ANALISIS DE

ALIMENTOS:
CROMATOGRAFÍA –
CROMATOGRAFÍA LIQUIDA
 FACULTAD DE INGENIERIA DE
PROCESOS
MAESTRÍA EN CIENCIA Y
TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS
ASIGNATURA: ANALISIS DE ALIMENTOS

TEMA:
ANALISIS DE ALIMENTOS: CROMATOGRAFIA

INTEGRANTES:
- Quispe Chino Gladys
- Maraza Flores Valery
- Condori Valencia Rosa
- Coaquira Quilca Ziliany
INTRODUCCION
La cromatografía líquida de alto
rendimiento (HPLC) es una de las
técnicas de cromatografía más utilizadas
debido a su capacidad de separar
analitos de distinta naturaleza presentes
en una mezcla.

No obstante, esta amplitud de

aplicaciones dificulta la toma de
decisiones a la hora de desarrollar un
proceso de separación por esta técnica,
más si es el primer acercamiento a HPLC.
 Ventajas A diferencia de otras
•Amplio rangotécnicas
de aplicabilidad debido a la alta disponibilidad de equipos, columnas y
demás materiales, que la hacen capaz de analizar casi cualquier mezcla deseada
(Snyder, Kirkland y Dolan, 2010).

• Alta precisión en sus resultados (±0.5 % o menor) (Snyder et ál., 2010).

• Fácil manipulación de los gradientes generados en la fase móvil (Fallon et ál., 1987).

• No es destructiva, es decir, los compuestos separados en la columna pueden ser

recolectados, lo que permite el uso de la HPLC como una técnica de preparación o
purificación de muestras (Fallon et ál., 1987).

• Tiempo de separación menor a 30 min por muestra analizada (Fallon et ál., 1987). •
Alta reproducibilidad en los análisis cuantitativos (Dong, 2013).

• No está restringida por la volatilidad o estabilidad térmica de la muestra (Ozores, s.

f.).
Elección de la fase móvil
● En cromatografía líquida muchas separaciones requieren el uso de fases
móviles de dos o más componentes. Además, el tipo de cromatografía
elegido y los detectores disponibles imponen ciertas condiciones en la
selección de los líquidos que han de utilizarse en la composición de la fase
móvil. La fase móvil no debe ser un líquido en el cual sea totalmente insoluble
la muestra a analizar. Por tanto, el procedimiento sistemático de selección
debe empezar por la determinación de la solubilidad de la muestra en varios
de los disolventes normalmente usados. Esta evaluación de las solubilidades
es esencial para evitar una fase móvil que pueda precipitar en el instrumento
toda la muestra o parte de ella. La evaluación no resulta completa si no se
ensaya también la estabilidad de la muestra en el disolvente cromatográfico.
Resulta mucho menos costoso observar la posible inestabilidad de estas
soluciones iniciales de la muestra en los viales que conocer el problema
posteriormente a través de columnas estropeadas o cromatografías
inestables.
Influencia del detector
● La elección de la fase móvil también
depende de algunas consideraciones
relacionadas con el detector, como el
intervalo espectral de transparencia del
disolvente y la longitud de onda de
máxima adsorción del compuesto. Si el
disolvente que inicialmente se pensaba
utilizar enmascara la absorción del
compuesto, se debe emplear otro
disolvente.
 Efecto del aumento de la
 
  temperatura en la columna
● Disminuye la viscosidad de la fase
móvil y lograr así presiones menores y
aumento de la transferencia de masa.
● Aumenta la solubilidad de la muestra
en la fase enlazada y obtener así una
mayor eficacia global de equipo,
permitiendo la introducción de una
cantidad de muestra adecuada
● Aumenta la velocidad de migración
iónica en los sistemas de intercambio
iónico, con lo que se obtiene una
mayor frecuencia de intercambio por
unidad de longitud de la columna y
por lo tanto un mayor intercambio.
Diagrama básico de un cromatógrafo liquido de alto
rendimiento

● Un cromatógrafo líquido de alto rendimiento opera generalmente con cinco

instrumentos: reservorio, bomba, inyector, horno (columna), detector y
registrador
Revisión del estado del arte respecto a los
análisis identificados :
1 APLICACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA DE ALTA EFICACIA AL ESTUDIO DE LOS
ÁCIDOS ORGÁNICOS EN VINOS GALLEGOS CON DENOMINACIÓN DE ORIGEN.

2 AMINOÁCIDOS DE HARINA Y AISLADO PROTEICO DE QUINUA (CHENOPODIUM

QUINOA) DE LA VARIEDAD BLANCA Y ROSADA DE JUNÍN

3 DETERMINACIÓN DE TRIPTÓFANO EN HARINA DE PESCADO

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN
 Planificación del
análisis
MUEST
RAS
MACERADO HARINA
DE SUERO DE
HARINA
DE
HARINA
DE
DE LECHE Y GERMINA GERMINA PESCAD
GENGIBRE DO DE DO DE O
TARWI QUINUA
EQUIPOS Cromatógrafo de Cromatógrafo Cromatógrafo Cromatógrafo
líquidos de alta HPLC Agilent HPLC Agilent líquido – loop
eficacia 1200 con 1200 con 50ul
SPECTRA- desgasificador desgasificador
PHYSICS modelo en línea en línea
SP8750 XR
 Descripción de la preparación de
la muestra.
MUESTR MACERADO DE HARINA DE HARINA DE HARINA DE
AS SUERO DE GERMINAD GERMINADO PESCADO
LECHE Y O DE TARWI DE QUINUA
GENGIBRE

