ASIGNATURA

: BASES MOLECULARES Y CELULARES DE LA MEDICINA III

CICLO
: III
SEMESTRE ACADEMICO : 2021-0
 UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE
CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE
MEDICINA HUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta”

ACREDITADA POR SINEACE

RE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE POR RIEV

PRÁCTICA N°11:
METABOLISMO DE LA BILIRRUBINA

DOCENTE

Mg. COILA DE LA CRUZ, Hilda Victoria.

LOGRO A MEDIR:

Conocer el metabolismo de la Bilirrubina y el Ciclo Entero-hepático-Renal

del Urobilinógeno. Conocer a las variables que generan la Ictericia.
MARCO TEÓRICO:
La bilirrubina es un pigmento amarillo, que se produce en el ser humano a partir del Núcleo HEM (que
es una Protoporfirina Tipo IX ó Tetrapirrol macro cíclico, molécula que tiene insertado un átomo de
Hierro).Sobre este núcleo HEM actúa la enzima Oxigenasa Heme de los microsomas. Esta Oxigenasa
rompe el enlace alfa meteno del anillo tetrapirrólico y se abre la molécula, convirtiéndose en el
pigmento verde Biliverdina, el cual es subsecuentemente hidrogenado y forma Bilirrubina .Esta
reducción la realiza la enzima citosólica Biliverdina reductasa que es una enzima NADPH
dependiente. Por cada mol de HEME catabolizado por esta ruta se produce un mol de bilirrubina, de
CO2 y de ión férrico.
SISTEMA RETÍCULO ENDOTELIAL
GLOBULOS (120 días) BAZO
ROJOS
(Macrófagos)
GLOBINA AA proteínas

Fe ++ Fe+++
transferrina
Hemo Biliverdina
oxidasa Reductasa BILIRRUBINA
HEMOGLOBINA HEMO BILIVERDINA
no conjugada
No es soluble en agua
CO
Después de su producción en los tejidos periféricos, la bilirrubina es transportada al hígado
asociada a la albúmina .La Bilirrubina es rápidamente captada por los hepatocitos, se transporta y
se conjuga al ácido glucurónico (UDP – Glucoronil transferasa) para producir mono y
diglucuronato de bilirrubina los cuales se excretan en la bilis. Y después de ser excretados hacia el
intestino delgado. En el tracto intestinal los glucorónidos de bilirrubina se hidrolizan a la forma no
conjugada por el pH al alcalino del intestino delgado, y por la acción catalítica de la
betaglucuronidasa del hígado, células epiteliales intestinales y las bacterias. La bilirrubina no
conjugada es posteriormente reducida por la flora bacteriana anaeróbica intestinal para formar un
grupo de tres tetrapirroles incoloros colectivamente llamados Urobilinógenos que luego se
reducen y forman tres productos: estercobilinógeno, mesobilinógeno y Urobilinógeno.

10% Riñón
UROBILINA

Albúmina
UDP
20% 90% Circulación
Glucoronil
Transferasa Enterohepática
BILIRRUBINA BILIRRUBINA URIBILINÓGENO
no conjugada conjugada
Ingresan por difusión facilitada al 80%
soluble en
Hepatócito Heces
agua
ESTERCOBILINA
Existen enfermedades congénitas y enfermedades adquiridas que afectan a uno ó más de los
pasos involucrados en la producción, captación, depósito, metabolismo y excreción de la bilirrubina
La hiperbilirrubinemia es frecuentemente el resultado de estos trastornos y causa la Ictericia cuando
excede de 1 mg% de bilirrubina en la sangre. Esta bilirrubinemia puede ser a predominio No
conjugado (Indirecta) o Conjugado (Directa) dependiendo del tipo de desorden.

