MICROBIOLÓGICA FARMACÉUTICA

MICROBIOLOGÍA FARMACÉUTICA
• La microbiología farmacéutica se puede definir como la parte de la microbiología la
cual tiene alcances en todos los aspectos de la farmacia los cuales van desde la
fabricación y control de calidad de los productos farmacéuticos terminados.
• Los productos para administración parenteral y de uso ocular deben
ser estériles.
• Existen otras formas farmacéuticas no obligatoriamente estériles que se usan por vía
oral, tópica, nasal, vaginal, etc., fabricadas con ingredientes que pueden ser substratos
adecuados para los microorganismos.
Las preparaciones farmacéuticas y los cosméticos pueden contaminarse con hongos
filamentosos, levaduras y bacterias. Las materias primas naturales, el equipamiento, el
agua, los operadores, el aire, y el material de
empaque pueden ser fuentes de contaminación de los productos farmacéuticos y
cosméticos
• La U.S. Food and Drug Administration (FDA) reconoce tres categorías de
microorganismos:
• Patógenos son aquellos microorganismos o toxinas responsables de
enfermar o infectar al hombre (Salmonella sp, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans,
Clostridium spp, etc).
• Oportunistas a aquellos microorganismos que producen enfermedad en
pacientes inmunocomprometidos.
• Objetables aquellos microorganismos que pueden inactivar drogas activas
y/o deteriorar el producto provocando una posible falta de eficacia de los
productos farmacéuticos y seguridad en cosméticos.
MEDICAMENTO CONTAMINADO
• Un medicamento o un cosmético se
consideran contaminados si contiene
microorganismos patogénicos,
oportunistas, objetables o metabolitos
microbianos tóxicos, o si presentan
deterioro físico o químico. Los
microorganismos con requerimientos
nutricionales simples tienden a estar
presentes en alto número, mayor de 106
UFC/g o ml, a pesar de que el producto no
muestre signos visibles de contaminación.
FUENTES DE CONTAMINACIÓN
• Muchos microorganismos pueden llegar a
producir toxinas constituyendo un riesgo
sanitario especialmente en formas
farmacéuticas orales (Bacillus cereus,
Staphylococcus aureus y hongos filamentosos) o
pueden provocar el deterioro de un producto
cosmético o de un medicamento como
consecuencia de su crecimiento alterando sus
características organolépticas
 DESINFECCIÓN
• la implementación de adecuados programas de limpieza y desinfección
en la industria farmacéutica persigue controlar los microorganismos
alteradores que no permiten obtener productos de calidad desde el
punto de vista microbiológico. El objetivo de estos programas es eliminar
o disminuir la carga microbiana presente en los equipos, superficies y
ambientes donde son llevados a cabo los diferentes procesos de
formulación y llenado. La eliminación o disminución de la carga
microbiana está determinada por factores como: la naturaleza de las
superficies que entran en contacto con los productos que se procesan y
la remoción por acción mecánica de los restos de materias primas
incrustadas o adheridas a superficies y equipos.
Desinfectantes y Desinfección de
superficies y equipos
• La contaminación microbiana en superficies industriales y
nosocomiales ha sido siempre un problema grave que podría llevar
contaminaciones de productos que en definitiva pueden terminar en
procesos infecciosos en pacientes. Generalmente, estos problemas
son reducidos al mínimo a través de programas de limpieza y
desinfección (sanitización), utilizando varios compuestos químicos
tales como el hipoclorito de sodio, el etanol, sales de amonio de
cuaternario, y tensioactivos anfóteros entre otros.