PREPAR • Alcalinizado (pH 10) • Hidrolisis acida • Hidrolisis acida • Hidrolisis

• Elucion con Na Cl con HCl 6 N con HCl 6 N acida
ACION • Acidificacion con • Calentamiento • Calentamiento Calentamient
DE LA H2SO4 por 24 horas a por 24 horas a o
MUESTR 100ºC 100ºC • Hidrolisis
A • Hidrolisis • Hidrolisis alcalina
alcalina con alcalina con • Enfriamiento
hidróxido de hidróxido de • Centrifugacio
bario 1M bario 1M n Filtrado
• Enfriamiento • Enfriamiento
• Centrifugacion • Centrifugacion
4000 rpm 4000 rpm
• Filtrado • Filtrado
 Condiciones analíticas
MUESTR MACERADO DE HARINA DE HARINA DE HARINA DE
AS SUERO DE GERMINAD GERMINADO PESCADO
LECHE Y O DE TARWI DE QUINUA
GENGIBRE
CONDICI Se utilizó un cromatógrafo
de líquidos de alta eficacia
Fase móvil: (A)
buffer
Fase móvil: (A) buffer
acetato de sodio 25
DETECTOR:
Fluorómetro Modelo
ONES SPECTRA-PHYSICS acetato de sodio 25 mM (pH=6) y (B) 240
modelo SP8750 XR, para mM (pH=6) y (B) acetonitrilo, Flujo: 1ml/min
aplicar la cromatografía acetonitrilo, Detector: UV 280 nm. Temperatura del
liquida del vino de jengibre y Detector: UV 280 nm. Flujo de 0,9 mL/min horno: 50°C
suero de leche, para la Flujo de 0,9 mL/min
visualización de los
resultados, se tiene
acoplado un detector de UV
Descripción del desarrollo de la técnic
analítica
 CROMATOGRAFIA LIQUIDA
MATERIALES MUESTRAS

- Pipetas graduadas 5ml. 10 ml.

- 100ml de macerado de
- Beakers de 100ml
jengibre y suero de leche
- Muestras de vino de 5
marcas más
REACTIVOS

- Resina Dowex 2 de intercambio iónico.

- Hidróxido sódico IN
- Ácido Sulfúrico concentrado.
EQUIPOS A UTILIZAR
- Cloruro sódico al 5% (p/v)

- Cromatógrafo de líquidos de alta eficacia SPECTRA-PHYSICS

modelo SP8750 XR –BOMBA MODELO SP8700 XR
- Detector UV
- Columna fase reversa SPHERISORB C-8
 CROMATOGRAFIA LIQUIDA EN UN
FERMENTADO DE JENGIBRE Y SUERO
DE LECHE
2) PREPARACION DE LA MUESTRA
1) PREPARACION DE PATRONES
Se alcalinizan 20ml de vino de
Se toman 20ml de cada una de las jengibre y suero de leche, hasta
soluciones patrón de los ácidos y se diluyen pH 10 y se hace pasar a través
a 50ml con cloruro sódico al 5% (p/v). de las resinas
Luego se prepara una solución mezcla
patrón con los mismos parámetros
anteriores
Los ácidos retenidos se eluyen con
40ml de cloruro sódico al 5% (p/v)

Soluciones patrón de los ácidos orgánicos en las siguientes

concentraciones:
- Tartárico 4g/l
- Málico 2g/l el eluato se acidifica a pH 3.0 con
- Cítrico g/l ácido sulfúrico y se enrasa a 50ml
- Láctico 1g/l con más solución de cloruro sódico
- Acético 1g/l
- Succínico 1g/l
 CROMATOGRAFIA LIQUIDA EN UN
FERMENTADO DE JENGIBRE Y SUERO
DE LECHE
CONDICIONES ANALÍTICAS Fase móvil:
Agua de grado HPLC llevada a pH
2,2 con ácido sulfúrico.
Cromatógrafo de líquidos de alta eficacia : Gas: Helio
SPECTRA PHYSICS modelo SP8750 XR
Bucle de inyección: 5ul
DETECTOR UV/VIS SPECTRA PHYSICS
Columna : Fase reversa – C8 Con tamaño de
partícula de 5 um y 250x4.6mm CONDICIONES DE TRABAJO

La elución de los componentes ácidos de la

muestra a través de la columna de separación
cromatografica se realiza en régimen isocrático,
con un flujo de fase móvil de 1 ml/min y una
presión de aproximadamente 100bar. La
detección de los picos se realiza con UV a
214nm.
 CROMATOGRAFIA LIQUIDA EN UN
FERMENTADO DE JENGIBRE Y SUERO DE
LECHE
TRATAMIENTO DE LOS DATOS

El cromatógrafo presenta un Software

incluido, que presentan los datos
automáticamente, estos serán establecidos
en diagramas 3D para visualizar la
diferencia con respecto a otros vinos y sus
contenidos de ácido.
 HPLC aplicados a caracterización de
harinas Muestras
HCl 6 N
Hidrolisis acida
24 horas x 100ºC
Calentamiento
Manto de
hidróxido de Hidrolisis alcalina calentamiento
bario 1M
Hasta temperatura
Enfriamiento ambiente

Centrifugación 15 min a 4000 rpm

1 mL de buffer Filtración 0.45 porosidad

borato 1 M (pH=9)
que contiene
0,02% de acida de
Inyecto 20 uL de
sodio tubo eppendorf muestra

Cromatógrafo HPLC
Gracia
s!