TAREA TPICOS EN FISIOPATOLOGA MOLECULAR DEL CNCER Y

TERAPIA GNICA
BRIAN IGNACIO RIVAS TIZNADO
4 AO BIOINGENIERA
1) Describir cmo se secuencia el genoma de una clula cancergena.
Hacer un esquema explicativo.
Actualmente las tcnicas de Secuenciacin de Nueva Generacin (NGS) son
las preferidas para el estudio y caracterizacin de nuevos genes relacionados con el
cncer. Algunas de las ms usadas con Pirosecuenciacin y Solexa Ilumina.

Obtencin de
muestras de un
paciente enfermo

Extraccin de ADN y
ARN

Secuenciacin por
medio de NGS

Creacin de nuevas
Determinacin de
terapias basadas en
oncogenes y deteccin
blancos terapeticos
de mutaciones
obtenidos por Ing.
2) Ud. Desea un modelo de ratn Gentica
knock-out condicional para el gen

supresor de tumores X de manera que se elimine el gen X solamente en el

hgado del ratn adulto. Cmo
se logra
esto en teora? Hacer
esquema.
Existen muchas maneras de suprimir un gen en un ratn. Uno de los mtodos
ms usados es la tcnica de recombinacin homloga, sin embargo, el problema
con esta tcnica, es que suprime el gen en todo el animal. Para arreglar esto, es
posible hacer un ratn knock-out inducible o condicional. Una forma efectiva de
hacer esto es mediante el sistema de recombinacin Loxp/Cre. Cre es una enzima
que cataliza una recombinacin especfica de sitio, de secuencias de ADN situadas
entre dos sitios loxP.

CONSTRUCTO:

PEPC

GEN X
loxP

GFP
loxP

+Cre

PEPC

GFP

Se utiliza PEPCK porque es un promotor especfico del Hgado, de lo

contrario se silenciar el gen en todos los rganos.
GFP sirve como gen reportero

Transfecci
O btencin
n en
de ratn
clulas
knock-out
em brionari
inducible
as en
por
cultivo y
cruzam ient
posterior
o de
im plantaci
raton es
n en
heterocigot
blastocito
Disee un modelo de terapia
gnica para eliminar un os
gen M en clulas
Insercin
del
conducto
en un
plsm ido y
posterior
am plificaci
n en
bacterias

3)
cancerosas de la mdula
espinal. Escoja un vector viral, un mtodo
direccionamiento del vector. Indicar cmo probara su eficacia en ratones.
Usando terapia antisentido podemos introducir un RNA complementario al RNA
codificado por el gen M mediante un vector viral, evitando de esta forma su
expresin. Como el vector viral Adenovirus es conocido por tener tropismo nativo
hacia el sistema nervioso central, resulta ideal para ser usado en este tratamiento.
El vector producido a travs de tcnicas recombinantes, debe tener el promotor
constitutivo NSE (Neuron-specific enolase), el cul es especfico para clulas de la
mdula espinal, y no debe tener capacidad de auto replicarse. A este vector se le
insertar la secuencia complementaria del RNA codificado por el gen M. El mtodo

de direccionamiento del ser transcripcional. Para probar la eficacia de esta terapia

en ratones tendramos 4 grupos de ratones, siendo el primero un grupo de ratones
con tumores sin ningn tratamiento (Control Negativo), el segundo un set de
ratones con tumores al cual se le inyectar el vector viral sin la secuencia que
codifica para el RNA complementario al RNA del gen M , un tercer un grupo de
ratones con tumores al cual se le inyectar el vector viral con el constructo
completo y un cuarto grupo de ratones con tumores el cual ser sometido a un
tratamiento conocido que se sepa tenga sea capaz de silenciar el gen M (Control
Positivo) . De este modo, podremos asegurarnos si el constructo completo genera
una respuesta contra el tumor, y si esta es efectiva o no.