EFECTO FINAL DESEADO
• Cuando trabajamos con desinfectantes o mejor dicho con agentes
antimicrobianos de uso externo, tenemos dos tipos de respuestas o efectos:
• a) Los microorganismos presentes, en contacto con agente aplicado, cesan
su replicación (su número permanece constante), sin perder su viabilidad
(sin morir). Es lo que llamamos efecto BIOSTATICO (BACTERIOSTATICO,
FUNGISTATICO, BIOSTATICO)
• b) Los microorganismos presentes, al ponerse en contacto por cierto
tiempo con el agente aplicado, pierden su viabilidad, con lo cual su número
se reduce significativamente, es decir hay muerte microbiana. Esto es lo
que llamamos efecto BIOCIDA (BACTERICIDA, FUNGICIDA, VIRICIDA).
 ROTACION DE LOS
DESINFECTANTES
• En primer lugar para cumplir con las directivas
vigentes en GMP. Estas toman directivas de la
FDA, que se basan en la suposición de que los
desinfectantes se comportan como los
antibióticos, en el hecho que generan
resistencia con el tiempo.
• Esto es cierto para los Antibióticos, pero No
existe evidencia que ocurra para desinfectantes
en las condiciones de uso. Esto es así porque el
proceso de desinfección es muy enérgico
(cuando esta bien realizado) y no deja una
población de supervivientes lo suficientemente
alta como para que se establezca una población
resistente.
Esterilización
• El objetivo de cualquier proceso de esterilización es destruir o eliminar todos los
microorganismos presentes en/o sobre un objeto o sustancia.
Cuando se planea fabricar productos médicos o medicamentos estériles debe
considerarse una serie de elementos esenciales:
1. a) Selección de materias primas y componentes o preparación del material de manera
tal que la carga microbiana sea mínima (tipo y cantidad de contaminación microbiana a
ser inactivada por el proceso de esterilización)
2. b) Selección de material de envase que sea compatible con el proceso de esterilización.
3. c) Aplicación de un tratamiento esterilizante adecuado que sea compatible con los
productos y envases a esterilizar.
4. d) Validación y control de rutina del proceso de esterilización.
5. e) Almacenamiento y transporte adecuado de los productos estériles.
6. f) Suministro, apertura y utilización de los productos estériles sin recontaminación.
Métodos de esterilización
• La esterilización puede
realizarse de 3 maneras:
a. Por métodos destructivos;
b. Por muerte o inactivación; y
c. Por eliminación con medios
físicos.
Uso de Indicadores Biológicos en cargas de
productos inyectables
•.
Al momento se han utilizado diferentes modelos y presentaciones de
Indicadores Biológicos (IB) durante la validación y el monitoreo de los
ciclos de esterilización por vapor de numerosos productos
farmacéuticos, incluyendo ampollas con líquidos.
• Los IBs son microoganismos incluyen suspensiones de esporas
cuantificadas, y tiras conteniendo esporas que han sido inoculadas
directamente dentro del producto, o indicadores autocontenidos para
valorar el proceso de esterilización. Además se han utilizado IB para
monitorear cargas de líquidos colocando tiras con esporas o indicadores
auto-contenidos en varios puntos dentro de la cámara del autoclave.
Conservadores en productos farmacéuticos
y cosméticos
• Los conservadores son sustancias individuales o mezclas que se
encuentran en productos cosméticos y algunos productos
farmacéuticos a fin de que se mantengan preservados de una
contaminación microbiana durante su uso y/o almacenamiento evitar
de esta forma una alteración del producto (física, química u
organoléptica) o un daño de tipo patogénico sobre el usuario (daño
sanitario), ambas situaciones son causa de reclamos por parte del
usuario con el consiguiente daño económico
Uso de conservantes
• Un preparado Farmacéutico/ cosmético no posee por sí, una
adecuada actividad antimicrobiana, debe añadírsele un protector que
es un agente químico conservador, en especial a los preparados
acuosos.
• La calidad debe mantenerse durante el almacenamiento y uso. Tanto
la ausencia de patógenos como la biocarga microbiana, no debe
supeditarse solamente a la presencia de conservadores, sino que
requiere como hecho principal el respeto de las Normas de Buenas
Prácticas en la elaboración así como el tener en cuenta las distintas
condiciones y factores que llevan a una contaminación.
