Métodos de diagnóstico

molecular y celular
Dr. Jonathan García Román
Análisis genético de mutaciones
• El análisis genético puede realizarse con un objetivo de diagnóstico de una
enfermedad, o para detectar la existencia de mutaciones genéticas que
puedan transmitirse a la descendencia o puedan incrementar la probabilidad
de desarrollar determinadas enfermedades (como ciertos tipos de cáncer
hereditario). 
• Razones por las cuales se puede hacer un análisis genético de mutaciones:
• Presencia en la familia de una enfermedad hereditaria, o que se sospecha
que pudiera ser hereditaria.
•  Presencia, en varios miembros de la familia, de enfermedades de
predisposición genética, tales como cáncer, enfermedades
neurodegenerativas o enfermedades cardiovasculares.
•  Infertilidad.
•  Casos previos en la familia de recién nacidos con enfermedades
congénitas, dismorfias o formas sindrómicas.
•  Valoración de riesgos de cara a la planificación de un embarazo.
Análisis genético de mutaciones
• Para realizar un análisis genético es necesario estudiar el material
genético que se encuentra en nuestras células.

• Normalmente, el tipo de muestra necesario para obtener el material

genético es una pequeña cantidad de sangre.

• Para realizar un estudio cromosómico (o cariotipo) las células deben ser

cultivadas y procesadas, con el fin de poder observar los cromosomas al
microscopio.

• Para analizar una región concreta del ADN, es necesario extraer dicho
ADN de las células y analizar específicamente una determinada región
del genoma.

• La metodología de análisis más resolutiva que existe para el diagnóstico

genético es la secuenciación de ADN, la misma técnica que se ha
utilizado para descifrar el genoma humano.
Análisis genético de mutaciones:
análisis del cariotipo
Cariotipo: es el patrón cromosómico de una especie expresado a través de un
código, establecido por convenio, que describe las características de sus
cromosomas
Análisis genético de mutaciones:
secuenciación del DNA
 Localización e interpretación de los
genes de la enfermedad humana

Hibridación
in situ

Preparación de Hibridación In situ que demuestra un

señal positiva contra el VPH de varios tipos [HPV types
6,11,16,18,31,33,35,45,51,52]
 Localización e interpretación de los
genes de la enfermedad humana

Hibridación
in situ
fluorescente
Tecnología del DNA recombinante en
el campo de la medicina

El DNA recombinante es simplemente es una molécula de DNA

compuesta de secuencias derivadas de diferentes fuentes
 Tecnología del DNA recombinante en
el campo de la medicina
Sistemas de Restricción-Modificación (M-R)
El sistema de restricción-modificación (M-R) es usado in vivo por
bacterias para protegerse de ataques de DNA exógenos que ingresen a
la bacteria, distinguiendolo del ADN propio, análogo a un sistema
inmune. El ADN propio no es reconocido por sus enzimas de
restricción, puesto que previamente lo ha modificado por metilación a
través de la acción de una metiltransferasa, enzima que transfiere
grupos metilo desde S-Adenosil-Metionina (SAM) a bases específicas.
Este sistema fue descubierto en 1968, a resultas de una serie de
estudios sobre la infección del fago l en dos cepas diferentes de
Escherichia coli (las llamadas cepas “K12” y “B”). Este sistema consta
de dos partes:
Tecnología del DNA recombinante en el campo de la
medicina:
enzimas de restricción
 Tecnología del DNA recombinante en
el campo de la medicina

Algunas enzimas
de restricción de
varios
microorganismos
Tecnología del DNA recombinante en
el campo de la medicina

Después de cortado el DNA

¿Cómo se analiza?
Tecnología del DNA recombinante en
el campo de la medicina
Una vez cortado el DNA se requiere volverlo a unir con
una DNA ligasa, por ejemplo, la T4.
Tecnología del DNA recombinante en
el campo de la medicina

Los plásmidos modificados se

crecen en bacterias
Tecnología del DNA recombinante en
el campo de la medicina
Tecnología del DNA recombinante en
el campo de la medicina

El DNA
modificado se
introduce a las
bacterias a través
de métodos como
la
electroporación, o
el choque
térmico.
Tecnología del DNA recombinante en
el campo de la medicina

Una vez
introducido el
plásmido en la
bacteria, este es
replicado junto
con la cromatina
bacteriana y es
transferido a
cada bacteria
hija de la clona
original.
Tecnología del DNA recombinante
en el campo de la medicina
Insulina transgénica
Urokinasa, vacuna contra el VPH
Interferon

Los interferones (IFNs) son un grupo

de proteínas señalizadoras producidas y
secretadas por las células hospederas como
respuesta a la presencia de
diversos patógenos, tales
como virus, bacterias, parásitos y células
tumorales. En un caso típico, una célula
infectada por un virus secretará
interferones, generando una activación en
las defensas anti-virales en las células
cercanas a dicha célula infectada.
Proteomica

Proteoma: colección de todas las proteínas

expresadas en una células en un determinado
momento.
Proteomica: es el estudio a gran escala de las
proteínas
Proteomica:
Procedimiento del análisis de proteomica

A través de un análisis de proteomica se puede saber si una proteína o varias

proteínas están relacionadas con una enfermedad, esto se hace estudiando el
proteoma de un grupo de células sanas y comparando con el proteoma de un
grupo de células enfermas.
Anatomía patológica y biología
molecular

La anatomía patológica humana (AP) es la

rama de la medicina que se ocupa del
estudio, por medio de técnicas morfológicas,
de las causas, el desarrollo y las
consecuencias de las enfermedades. El fin
último de esta especialidad es el diagnóstico
(basado en técnicas moleculares) correcto
de biopsias, piezas quirúrgicas, citologías y
autopsias.
Diagnostico por medio de PCR, FISH,
proteomica, secuenciación, etc., de:

Biopsias:

Piezas quirúrgicas:
 Diagnostico por medio de PCR, FISH,
proteomica, secuenciación, etc., de:

Citologías:

Autopsias: