BIOQUIMICA

TEMA 5
 Cinética Enzimática

 Ecuación de Michaelis
Menten y gráfico L-B

 Factores que afectan la

actividad enzimática

Prof. Cecilia Nieto Aravena

Enero 2021
Velocidad de reacción enzimática
Notaciones
de
velocidad

Cambio de la concentración del Sustrato o

concentración del Producto en función al
tiempo

Unidades de velocidad: [ ] / t
M/min, milimoles/lt.seg, etc
 Cinética Enzimática

• Factores que afectan la Velocidad de Reacción

Enzimática
• [S] (Cinética Michaeliana)
•[ E ]
• pH
• Temperatura
• Concentración de Cofactor ( Si se requiere)
• Presencia de Inhibidores de reacción Enzimática
Cinética Michaeliana
 Teoría de acción y cinética Enzimática

Aportes :
1. Definición de la trayectoria de reacción
enzimática
2. Identificación del comportamiento hiperbólico
rectangular y definición de Km
3. Definición de la ecuación de Michaelis y
Menten para cálculo de velocidades de
reacción
CINETICA ENZIMATICA
1. Definición de la trayectoria de reacción
enzimática

K1 K2
E + S E-S E + P

K -1
K-2
 Efecto de la Concentración de Sustrato
Cinética Michaeliana

En una reacción enzimática donde va a aumentando la [S]

manteniéndose los otros factores óptimos y constantes :

• Comportamiento hiperbólico rectangular :

• Hipérbole que tiene como límites los parámetros cinéticos
de Vm y Km
Gráfica de Michaelis_Menten Variación de la
actividad enzimática con la concentración de
sustrato
 Gráfica de Michaelis_Menten
Variación de la actividad enzimática con la concentración de sustrato:

Nivel de saturación de la enzima

Velocidad de reacción

Cinética Orden Cero

Mezcla de
Cinéticas
n
de

de !er orden
Or

y Orden cero
er
r im
eP
ad
ti c
é
Cin

Concentración de sustrato
Comportamiento hiperbólico rectangular
Identificación de 3 zonas diferenciadas en su
cinética

Orden
Cero

Primer
orden
 Orden de reacción
Referido a como la [S] influye sobre la velocidad de reacción

Primer Orden Orden Cero

S P S P

V1er Orden = K1er orden . [S] Vorden cero = K orden cero

- d [S] = K . [S] - d [S] = K

dt dt

V V

[S] [S]
 La Constante de Michaelis

Km es la concentración de sustrato que rinde la

Mitad de la VelocidadMáxima

Km es un criterio de afinidad de una enzima

por un sustrato en particular

Km es un patrón de comparación entre enzimas

Valores de Km se expresan en Molaridad

en un rango entre 1 x10-12M a 0.1 M
Valores de Km para enzimas glicolíticas

ENZIMA FUENTE [SUSTRATO] Km (uM)

G-6P isomerasa Cerebro G-6P 210

Músculo G-6P 700

Aldolasa Cerebro F1,6BiP 12

Músculo F1,6BiP 100

G-3P Cerebro G-3P 44

deshidrogenasa Músculo G-3P 70
3. La ecuación de Michaelis Menten

V = Vm . [ S ]
Km + [ S ]

Donde :
V = Velocidad de una reacción enzimática
Vm = Velocidad máxima
Km = Constante de Michaelis
[ S] = Concentración de Sustrato
 Gráfica de Michaelis-Menten
Relaciones matemáticas entre Km y [S]:
Velocidad de reacción Vm

as
ic
nét Cinética de Orden Cero
c i
de
la
ezc
M
n
de
Or
er
r im
eP
ad
ti c
é
Cin

Km [S] mM
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
 Relaciones matemáticas entre Km y [S]

Cuando disponemos de [S] y Km ,

COMPARAR, pueden suceder tres casos:

