Núcleo Bolívar Escuela De Ciencias De La Salud “Dr. Francisco Virgilio Battistini Casalta” Departamento De Bioanálisis Hematología II
Profesora Bachiller: Lcda. Vilma Vera Zambrano Arturo 18.385.573
Ciudad Bolívar, Marzo del 2018
• El fibrinógeno o Factor I es una proteína que interviene en la coagulación de la sangre para detener las hemorragias.
• Es una glicoproteína presente en el plasma, sintetizada por las células del
parénquima hepático, que participa en la hemostasia, específicamente estabilizando la agregación de las plaquetas activadas, y como precursor del coágulo de fibrina. Cuando se tiene heridas comienza a sangrar, la trombina presente en la sangre convierte el fibrinógeno en fibrina, sustancia fundamental para detener la hemorragia.
Es responsable de la formación de los coágulos de sangre.
Cuando se produce una herida se desencadena la transformación del
fibrinógeno en fibrina gracias a la actividad de la trombina. MÉTODO GRAVITATORIO: este método mide la cantidad de fibrinógeno que hay en el plasma, pasándolo después de su transformación a fibrina
METODO DE CLAUSS: el método de Clauss, designado como
procedimiento de referencia por el NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards). Cuando un exceso de trombina se adiciona a un plasma diluido, el tiempo de coagulación es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno plasmático.
NUEVO METODO DE CAOLIN: este método de Fibrinógeno, en presencia
de un exceso de trombina, se transforma en Fibrina. El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma METODO COAGULOMETRICO: Este método se basa en la colocación de una bola metálica en el tubo de reacción, la cual queda suspendida entre dos imanes e interrumpe un rayo lumínico que enfoca a un detector. Al añadir el plasma muestra, el sistema se pone en marcha y el tubo sufre un movimiento de vaivén, pero mientras la muestra es líquida la bola se mantiene entre los imanes interrumpiendo el paso del haz de luz.
METODO DE NEFLOMETRIA: este método
turbidímetro nefelométrico siempre detecta la luz reflejada por las partículas y no la atenuación debida a la turbidez. La unidad de turbidez para un nefelómetro calibrado se llama Unidad de Turbidez Nefelométrica, UTN o NTU. METODO DE CLAUSS
El método de Clauss, mide el índice de conversión del fibrinógeno en fibrina en
presencia de un exceso de trombina, este método ha demostrado ser una prueba rápida, sensible y exacta. Cuando el plasma diluido se coagula por exceso de trombina, el nivel el fibrinógeno es inversamente proporcional al tiempo de coagulación. El plasma para prepararse a partir de sangre total citrada, sin heparina, EDTA ni oxalato.
• 1. Extracción de sangre con jeringa o Vacutainer. en un tubo conteniendo 1,0 mL
de citrato sódico al 3,2% ó 3,8%,
• Preparar una dilución 1:10 de la muestra de plasma o plasma control con Tampón de Imidazol (p.e. 25 μL + 225 μL).
• Pipetear 100 μL de plasma diluido en una cubeta de pruebas. Incubar el plasma a
37°C durante 2 minutos.
• Adicionar 50 μL del reactivo precalentado. Simultáneamente poner en marcha el
cronómetro del instrumento. Registrar el tiempo de coagulación. • Fibrinogen Trombina bovina liofilizada ≈100 NIH U/mL en tampón, estabilizantes y conservantes.
• Imidazole Tampón de Imidazol,
estabilizantes y conservantes.
1. Reconstituir el vial de Fibrinogeno con El reactivo puede emplearse en forma
2.0 mL de agua destilada. manual o con sistemas semiautomáticos de detección del coágulo. Seguir las 2. Tapar el vial y mezclar suavemente instrucciones de uso de los instrumentos hasta disolver su contenido. Evitar la empleados. Es recomendable realizar la formación de espuma. Mantener 30 medición por duplicado. min. a temperatura ambiente, antes de su uso. 1. Atemperar, a temperatura ambiente el volumen suficiente de reactivo reconstituido. 1. Si el tiempo de coagulación de la dilución 1:10 del plasma excede al tiempo de coagulación del ultimo punto de la curva de calibración, se hace una dilución 1:5 de plasma y repetir la prueba. Multiplicar el resultado obtenido por 5 en lugar de 10 para tener en cuenta el factor de dilución. Así se obtendrá la concentración final del plasma.
