alcohol-Acetona: Decolora ya que solubiliza el complejo

I2-Crital Violeta. Solo se decoloran los Gram negativos.
Disuelve los lípidos de la pared de los Gram Negativos

-Safranina: tiñe Gram Negativas

83
8. Identificación de Microorganismos

TINCIÓN GRAM
Tipos de Pared Celular.

a) Gram Positiva: pared más sencilla

estructuralmente. El 90 % es Peptidoglicano
(1 sóla membrana).

b) Gram Negativa: pared más compleja,

2 membranas que rodean una fina capa
de peptidoglicano

84
8. Identificación de Microorganismos

TINCIÓN GRAM
-Cristal Violeta: penetra en todas las células bacterianas.

-Lugol: Forma un complejo insoluble con el cristal violeta.

-Alcohol-Acetona: Decolora ya que solubiliza el complejo

I2-Crital Violeta. Solo se decoloran los Gram negativos.
Disuelve los lípidos de la pared de los Gram Negativos

-Safranina: tiñe Gram Negativas

https://www.youtube.com/watch?v=5sqrp_5eqNU

85
8. Identificación de Microorganismos

TINCIÓN GRAM

86
8. Identificación de Microorganismos

GALERIAS API

87
8. Identificación de Microorganismos

GALERIAS API

BBL Crystal
– GP
– NE/FN

API
– API 20E
– API 20NE
– API Staph
– API 50 CHB/E
– API C AUX

88
8. Identificación de Microorganismos

OTROS MÉTODOS
-VITEK- https://www.youtube.com/watch?v=1bVIcY30YU0
-PCR- https://www.youtube.com/watch?v=iQsu3Kz9NYo

-SECUENCIACIÓN- https://www.youtube.com/watch?v=NEu0mO-2ras

89
 Análisis Microbiológico
de formas farmacéuticas NO estériles

9
Investigación de las
Desviaciones de los
Resultados
Microbiológicos
90
 9. Investigación de las Desviaciones de los
Resultados Microbiológicos

Los microorganismos son sistemas biológicos, y

como tales tienen una variabilidad
inherente a su naturaleza, y su distribución en
el producto por lo general no es uniforme

TRATAMIENTO OOS MICROBIOLÓGICAS ES

DIFERENTE DE OOS QUÍMICAS

91
 9. Investigación de las Desviaciones de los
Resultados Microbiológicos

Alcance de las Desviaciones Microbiológicas:

 Recuento que superan los criterios de aceptación,
 Detección de Microorganismos Específicos indicados en los criterios de aceptación,
 Detección de Microorganismos objetables,.
 Resultados de Recuentos “out-of-trend” (OOT)
 Presencia de contaminación microbiana en un producto que debe ser estéril.
 Excursiones o resultados OOT de monitoreo microbiológico ambiental y de aguas de uso farmacéutico.
 Resultados de ensayos de Promoción de Crecimiento de medios de cultivo que no cumplen con los
criterios de aceptación preestablecidos.
 Controles negativos con desarrollo microbiano.

92
 9. Investigación de las Desviaciones de los
Resultados Microbiológicos

Resultados microbiológicos pueden ser difíciles de interpretar:

• Ampliamente distribuidos en la naturaleza y son contaminantes en el ambiente

no sólo de áreas de control sino también de producción.
• El analista puede introducir contaminación microbiana durante el muestreo o el
análisis.
• No estar homogéneamente distribuidos dentro de la muestra de producto.
• La contaminación microbiana está sujeta a cambios en su número por el
desarrollo o pérdida de viabilidad o ambos, de acuerdo a las características del
producto en que se encuentren.

93
 9. Investigación de las Desviaciones de los
Resultados Microbiológicos

OBJETIVOS INVESTIGACION:

• Conocer la “causa raíz” responsable del resultado

• Definir CAPAs

• Demostrar que las acciones tomadas fueron efectivas

94
 9. Investigación de las Desviaciones de los
Resultados Microbiológicos

Resultados microbiológicos pueden ser difíciles de interpretar:

• Ampliamente distribuidos en la naturaleza y son contaminantes en el ambiente

no sólo de áreas de control sino también de producción.
• El analista puede introducir contaminación microbiana durante el muestreo o el
análisis.
• No estar homogéneamente distribuidos dentro de la muestra de producto.
• La contaminación microbiana está sujeta a cambios en su número por el
desarrollo o pérdida de viabilidad o ambos, de acuerdo a las características del
producto en que se encuentren.

95
96
Preparacion de medios de cultivo:

https://www.youtube.com/watch?v=YGoPu0cn9ms

97