1) la [S] es muy pequeña con respecto al Km

(≤ 0.01)……cinética de primer orden

2) la [S] es bastante mayor con respecto al Km

(≥ 100Km) ……cinética de orden cero

3) No cumple ninguno de estos criterios………

mezcla de cinéticas
 Relaciones matemáticas entre Km y [S]
1) Cuando la [S] es < 0.01 KM
La Velocidad de la reacción enzimática
es de primer orden

En la Ecuación de M-M V = Vm . [ S ]
Km + [ S ]

V Vm . [ S ] K. [S]
= =
Km

Ecuación de M-M en cinética

de primer orden
 Relaciones matemáticas entre Km y [S]
2) Cuando la [S] es > 100 KM
La Velocidad de la reacción enzimática
es de orden cero

En la Ecuación de M-M V = Vm . [ S ]
Km + [ S ]

V = Vm . [ S ]
[S]

Expresión de la Ec. M-M en - d [S] = Vm

cinética de primer orden
dt
Relaciones matemáticas entre Km y [S]

2) Cuando la [S] es > 100 KM

En estos casos :
La Velocidad de la reacción enzimática
Es de orden cero
La velocidad de reacción a esta concentración
De sustrato es la Velocidad máxima
 a) Se ha alcanzado la Vm F
b) La reacción es proporcional a la [S] V
c) La cinética es de primer orden V
d) Hay mezcla de cinéticas F
e) Es cinética de orden cero F

1 x 10-6 <= (0.01) (1 x 10-3)

1 x 10-6 < = 1 x 10 -5?
Si
…
 a) L a velocidad es la Vm F
b) La v es directamente proporcional a
la [S] V
c) La v es de primer orden V
d) La v de reacción exhibe mezcla de
cinéticas F
e) La cinética es de orden cero F

1 x10-6 mM < 0.01(1x 10-3)?

1 x 10-6 < 1 x 10 -5?
Si
Entonces : Cinética es de primer orden
 Tema 5 - Pregunta aplicativa 1

Se determina la velocidad de reacción para una enzima

frente a dos sustratos diferentes , observe la tabla y
marque lo correcto

sustrato Km Concentración [S]

en el medio
Sustrato 1 4x10-6 M 4x10-2 M
Sustrato 2 2x10-3 M 2x10-6M

(a) Con ambos sustratos la enzima está trabajando a Vmax.

(b) Sólo con el sustrato 1 la enzima está trabajando a Vmax.
(c) Si la concentración de sustrato 2 se incrementa en 1000
veces la enzima trabaja a Vmax.
(d) La enzima presenta mayor afinidad por el sustrato 2, en
comparación con el sustrato 1.
 Tema 5 - Pregunta aplicativa 2
Observe la siguiente tabla de datos obtenida en ensayos con
la hexoquinasa y responda las siguientes preguntas :

Sustrato Km en Km en
Cerebro Músculo Concentración
(Km1) (Km 2)

Glucosa 5 x 10 -9 M
5 x 10 -7 M 2 x 10 -3

Galactosa 7 x 10 -5 M 6 x 10 - 1 M 0.06 M
 Tema 5 - Pregunta aplicativa N° 2 (cont)
Responda como Verdadero (V) o Falso las siguientes afirmaciones

1. La enzima muestra mayor afinidad por el sustrato

glucosa , tanto en cerebro como en músculos

2. La enzima muestra mayor afinidad por el sustrato

galactosa , tanto en cerebro como en músculos

3. A la concentración dada de glucosa, en el cerebro, se

observa una cinética directamente proporcional a la [S)

4. A la concentración de galactosa dada, en el cerebro ya

se ha alcanzado la velocidad máxima
Transformaciones matemáticas a la
ecuación de Michaelis Menten
 GRAFICO DE LINEWEAVER Y BURCK

Llamado también Eje X 1/ [S]

Gráfico de dobles recíprocas Eje Y 1/ V
Gráfico de las dobles inversas
Gráfico L-B

