Métodos generales de detección de

pirógenos

1. La prueba en conejo

2. Las pruebas que se basan en la utilisacion de

lisados de amebocitos de Limulus
polyphemus (LAL)
 La prueba en conejo
• Método cualitativo
• Registro del aumento de temperatura en el
conejo
 Lisados de amebocitos de Limulus polyphemus (LAL)

Método de melificación o gel-clot

La reacción desarrollada en el tubo de ensayo es esencialmente
la misma que ocurre in vivo en la hemolinfa del cangrejo
herradura frente a las endotoxinas.
La presencia de endotoxinas es determinada por la formación de
un gel o coágulo insoluble.
 Método turbidimétrico
• Estos métodos se fundamentan por el aumento de la turbidez
en la mezcla de reacción provocado por el incremento de la
concentración de coagulina insoluble, la cual se monitorea
espectrofotométricamente.
• Los métodos turbidimétricos son los más sensibles, capaces
de detectar hasta 0,001 UE/mL

Existen 2 variaciones del método turbidimétrico:

• Turbidimétrico de punto final
• Turbidimétrico cinético
 Métodos cromogénicos

• Estos métodos se fundamentan en el empleo de un sustrato

cromogénico sintético incoloro.
•
• El sustrato está compuesto por un pequeño péptido unido por la
arginina C-terminal a una molécula del cromóforo p-nitroanilina
(pNA).

• Una vez activada la cascada del LAL, la enzima coaguladora provoca

la liberación de la molécula de pNA de color amarillo.
 Método cromogénico cinético

• En este caso mide el desarrollo de color en el tiempo.

• El rango de detección para la cuantificación de endotoxinas
es de 0,005-50 UE/mL.

Método cromogénico de punto final

• Este ensayo puede desarrollarse en microplacas de 96

pozuelos o en tubos de ensayos