CONSERVANTES EN LA INDUSTRIA
FARMACÉUTICA
• Como los microorganismos poseen la capacidad de contaminar a
estos productos, durante las etapas de elaboración y/o uso, estos
compuestos conservadores son agregados principalmente para
asegurar una estabilidad continua y seguridad de los mismos. Pero se
deberá tener en cuenta que la principal prevención es trabajar con las
normas de Buenas Prácticas de Elaboración y no utilizar compuestos
inhibidores para “corregir” falencias de fabricación. Por eso existen
además, técnicas protectoras (áreas limpias con aire filtrado,
aisladores, etc.) que pueden utilizarse en forma aislada o combinada
con alguno de los conservadores
• Los requisitos de nutrientes de la mayoría de organismos saprófitos
causantes de deterioro, se hallan por lo común en casi todas las
formas farmacéuticas y cosméticas, muchos ingredientes son
fácilmente biodegradables de igual forma que cantidades trazas de
residuos químicos contaminantes. El agua de uso farmacéutico puede
contener trazas suficientes que permiten el crecimiento de muchos
pseudomonadales y otras especies que habitualmente se asocian a
alteración de productos, dado que el agua es ampliamente utilizada
en estas industrias.
¿Cómo actúan los microorganismos en una
contaminación?
•
Estos organismos poseen diversas actividades metabólicas las cuales
conducen a una variedad amplia de alteraciones o daños para el
producto o usuario respectivamente, así como en la estabilidad del
producto si se permite su persistencia.
• La efectividad de un conservador puede realzarse o puede disminuir
por los constituyentes activos del preparado o formulación como así
también por el envase o sistema de cierre que posee, dado la
posibilidad de absorción del agente conservador por parte del
material del envase
CONSERVADOR IDEAL
No existe ya que éste debería cumplir una serie de atributos como ser:
• Amplio espectro en su acción antimicrobiana
• Efectivo y estable frente a diferentes pH
• Químicamente estables
• Compatible con diferentes componentes de una formulación
• Compatibilidad con los envases
• No alterar las características del producto
• Poseer coeficiente de partición O/W adecuado
• No tóxico en concentraciones de uso
• Evitar adaptaciones de microorganismos a él
• Económico
• Cumplimentar con regulaciones vigentes
Efectividad de los conservadores de
acuerdo a diferentes metodologías
• Para realizar tales ensayos deben tenerse en cuenta varios factores:
1) la metodología microbiológica a aplicar
2) la naturaleza de los ingredientes involucrados
3) el conservador añadido
4) el proceso de elaboración
5) los envases de los productos
6) la frecuencia de uso y
7) las condiciones de almacenamiento
Sistemas conservantes según su modo de
acción
• Conservantes de amplio espectro de actividad (bacterias, hongos y levaduras)
• Nitrodioxanos, clorobutanol, cloruros de polihexametilenbiguanido, ácido
dehidroacético, formaldehído, isotiazolinonas, xilenoles, oxazolidinas, ácido salicílico,
fenilmercurios, glutaraldehido, derivados undecilénicos, etc.
• Conservantes que, aún siendo de amplio espectro, son más efectivos contra
bacterias
• Nitropropanodioles, clorhexidinas, azoniadamantanos, imidazolidinilureas,
hidantoinas, fenoxietanol, etc.
• Conservantes que, aun siendo de amplio espectro, son más efectivos frente a hongos
• Parabenos, alcoholes diclorobencílicos, sorbato potásico, benzoato sódico, óxido de
piridinetiol, etc.
Tipos de conservantes
Tipos de conservantes
• Mecanismos de actuación
• A diferencia de los antibióticos, de los que se conoce el modo de
acción a nivel molecular frente a los microorganismos, de los
conservantes únicamente se conoce de forma generalizada los puntos
de actuación. Casi todos actúan desnaturalizando las proteínas o
afectando a la permeabilidad de la membrana de los
microorganismos y, por tanto, bloqueando el transporte y la
generación de energía.