Su deducción se inicia tomando la inversa de la

ecuación de M-M

V = Vm [S] 1 = Km + [S]
Km + [S] V Vm . [S] Vm. [S]
Ec. M-M Inversa de Ec. M-M
GRAFICO DE LINEWEAVER Y BURCK
Arreglando
… 1 = Km + [S]
V Vm . [S] Vm. [S]

Simplificand
o… 1 = Km + [S]
V Vm . [S] Vm. [S]
Arreglando para que la ecuación sea expresión de
línea recta de la forma y = m . x + b de la forma :
…
1 = Km . 1 +
1 .V Vm [S]
Vm

Y = m . x + b
 Eje X Eje Y

[S] Vel i/[S] 1/V

mM nM/lt
1 2,5

2 4,0

5 6,3
 GRAFICO DE LINEWEAVER Y BURCK

1/V

. . m = Km/Vm

. .
1/Vm

1/[S]

- 1/ Km
1 = Km. 1 + 1
V Vm [S] Vm

Y = m . x + b
Para Y =0
X = -b/m
X = -1/Vm
Km/Vm
X = -1/Km
Grafico Linewaver y Burck (L-B) o Gráfico de
Dobles recíprocas
 Tema 5 - Pregunta aplicativa 3

En un gráfico de L-B el intercepto con el eje X es

-2 mM-1 y el intercepto con el eje Y es 4
lt.s.mmol-1

Cuál es el valor de las

constantes cinéticas?

Km………….
Vm………….

No olvides poner las unidades

Factores que afectan la reacción enzimática

1. Concentración de Sustrato
2. Concentración de enzima
3. Temperatura de la reacción
4. pH del medio de reacción
5. Concentración de cofactor (cuando es aplicable)
6. Presencia de Inhibidores de reacción enzimática
 Efecto [E] sobre Velocidad de reacción enzimática

La velocidad de reacción es proporcional a la [E],

El efecto es linear siempre que se midan velocidades

inciiales verdaderas en un período corto de tiempo

Las [E] a nivel intracelular oscilan entre 1 x 10-12 a 1x

10 -7 M
Efecto de [ ENZIMA]
 Efecto de [E] sobre velocidad de reacción a una [S] fija

[E3] > [E2] > [E1]

> [E4]
[E3]

[E2]

[E1]

to t1 t2

Una [E] > E3 no tendrá respuesta linear no para t1

Efecto pH sobre Velocidad de reacción enzimática

El pH afecta por que los centros activos están

formados por enlaces ionizables que deben
encontrarse en forma iónica adecuada para la
interacción

El efecto del pH puede verse en curvas de pH vs

Velocidad donde se expresa el pH óptimo

El pH óptimo es aquel pH en que la enzima muestra

la mayor actividad , o alcanza la velocidad máxima
 Vm Vm
Disminución de pH

Formación de especies iónicas inadcuadas

Desnaturalización enzimática
 EFECTO DE LA TEMPERATURA

La velocidad de reacción se incrementa, a medida que

aumenta la temperatura.

Existe una temperatura crítica asociada a una caída de la

velocidad (50o a 60oC).

La temperatura afecta la estabilidad de la enzima y los

diversos parámetros cinéticos: Km, Vmax, Ki, etc.
 EFECTO DE LA TEMPERATURA

 Si la enzima absorbe excesiva energía se rompe la

estructura terciaria y la enzima se desnaturaliza.

