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Cromatografía
Es una técnica en la que los
componentes de una mezcla se
separan basándose sobre diferencias
de las velocidades a las cuales son
acarreados por una fase móvil gaseosa
o líquida a través de una fase
La fase móvil en cromatografía es aquella que
estacionaria fija.
se mueve sobre la fase estacionaria o a través de
ésta acarreando con ella la mezcla de analitos.
Puede ser un gas, un líquido o un fluido
supercrítico.
Tipos de Cromatografía
En la cromatografía en columna, la fase estacionaria
se mantiene dentro de un tubo delgado, y la fase
móvil es forzada a través del tubo mediante presión o
gravedad.
La eficiencia de las
columnas
cromatográficas se
incrementa a medida
que el número de
platos N aumenta y
conforme la altura de
plato H se reduce
¿Cómo se calcula el número de platos?
Variables que afectan la eficiencia de la columna
Los métodos para minimizar la altura de plato, incluyen la reducción del tamaño de la
partícula del material de empacamiento, el diámetro de la columna y el grosor de la
película líquida.
Optimización
Variación en el factor de retención.
-La elución ocurre por el flujo de una fase móvil inerte gaseosa. La fase móvil
no interactúa con las moléculas del analito. Su única función es transportar al
analito a través de la columna.
-
Cromatografía de gases
Cromatografía Cromatografía
Gas-Líquido Gas-Sólido
Se basa en la partición del analito entre Se basa en una fase estacionaria sólida
una fase móvil gaseosa y una fase en la cual la retención de los analitos
líquida inmovilizada en la superficie de ocurre debido a una adsorción física.
un empaque sólido inerte o en las
paredes del tubo capilar. Tiene una aplicación limitada debido a
la retención semipermanente de
moléculas activas o polares.
-Una respuesta lineal a los solutos que se prolonga a lo largo de varios órdenes
Características ideales de magnitud.
de un detector -Un intervalo de temperatura que va desde temperatura ambiente hasta al menos
400 ºC.
Producen una salida libre de pulsos cuya velocidad Consiste en una pequeña cámara cilíndrica que se
se controla con facilidad. llena y se vacía mediante el movimiento hacia atrás
y hacia delante de un pistón.
Tienen una capacidad relativamente baja (alrededor
de 250 mL) y son poco prácticas cuando se deben El bombeo produce un flujo pulsado que debe ser
cambiar los disolventes. atenuado después debido a que los pulsos
aparecen como ruido basal en el cromatograma.
Se pueden adaptar las columnas con sobrecubiertas de agua que son alimentadas desde un baño a
temperatura constante para producir un control preciso de la temperatura.
Para evitar que se ensanchen los picos, el volumen del detector deber ser menor que el 20% del
volumen de la banda cromatográfica.
Las burbujas que puedan existir en el detector producen ruido, y por eso se debe aplicar al detector una
contrapresión, para impedir que se formen burbujas durante la despresurización del eluyente.
Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC): Instrumentación
Detectores
Detector ultravioleta:
Utiliza una celda de flujo para aprovechar el hecho de que muchos solutos
absorben luz ultravioleta.
Los equipos más simples utilizan la intensa raya de emisión a 254 nm de una
lámpara de mercurio.
Estos detectores son muy sensibles, pero responden sólo a analitos que
presentan fluorescencia.