2. Si el tiempo de coagulación de la dilución 1:10 del plasma es inferior al tiempo
de coagulación del ultimo punto de la curva de calibración, se hace una dilución 1:20 de plasma y repetir la prueba. Se multiplica el resultado obtenido por 20 en lugar de 10 para tener en cuenta el factor de dilución. Así obtendremos la concentración final del plasma. El calculo tiempo de coagulación promedio de los duplicados de las muestras y controles. La diferencia entre los duplicados debe ser inferior al 5%. Si es superior, realizar la prueba nuevamente.
El Tiempo de Fibrinógeno puede ser expresado en g/L, a
partir de la extrapolación en la curva de Calibración de Fibrinógeno.
Rango normal: 2-4 g/L.
Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia. NUEVO METODO DE CAOLIN
• Basada en el método descrito por Clauss .
• En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo
necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno. o MUESTRAS
• Plasma obtenido por punción venosa diluido 1/10 en solución de citrato
trisódico 3,8%
• Mezclar inmediatamente la sangre con el anticoagulante. Se debe evitar la
formación de espuma.
• Centrifugar la muestra a 3000 x g 10 min y luego transferir el plasma.
• Se sólo contenedores de vidrio siliconado o plástico. Los plasmas turbios,
ictéricos, lipémicos o hemolizados pueden dar resultados erróneos.
• La muestra es estable 4 horas a temperatura ambiente (15-25ºC) o 28 días si se
congela inmediatamente a –20ºC. o MATERIAL ADICIONAL o PREPARACIÓN
• Coagulómetro o cronómetro y baño • R1: Reconstituir el Rx con 2,0 mL de agua
a 37ºC ± 0,5ºC. destilada. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Tiene una estabilidad: • Equipamiento habitual de de 7 días a 2-8ºC o 1 mes a –20ºC, si se laboratorio congela inmediatamente y se conserva en el frasco original. No volver a congelar.
o REACTIVOS • R2: Agitar antes de usar.
• R3: Listo para su usar.
• R 1 Trombina bovina 100 u NIH/mL
• R 2 Tampón Imidazol, Azida sódica
• R3 Solución Caolín Opcional
COAGULATION o TECNICA
• Preparar una dilución 1/10 de la muestra y los Controles en Tampón Imidazol: 50 L
muestra + 450 L Tampón Imidazol.
• La muestra diluida debe ser procesada antes de 1 hora
• Preparar las siguientes diluciones del Calibrador en Tampón Imidazol
Dilución del Calibrador 1/40 1/30 1/20 1/10 1/5
Tampón Imidazol (mL) 3.9 2.9 1.9 0.9 0.4 COAGULATION CAL (mL) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 Factor 10/40* 10/30* 10/20* 10/10* 10/5* Concentración (mg/dL) 0.25* x c 0.33* x c 0.5* x c 1* x c 2* x c • A 0,2 mL de cada dilución añadir 20 µL de R3 y atemperar a 37ºC durante 4-6 minutos.
• Añadir 0,1 mL de reactivo R1 y cronometrar la formación de coágulos
o CÁLCULOS
• Calcular la media de los duplicados de los tiempos de coagulación, inmediatamente
después de finalizar la reacción. Utilizar los cinco puntos del calibrador para crear una curva de los tiempos obtenidos (s) frente a los valores de concentración de Fibrinógeno de cada dilución del Calibrador (mg/dL).
• Trazar la mejor curva. Examinar la curva y, si es necesario, omitir los puntos no lineales. La curva final debe constar de tres puntos consecutivos como mínimo. La creación de la curva sólo con los puntos más lineales producirá la mejor recuperación en los controles y las muestras de paciente. • La siguiente curva de calibración es sólo orientativa, variando en función del lote y concentración del calibrador, así como del instrumento utilizado.
• La concentración de Fibrinógeno en la muestra se calcula por interpolación de su
tiempo de coagulación en la curva de calibración. La dilución 1/10 del plasma representa el 100% del valor asignado.
o NOTA
Si los tiempos de dilución 1/10 se encuentran fuera de la curva lineal, preparar
diluciones a 1/5 ó 1/20, según sea necesario. Si la muestra se diluye a 1/5 dividir el resultado de la curva por 2; si la muestra se diluye a 1/20, multiplicar el resultado por 2 para obtener el resultado final.
o VALORES DE REFERENCIA
• 200 - 400 mg/dL1 ( 2.00 – 4.00 g/L) Estos valores son orientativos.
• Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia. CARACTERÍSTICAS DEL MÉTO VALORES DE FIBRINÓGENO RECOMENDADOS
• Hombres: de 200 a 400 mg/dL
• Mujeres: de 200 a 400 mg/dL • Niños: de 200 a 400 mg/dL Causa de error y limitaciones
