LCS3111

Introducción a la microbiología
y tinción Gram
 Aprendizajes esperados

• Diferencia las características estructurales de las

bacterias.

• Identifica el fundamento del método de tinción de

Gram utilizado en microbiología.

• Identifica el fundamento del método de tinción

Ziehl Neelsen utilizado en microbiología.
 Introducción
Microbiología: ciencia que estudia a los seres vivos que se
escapan de nuestro poder resolutivo del ojo humano.

• INFECTOLOGÍA: Bacterias, virus y hongos

• PARASITOLOGÍA: Parásitos: Macroscópica y

microscópicamente
Introducción
MORFOLOGÍA DE LAS BACTERIAS
 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA

Eubacteria
s
procariotas
Archea
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

Componentes estructurales Componentes accesorios

• Pared Celular • Flagelos, fimbria, pili

• Membrana Citoplasmática • Exopolisacáridos (Cápsula y
• Citoplasma (ribosomas, glicocalix)
inclusiones, ADN) • Espora

IMPORTANTE: Las células

procariotas carecen de núcleo y
organelos
ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

PARED CELULAR:
Peptidoglicano, formado por dos azúcares: N-acetilglucosamina y el N-
acetilmurámico)
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

PARED CELULAR:

Función:
• Mantener la forma de la célula.
• Evitar la lisis osmótica.
• Regular el intercambio con el exterior (permeabilidad selectiva)
• Tener propiedades antigénicas

Componente principal de las bacterias, a excepción de los

Micoplasmas spp., que carecen de pared celular.
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

Membrana citoplasmática: Carece de esteroles.“Modelo de

mosaico fluido”
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

Membrana citoplasmática:
Función:
• Permeabilidad (nutrientes y desechos)
• Sistema de transporte (activo y pasivo)
• Transporte de e- . Fosforilación oxidativa
• Biosíntesis (enzimas y proteínas)
• Fuente de energía
• Liberación de exoenzimas
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

Membrana citoplasmática
Mesosoma: invaginaciones de la membrana plasmática de las
bacterias.

En ellos se fija el ADN

cromosómico a la membrana
citoplasmática, se realiza la
respiración celular y se
controla la división celular
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS
CITOPLASMA
Formado por una matriz gelatinosa “Protoplasma”

• Componente líquido
• Ribosoma
• Inclusiones (gotas de lípidos de
reserva)
• Proteínas (enzimas, complejos
enzimáticos, estructurales)
• Incluye al nucloide y Material
Genético extracromosómico
(plasmidos)
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

CITOPLASMA
Nucleoide:
• Cromosoma único, haploide
• Carece de Membrana
• ADN doble hebra circular
superenrrollado, se fija al
mesosoma en la etapa previa de
división celular
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

Plásmidos

Pequeñas secuencias de ADN

circular extracromosómico que
le confieren a la célula la
capacidad de intercambiar
material genético con otras
células o resistencia frente a
antibióticos
COMPONENTES ACCESORIOS
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

FIMBRIAS Y PILIS

• Fimbria: filamento proteico ligado a

la adhesión bacteriana.

• Pili: pelo sexual ligada a la

conjugación bacteriana.
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

Flagelos

 Apéndice filamentoso helicoidal.

 Movilidad bacteriana.
 Presente sólo en algunos bacilos.
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

Cápsula

Tinción con tinta china en donde

se identifica la cápsula de
Klebsiella pneumoniae
Colonias mucoides de Klebsiella
pneumoniae
 ESTRUCTURA DE LAS EUBACTERIAS

Esporas

Esporas de Clostridium
botulinum
MORFOLOGÍA DE LAS BACTERIAS Y
TINCIÓN GRAM
 Morfología de las bacterias

Según forma:
 Morfología de las bacterias

Según Pared celular

 Tinción Gram
Fundamento tinción Gram

Basado en las características de la pared celular.

• Cristal violeta: afinidad por el peptidoglicano

• Lugol (yodo-yoduro potásico): mordiente de la tinción,
formando un complejo insoluble en agua con el cristal violeta.
• Alcohol acetona: al ser un solvente lipídico, destruye la
membrana externa de las bacterias Gram negativas y las
bacterias Gram positivas al tener mayor capas de
peptidoglicano retienen el cristal violeta.
• Safranina: colorante de contraste para tinción de Gram
negativas.
 Tinción Gram
(Bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844)

3. Alcohol: elimina el 4. Safranina:

1. Cristal violeta: 2. Lugol: ayuda a colorante en bacterias Tinción de
Tanto bacterias fijar el colorante en Gram negativas al tener contraste para
Gram positivas y el peptidoglicano estas una delgada capa las bacterias
negativas se tiñen de peptidoglicano, a Gram negativas
diferencia de las
bacterias Gram positivas,
el cristal violeta
permanece en su gruesa
capa de peptidoglicano
 Tinción Gram
Protocolo de tinción Gram

1. Aplicar tinción cristal violeta sobre el frotis seco durante 1 minuto y luego
lavar con agua corriente, para eliminar exceso de tinción.

2. Aplicar Lugol (fijador) durante 1 minuto y lavar con agua corriente.

3. Aplicar alcohol (decolorante) durante 10-15 segundos y lavar

inmediatamente con abundante agua corriente.

4. Aplicar Safranina (tinción de contraste) durante 30 segundos y lavar con

agua corriente.

5. Dejar secar durante unos minutos.

¿ y qué pasa con las micobacterias?
 Pared celular micobacterias
BAAR: Bacilos ácido-alcohol resistentes
Componente principal: ácidos micólicos, que resisten a la
coloración con tinción Gram

Tinción Ziehl
Neelsen

- Fucsina básica
- Ácido-alcohol
- Azul de metileno
 EN RESUMEN…

ACTIVIDAD VIRTUAL

• Responda las preguntas planteadas en el Foro nº1 “Introducción

a la microbiología y tinción Gram”.

• Intervenga en las respuestas de dos compañeros.

¿DUDAS Y/O
CONSULTAS?