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Universidad de Oriente

Núcleo Bolívar
Escuela De Ciencias De La Salud
“Dr. Francisco Virgilio Battistini Casalta”
Departamento De Bioanálisis
Hematología II

Profesora Bachiller:
Lcda. Vilma Vera Zambrano Arturo
18.385.573

Ciudad Bolívar, Marzo del 2018


• El fibrinógeno o Factor I es una proteína que interviene en la coagulación
de la sangre para detener las hemorragias.

• Es una glicoproteína presente en el plasma, sintetizada por las células del


parénquima hepático, que participa en la hemostasia, específicamente
estabilizando la agregación de las plaquetas activadas, y como precursor
del coágulo de fibrina.
 Cuando se tiene heridas comienza a sangrar, la trombina
presente en la sangre convierte el fibrinógeno en fibrina,
sustancia fundamental para detener la hemorragia.

 Es responsable de la formación de los coágulos de sangre.

 Cuando se produce una herida se desencadena la transformación del


fibrinógeno en fibrina gracias a la actividad de la trombina.
 MÉTODO GRAVITATORIO: este método mide la cantidad de fibrinógeno
que hay en el plasma, pasándolo después de su transformación a fibrina

 METODO DE CLAUSS: el método de Clauss, designado como


procedimiento de referencia por el NCCLS (National Committee for Clinical
Laboratory Standards). Cuando un exceso de trombina se adiciona a un plasma
diluido, el tiempo de coagulación es inversamente proporcional a la
concentración de fibrinógeno plasmático.

 NUEVO METODO DE CAOLIN: este método de Fibrinógeno, en presencia


de un exceso de trombina, se transforma en Fibrina. El tiempo de formación
del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógeno
presente en la muestra de plasma
 METODO COAGULOMETRICO: Este método se basa en la
colocación de una bola metálica en el tubo de reacción, la cual queda
suspendida entre dos imanes e interrumpe un rayo lumínico que enfoca
a un detector. Al añadir el plasma muestra, el sistema se pone en
marcha y el tubo sufre un movimiento de vaivén, pero mientras la
muestra es líquida la bola se mantiene entre los imanes interrumpiendo
el paso del haz de luz.

 METODO DE NEFLOMETRIA: este método


turbidímetro nefelométrico siempre detecta la luz reflejada por las
partículas y no la atenuación debida a la turbidez. La unidad de turbidez
para un nefelómetro calibrado se llama Unidad de
Turbidez Nefelométrica, UTN o NTU.
 METODO DE CLAUSS

El método de Clauss, mide el índice de conversión del fibrinógeno en fibrina en


presencia de un exceso de trombina, este método ha demostrado ser una prueba
rápida, sensible y exacta. Cuando el plasma diluido se coagula por exceso de
trombina, el nivel el fibrinógeno es inversamente proporcional al tiempo de
coagulación.
El plasma para prepararse a partir de sangre total citrada, sin heparina, EDTA ni
oxalato.

• 1. Extracción de sangre con jeringa o Vacutainer. en un tubo conteniendo 1,0 mL


de citrato sódico al 3,2% ó 3,8%,

• Preparar una dilución 1:10 de la muestra de plasma o plasma control con Tampón
de Imidazol (p.e. 25 μL + 225 μL).

• Pipetear 100 μL de plasma diluido en una cubeta de pruebas. Incubar el plasma a


37°C durante 2 minutos.

• Adicionar 50 μL del reactivo precalentado. Simultáneamente poner en marcha el


cronómetro del instrumento. Registrar el tiempo de coagulación.
• Fibrinogen Trombina bovina liofilizada
≈100 NIH U/mL en tampón,
estabilizantes y conservantes.

• Imidazole Tampón de Imidazol,


estabilizantes y conservantes.

1. Reconstituir el vial de Fibrinogeno con El reactivo puede emplearse en forma


2.0 mL de agua destilada. manual o con sistemas semiautomáticos de
detección del coágulo. Seguir las
2. Tapar el vial y mezclar suavemente instrucciones de uso de los instrumentos
hasta disolver su contenido. Evitar la empleados. Es recomendable realizar la
formación de espuma. Mantener 30 medición por duplicado.
min. a temperatura ambiente, antes de
su uso. 1. Atemperar, a temperatura ambiente el
volumen suficiente de reactivo
reconstituido.
1. Si el tiempo de coagulación de la dilución 1:10 del plasma excede al tiempo de
coagulación del ultimo punto de la curva de calibración, se hace una dilución 1:5
de plasma y repetir la prueba. Multiplicar el resultado obtenido por 5 en lugar de
10 para tener en cuenta el factor de dilución. Así se obtendrá la concentración
final del plasma.