Agentes que dañan la membrana
• Los disolventes orgánicos como los alcoholes y tensioactivos
catiónicos (p. ej., los amonios cuaternarios) dañan la
integridad estructural de la membrana, es decir, alteran la
disposición ordenada de lípidos y proteínas, lo que origina
interferencias con procesos de transporte y metabolismo
energético de la célula.
• Los ácidos débiles como p-hidroxibenzoico (parabenos),
benzoico o dehidroacético actúan alterando el potencial
eléctrico de membrana y permeabilidad, bloqueando la
generación de energía y pérdida de transporte.
Agentes desnaturalizantes de proteínas
• Alcoholes y donadores de formaldehído, entre otros,
facilitan la agregación y precipitación de las proteínas del
citoplasma y membranas de los microorganismos.
Agentes modificadores de grupos
funcionales
• Esta clase de agentes se caracteriza porque actúan alterando
los grupos funcionales de las proteínas de las membranas,
centros activos de enzimas y ácidos nucleicos (donadores de
formaldehído, isotiazolinonas...).
Métodos microbiológicos de
Control de las formas
farmacéuticas
ENSAYO DE ESTERILIDAD
• El ensayo de esterilidad tiene por objeto
revelar las contaminaciones por
microorganismos que pueden estar
presentes en los productos medicinales,
biomédicos, sustancias y todo aquel
material que según las farmacopeas
tienen como requisito ser estériles, ya
sea que hayan sido esterilizados o que
hayan sido preparados asépticamente.
• El ensayo tiene limitaciones que
derivan de 2 problemas
insolubles:
1) La muestra adecuada; y
2) La imposibilidad de los medios
de cultivo de permitir el
crecimiento de todos los
microorganismos viables que
puedan estar presentes en la
muestra
• Esterilidad es el estado libre de
microorganismos vivos de todo tipo. Este
concepto es fácil de enunciar pero en la
práctica es irreal, ya que no se puede
demostrar experimentalmente, y por lo
tanto es
esencialmente el resultado de una
operación estadística. Es imposible afirmar
la esterilidad de una partida o lote, a
menos que se controlen una por una todas
las unidades.
• La OMS se basó en los principios estadísticos para realizar un
muestreo adecuado, que sea representativo del lote a analizar y por el
cual se pueda detectar una posible contaminación.
La probabilidad de aceptar por el resultado de un ensayo, lotes que
tengan un determinado porcentaje de contaminación está
directamente relacionado al tamaño de la muestra más que al
tamaño del lote.
• Existe además el riesgo de rechazar lotes del producto por
contaminaciones accidentales durante el ensayo.
• Tomando una cantidad razonable de
muestras para realizar el ensayo de
esterilidad, se detecta solamente una
contaminación grosera. Por ello se llega a
una conclusión: En la manufactura de un
producto se deben tomar todas las
precauciones necesarias para asegurar
que el mismo sea estéril.
• En el ensayo de esterilidad deben incluirse no sólo muestras
representativas de todo el lote sino también muestras tomadas de las
partes del lote más expuestas al riesgo de contaminación, como ser:
• Productos envasados en asepsia:
• Muestras de envases llenados al inicio y al final de cada ciclo de
llenado y luego de alguna interrupción del trabajo
• Productos esterilizados en su envase final: Muestras de la parte
potencialmente más fría de la carga de cada ciclo de autoclave.
PRUEBA DE ENDOTÓXINAS
BACTERIANAS
• La fabricación de productos
inyectables en la industria
farmacéutica y de dispositivos
médicos incluye entre sus requisitos
esenciales, minimizar las fuentes de
piretógenos durante la fabricación y
los consecuentes riesgos de
contaminación y/o impurezas o
inactivarlos/removerlos según el
caso
• Se define como piretógeno a toda sustancia que, cuando es inyectada en
sangre o LCR en humanos o en animales de experimentación, produce
fiebre.