 La temperatura óptima es aquella en que la enzima

muestra una actividad constante en un periodo de tiempo
igual al del ensayo.
Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reacción

tº óptima
Efecto de [ COFACTOR]

Dosis diarias recomendadas según

sexo y grupo etáreo

Concentración de cofactor
PRESENCIA DE INHIBIDORES
DE REACCION ENZIMATICA
 Inhibidor Enzimático

E + S E-S E + P
+ I
+ I

E-I E-S-I
 Tipos de Inhibición Enzimática

Según Reversibilidad del efecto inhibitorio

- Reversible
- Irreversible

Según mecanismo de acción del inhibidor

Inhibición Competitiva
Inhibición No competitiva
Inhibición Acompetitiva
 Según reversibilidad del proceso inhibitorio

E + S E-S E + P

+I +I

E-I E-S-I

Dos tipos Disociable : Inhibición reversible

de interacción
No Disociable : Inhibición irreversible
 Inhibición
competitiva

E + S E-S E + P
+
I Ki = [E] [I]
[E-I]
Ki

E-I
 Inhibición
sustrato
competitiva
inhibidor

Enzima
Enzima

Sin inhibidor
con inhibidor

Los inhibidores competitivos son sustancias, muchas veces similares

químicamente a los sustratos, que se unen al centro activo impidiendo con ello
que se una el sustrato. La intensidad del efecto inhibitorio depende de la
concentración del inhibidor.
En un gráfico LB aumenta
la pendiente
 sustrato
Inhibición no
competitiva

No se produce la
catálisis

Enzima Enzima

Sin inhibidor Con inhibidor

inhibidor

Los inhibidores no competitivos son sustancias que se unen a la enzima en lugares

diferentes al centro activo alterando la formación de la molécula de tal manera que,
aunque se forme un complejo enzima-sustrato, la catálisis se ve afectada. La
intensidad del efecto , depende la concentración de inhibidor.
En un gráfico LB aumenta
la pendiente
• Inhibición Incompetitiva o Acompetitiva
 Inhibición
Acompetitiva

Kii =I [E-S] [I] I

[ESI] I

• El inhibidor acompetitivo enlaza sólo al

complejo [E-S] ya formado
En que medida es afectada una
constante cinética por la presencia de
un Inhibidor????

De acuerdo a lo que diga el factor de

corrección :
Fc = (1 + [I])
Ki
 Ejemplo de inhibidor acompetitivo :
Compuestos organofosforados

Primer neurotransmisor identificado

por Henry Hallett  y Otto Loewi-
Premio Nobel por ello en 1936.

Responsable , entre otros,

de procesos de contracción y
expansión.

Es como puente entre el cerebro y

nuestros movimientos
EN
RESUMEN
 Inhibición No Competitiva
Sin Inhibir

1 = Km 1 + 1
V Vm [S] Vm

Inhibición Incompetitiva
Inhibición Competitiva
 Tema 5 -Pregunta aplicativa 4
Enzima 1 Vmax = 400 Km = 8.90x 10-5M
 
Enzima 1 Vmax aparente= Km aparente =
con inhibidor 400 5.3x10-4M
Marque lo correcto

a) Se trata de un inhibidor competitivo.

(b) A una [S] = 0.08M la Vo para la reacción con y sin inhibidor es Vmax.
(c) A una [S] = 0.00053 M la enzima con inhibidor tendrá una Vo= 200.
(d) La enzima 1 necesita una concentración de sustrato mayor para alcanzar
la mitad de la velocidad máxima, cuando está presente el inhibidor.
(e)A una [S] = 0.000089M la enzima trabaja a una Vo = Km.
 Tema 5 – Pregunta aplicativa 5

Investigue un ejemplo de cada inhibidor

revisado
Especifique Reacción – Inhibidor -
mecanismo
 Tema 5- Pregunta Aplicativa 6

El Km de la Hexoquinasa con el sustrato glucosa es de 8x10-6M) y

con el sustrato fructuosa es 2x10-3M).
Si la concentración de glucosa y fructuosa son 8x10-2 M y 2x10-6M
complete con V ó F las siguientes afirmaciones:

( ) Con glucosa la enzima está trabajando a Vmax.