2. Si el tiempo de coagulación de la dilución 1:10 del plasma es inferior al tiempo


de coagulación del ultimo punto de la curva de calibración, se hace una dilución
1:20 de plasma y repetir la prueba. Se multiplica el resultado obtenido por 20 en
lugar de 10 para tener en cuenta el factor de dilución. Así obtendremos la
concentración final del plasma.
 El calculo tiempo de coagulación promedio de los
duplicados de las muestras y controles. La diferencia entre
los duplicados debe ser inferior al 5%. Si es superior,
realizar la prueba nuevamente.

 El Tiempo de Fibrinógeno puede ser expresado en g/L, a


partir de la extrapolación en la curva de Calibración de
Fibrinógeno.

 Rango normal: 2-4 g/L.

 Es recomendable que cada laboratorio


establezca sus propios valores de referencia.
 NUEVO METODO DE CAOLIN

• Basada en el método descrito por Clauss .

• En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo


necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es
inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.
o MUESTRAS

• Plasma obtenido por punción venosa diluido 1/10 en solución de citrato


trisódico 3,8%

• Mezclar inmediatamente la sangre con el anticoagulante. Se debe evitar la


formación de espuma.

• Centrifugar la muestra a 3000 x g 10 min y luego transferir el plasma.

• Se sólo contenedores de vidrio siliconado o plástico. Los plasmas turbios,


ictéricos, lipémicos o hemolizados pueden dar resultados erróneos.

• La muestra es estable 4 horas a temperatura ambiente (15-25ºC) o 28 días si se


congela inmediatamente a –20ºC.
o MATERIAL ADICIONAL o PREPARACIÓN

• Coagulómetro o cronómetro y baño • R1: Reconstituir el Rx con 2,0 mL de agua


a 37ºC ± 0,5ºC. destilada. Tapar y mezclar suavemente hasta
disolver su contenido. Tiene una estabilidad:
• Equipamiento habitual de de 7 días a 2-8ºC o 1 mes a –20ºC, si se
laboratorio congela inmediatamente y se conserva en el
frasco original. No volver a congelar.

o REACTIVOS • R2: Agitar antes de usar.

• R3: Listo para su usar.


• R 1 Trombina bovina 100 u NIH/mL

• R 2 Tampón Imidazol, Azida sódica

• R3 Solución Caolín Opcional


COAGULATION
o TECNICA

• Preparar una dilución 1/10 de la muestra y los Controles en Tampón Imidazol: 50 L


muestra + 450 L Tampón Imidazol.

• La muestra diluida debe ser procesada antes de 1 hora

• Preparar las siguientes diluciones del Calibrador en Tampón Imidazol

Dilución del Calibrador 1/40 1/30 1/20 1/10 1/5


Tampón Imidazol (mL) 3.9 2.9 1.9 0.9 0.4
COAGULATION CAL (mL) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
Factor 10/40* 10/30* 10/20* 10/10* 10/5*
Concentración (mg/dL) 0.25* x c 0.33* x c 0.5* x c 1* x c 2* x c
• A 0,2 mL de cada dilución añadir 20 µL de R3 y atemperar a 37ºC durante 4-6
minutos.

• Añadir 0,1 mL de reactivo R1 y cronometrar la formación de coágulos

o CÁLCULOS

• Calcular la media de los duplicados de los tiempos de coagulación, inmediatamente


después de finalizar la reacción. Utilizar los cinco puntos del calibrador para crear una
curva de los tiempos obtenidos (s) frente a los valores de concentración de Fibrinógeno
de cada dilución del Calibrador (mg/dL).

• Trazar la mejor curva. Examinar la curva y, si es necesario, omitir los puntos no lineales.
La curva final debe constar de tres puntos consecutivos como mínimo. La creación de la
curva sólo con los puntos más lineales producirá la mejor recuperación en los controles
y las muestras de paciente.
• La siguiente curva de calibración es sólo orientativa, variando en función del lote
y concentración del calibrador, así como del instrumento utilizado.

• La concentración de Fibrinógeno en la muestra se calcula por interpolación de su


tiempo de coagulación en la curva de calibración. La dilución 1/10 del plasma
representa el 100% del valor asignado.

o NOTA

Si los tiempos de dilución 1/10 se encuentran fuera de la curva lineal, preparar


diluciones a 1/5 ó 1/20, según sea necesario. Si la muestra se diluye a 1/5 dividir el
resultado de la curva por 2; si la muestra se diluye a 1/20, multiplicar el resultado
por 2 para obtener el resultado final.

o VALORES DE REFERENCIA

• 200 - 400 mg/dL1 ( 2.00 – 4.00 g/L) Estos valores son orientativos.

• Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de


referencia. CARACTERÍSTICAS DEL MÉTO
VALORES DE FIBRINÓGENO RECOMENDADOS

• Hombres: de 200 a 400 mg/dL


• Mujeres: de 200 a 400 mg/dL
• Niños: de 200 a 400 mg/dL
 Causa de error y limitaciones

 Realizar curva de calibración

 Reconstitución de los reactivos

 Recolección de la muestra

 Temperatura y limpieza