• Las EB se liberan continuamente en el medio en que se encuentran las
bacterias, en pequeñas cantidades durante su división y en mayoría,
durante su lisis.
• Por esto, un producto estéril no necesariamente será
apirogénico. Si bien las EB suelen nombrarse indistintamente como LPS, la
aplicación del primer término, correspondería, más precisamente, al
producto “natural” mientras que el segundo aplicaría a la forma purificada
empleada como estándar por la industria farmacéutica y como tal, según
el método de extracción puede contener componentes varios de la
membrana celular (fosfolípidos, proteínas, glucanos, ácidos nucleicos).
• La importancia de las EB radica
en su naturaleza ubicua, su
mayor toxicidad en relación a
otros piretógenos, estabilidad
frente a condiciones extremas
de tratamiento, su ocurrencia
en soluciones de uso
parenteral y su tamaño
demasiado pequeño para ser
retenidas por filtros
esterilizantes convencionales
FUENTES DE CONTAMINACIÓN DE
ENDOTÓXINAS
• A menudo se cree que el control de producto terminado es el determinante
absoluto para establecer que el producto está libre de contaminantes. Sin embargo,
deben enfatizarse las BPM, controles durante el proceso y validación del mismo.
• Dentro de los insumos, el agua es considerada fundamental en la elaboración de
productos inyectables. Puede estar presente como excipiente o usarse para la
reconstitución de productos farmacéuticos, emplearse para la síntesis de
ingredientes activos, durante la producción del producto terminado o como agente
de limpieza de recipientes, equipos y envases primarios. Sus sistemas de
producción, almacenamiento y distribución deben ser diseñados acorde a lo
codificado en Ph Eur y USP para Agua Calidad Inyectable y validados, de forma de
prevenir la contaminación microbiana, disminuir los riesgos de formación de bio-
película.
• En los procesos de elaboración de inyectables,
los puntos críticos de control de procesos se
ubican en:
• áreas elaboración de soluciones
• fraccionamiento y de preparación de
materiales / lavado
• despirogenado de envases y tapones equipos
y recipientes
• La búsqueda de endotoxinas estará muy
ligada a aquellos procesos en los que no hay
un paso de despirogenización como parte de
los mismos. Las materias primas deben incluir
requisitos de calidad
microbiológica incluyendo EB.
• La diversidad y el número de microorganismos presentes en un
producto no obligatoriamente estéril van a estar influenciados por
distintos factores:
• Intrínsecos a la formulación: drogas activas con acción
antimicrobiana, conservadores, pH, contenido de nutrientes,
actividad acuosa, presión osmótica, potencial de óxido-reducción y
calidad higiénica de las materias primas empleadas, en especial las de
origen natural.
• Extrínsecos: condiciones higiénicas durante la manufactura;
contenido microbiano del material de empaque.
Alteración de formas farmacéuticas no
estériles
• La alteración de un producto no obligatoriamente estéril puede ser
llevada a cabo por bacterias, hongos y levaduras.
• Su desarrollo en la fase acuosa se pone de manifiesto por cambios de
coloración, rancidez, cambio en la consistencia, cambio de pH, separación
de fases de una emulsión, enturbiamiento, aparición de olores extraños,
partículas o sedimento.