( ) Con fructuosa la enzima está trabajando a Vmax.
( ) Si la concentración de glucosa se incrementa en 1000 veces la
enzima trabaja a Vmax.
( ) Si la concentración de fructuosa se incrementa en 1000 veces
la enzima trabaja a la mitad de su Vmax.
( ) A una concentración de glucosa de 8x 10-1M y en presencia
de un inhibidor competitivo la enzima trabajaría a Vmax.
 Enzimas Alostéricas- La Regulación metabólica

El metabolismo está sujeto a mecanismos de control

metabólico
La célula logra el equilibrio y control metabólico a través
de dos mecanismos principales :

Control enzimático

Control hormonal
 Control Enzimático

El control enzimático se lleva a cabo a través

de varios procesos:
- Activación proteolítica ( zimógenos)
- Enzimas alostéricas
- Modificación covalente
- Control Transcripcional
 Francois Jacob Jean Pierre Changeux Jacques-Lucien Monod 
Teoría alostérica
Premio Nobel 1965
• Estudios que permitieron comprender el mecanismo de
participación de las enzimas en la regulación del metabolismo
• Denominadas enzimas reguladoras o alostéricas, se demostró
que son una herramienta de la célula para controlar sus
procesos o la cantidad de metabolito a producir y cuando
producir
• No son enzimas michaelianas ,muestran una cinética sigmoidal
y no hiperbólica rectangular como las enzimas michaelianas
 Teoría alostérica
• Sustentada por Monod , Jacob y Changeux.

• Explica el comportamiento sigmoidal y la capacidad de

regulación de la actividad enzimática de las enzimas
alostéricas
 Principios de la Teoría Alostérica
Alosterismo
1) Todas las enzimas alostéricas son
oligoméricas
 2) Cada oligómero dispone de un centro activo y un sitio de
unión con modulador

iv o
o a ct
e ntr
C

ti vo
a c
ro
ent
C Sitio de unión con modulador

CONFORMACION CONFORMACION
TENSA RELAJADA
(INACTIVA (ACTIVA)
 Los moduladores son compuestos químicos que al
unirse a la enzima pueden aumentar o disminuir la
actividad catalítica de la enzima /( Moduladores
positivos y Moduladores negativos)
- +
Centro activo
II
S

II II

S
I

Conformación Inactiva Conformación Activa

3) Cada enzima alostérica puede estar en dos estados

conformacionales : Inactivo o Activo
4) En principio los dos estados conformacionales están en
equilibrio

4) La presencia de uno u otro tipo de modulador hace que

el equilibrio se desplace a la izquierda o a la derecha
5) La existencia de modulador positivo hace que se
estabilice la conformación activa y por tanto la
velocidad sube abruptamente
 CINETICA DE ENZIMAS ALOSTERICAS

Cinética
Sigmoidal
Vm

_
Vm/2 +

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Km1 Km2 Km3
 La acción de las enzimas
reguladoras

• Las enzimas alostéricas participan en la regulación

metabólica mediante un mecanismo denominado Inhibición
por el producto o Inhibición por retroalimentación

• Permite a la célula activar una vía metabólica cuando

requiere un determinado metabolito y sintetizarlo en la
cantidad que necesita
• La regulación metabólica puede darse en vía abierta lineal o
en via bifurcada
 Inhibición Feedback en via abierta

E1 E2 E3 E4
A B C D E

Heterotrópica
Otro compuesto

+
Homotrópica +
E1
A B C D E
Inhibición Feedback en vía bifurcada

E4 E5
D E F
E3

E1 E2
A B C
E7 E8
E6 G H I
 Tema 5 Pregunta aplicativa 7

Complete si es verdadero o falso :

( ) Las enzimas alostéricas modifican su Vo por la presencia
de efectores.
( ) La Vo para las enzimas alostéricas no depende de la [S].
( ) La Vo en las enzimas alostéricas es máxima si la
[S]=100Km.
( ) Las enzimas alostéricas se activan todas al fosforilarse.
( ) Las enzimas alostéricas requieren activación para participar
en regulación de vías metabólicas