• Con el fin de obtener productos con una calidad higiénica aceptable, con
niveles bajos de microorganismos indicadores y ausencia de
microorganismos patógenos, es imprescindible el control microbiológico
de todas las materias primas y del agua usada para fabricación y como
ingrediente también debe ser controlada
TIPOS DE AGUA
AGUA POTABLE
• El agua puede provenir de diferentes fuentes, lo que
incluye servicios públicos de distribución de agua, o
el abastecimiento de fuentes privadas (pozos
concesionados). También puede ser una
combinación de ellas. El Agua potable puede
emplearse en las etapas iniciales de la síntesis
química de las sustancias activas farmacéuticas así
como en la limpieza de los equipos empleados para
su producción
• El Agua potable es la fuente de agua prescrita para la producción de
agua para uso farmacéutico. Es responsabilidad del fabricante
verificar la potabilidad del agua y en su caso tomar las medidas
necesarias para que cumpla con esta calidad. Dado que puede haber
variaciones en las características de calidad del Agua potable durante
las distintas estaciones del año
AGUA PURIFICADA NIVEL 1
• El agua purificada nivel 1 debe cumplir con las especificaciones
establecidas en la monografía respectiva. Se usa como ingrediente en
la fabricación de productos farmacéuticos no inyectables,
en la limpieza de algunos equipos y en las fases finales de síntesis de
algunos principios activos. Los sistemas de purificación, circulación y
almacenamiento del agua purificada deben considerar elementos
protectores que eviten la proliferación microbiana. Estos sistemas
también requieren de un programa frecuente de sanitización y
monitoreo microbiológico que garantice la adecuada calidad
microbiológica en los puntos de uso.
 Agua purificada nivel 2
• Debe cumplir con las especificaciones establecidas en la monografía
respectiva. Se usa como ingrediente en la fabricación de productos
farmacéuticos no inyectables que requieren de una alta pureza química y
microbiológica. Los sistemas de purificación, circulación y almacenamiento
del agua purificada nivel 2 deben considerar elementos protectores que
eviten la proliferación microbiana. Estos sistemas también requieren de un
programa frecuente de sanitización y monitoreo microbiológico que
garantice la adecuada calidad microbiológica en los puntos de uso. El agua
purificada nivel 2 se prepara a partir de Agua potable con los
Pretratamientos necesarios que pueden incluir desionización, osmosis
inversa y/o ultrafiltración
 Agua para la fabricación de inyectables.
• Se prepara a partir de Agua potable a la que se le dan los tratamientos adecuados
seguidos de un proceso terminal de destilación u otra tecnología equivalente o
superior que demuestre la eliminación de sustancias químicas, microorganismos y
endotoxinas y que no contiene sustancias adicionadas. El agua purificada también
puede ser utilizada como punto de partida, sometiéndola de igual manera a un
proceso de destilación. Este tipo de agua se utiliza como vehículo o solvente en la
fabricación de productos farmacéuticos inyectables, fabricación de principios
activos de uso parenteral, también se usa en los últimos pasos de la limpieza de
equipos, tuberías y recipientes involucrados en estos procesos. El sistema usado
para la producción, almacenamiento y dispensado o distribución de Agua para la
fabricación de inyectables, debe estar diseñado para prevenir la contaminación
microbiana, la formación de endotoxinas bacterianas y debe estar validado.
Agua estéril para uso inyectable.
• Es agua para fabricación de inyectables envasada en recipientes
adecuados de plástico o vidrio tipo I o II con volumen máximo de un
litro y esterilizada terminalmente por un método validado.
Generalmente es usada como diluyente de preparaciones
parenterales.
Agua bacteriostática estéril para uso
inyectable.
• Es agua para fabricación de inyectables esterilizada, que
contiene uno o varios agentes antimicrobianos. Se emplea
como diluyente de preparaciones parenterales y generalmente
está empacada en envases de dosis individuales de 1 a 30 mL.
Agua estéril para irrigación.
• Es agua para fabricación de inyectables esterilizada y
suministrada en envases de más de un litro de capacidad y con
diseño especial para vaciado rápido durante su uso
• Agua estéril para inhalación. Es agua para fabricación de inyectables
esterilizada y envasada en recipientes adecuados. Se usa en
inhaladores o para preparar soluciones para inhalación.