Dentro de las causas de Ictericia

Hemolítica tenemos:
Anemias hemolíticas, ictericia
fisiológica neonatal (Inmadurez
hepática para captación,
conjugación y secreción de la
bilirrubina), Síndrome de Cligeer-
Najar (Alteración de la
conjugación de bilirrubina),
Enfermedad de Gilbert,
Hiperbilirrubinemia tóxica
(Agentes farmacológicos)
MATERIAL DIDÁCTICO:
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
EXPERIMENTO A: DOSAJE DE BILIRRUBINA TOTAL SÉRICA
Fundamentos del Método:
La bilirrubina indirecta, unida a la
albúmina, es liberada por un tensioactivo.
La bilirrubina total (conjugada y libre)
reacciona con la sal de
diclorofenildiazonio (DPD) formando un
azocompuesto de color rojo en solución
ácida.
PROCEDIMIENTO:
En 4 tubos marcados colocar:

Bc C BD D

1
2 3 4 5
Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (menor a 25° C) .Leer en el espectrofotómetro
a 546 nm. Llevando a cero el espectrofotómetro con el BR
NOTA: Procesar un BR por cada serie de determinaciones mezclando 0.4 ml. De reactivo B + 40 uL
de agua destilada + 0.1 ml. De reactivo de Trabajo. Se pueden aumentar proporcionalmente los
volúmenes.

7
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIÓN FINAL
6 El color de la reacción es estable durante 30 min. Por lo
que la absorbancia debe ser leída dentro de ese tiempo.
CALCULO DE RESULTADOS:
Bilirrubina Total (mg/l) = (D - BD ) x fc

Concentración de Bilirrubina Total en el calibrador = 48 mg/l

Fc = conc./ abs. STD
VALORES DE REFERENCIA:
Bilirrubina total en suero o plasma: (abs D – abs BD ) x conc.
BT =
- Adultos: hasta 10 mg/l ( abs C – abs Bc )
- Recién nacidos:
Nacidos a término Prematuros
Sangre de cordón < 20 mg/l < 20 mg/l
hasta las 24 h 14 - 87 mg/l < 80 mg/l
hasta las 48 h 34 - 115 mg/l < 120 mg/l
del 3º al 5º día 15 - 120 mg/l < 160 mg/l
Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel promedio del adulto al mes del
nacimiento. En los prematuros, los niveles tardan más en alcanzar la normalidad, dependiendo del
grado de inmadurez hepática.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
Realizar los cálculos :
Si se tiene las absorbancias del
Bc = 0.002
C = 0.258
BD = 0.002
D = 0.092
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
EXPERIMENTO B: DOSAJE DE BILIRRUBINA DIRECTA SÉRICA
SIGNIFICACION CLINICA :
PROCEDIMIENTO:
En 4 tubos marcados colocar:

Bc C BD D

2 3 4 5
Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (menor a 25° C)
Leer en el espectrofotómetro a 546 nm. Llevando a cero el espectrofotómetro con el BR
NOTA: Procesar un BR por cada serie de determinaciones mezclando 0.4 ml. De reactivo B +
40 uL de agua destilada + 0.1 ml. De reactivo de Trabajo. Se pueden aumentar
proporcionalmente los volúmenes.

8
7

6 ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIÓN FINAL

La absorbancia debe ser leída a los 10 minutos exactos.
CALCULO DE RESULTADOS:
Bilirrubina Directa (mg/l) = (D - BD ) x fc

Concentración de Bilirrubina Directa en el calibrador = 23.9 mg/l

Realizar los cálculos :

Si se tiene las absorbancias del:
Bc = 0.008
C = 0.135
BD = 0.009
D = 0.029
EXPERIMENTO C:INVESTIGACIÓN
DE UROBILINÓGENO EN ORINA

Fundamento de la prueba de Ehrlich para

la investigación de Urobilinógeno en
orina
(Método Cualitativo).
Esta prueba se basa en la reacción entre el
urobilinógeno y el reactivo de paradimetil
aminobenzaldehido, para rendir un complejo
coloreado rojo cereza.

Reactivo de Ehrlich: Disolver 10 mg de

Paradimetil aminobenzaldehido en una
disolución de 75 ml de agua y 75 ml de HCl
concentrado.
Procedimiento: A 2 ml de orina en un
tubo de prueba, añadirle 0.5 ml del Reactivo
de Ehrlich y mezclar bien. Observar el color
de la mixtura.
Interpretación. Cantidades normales de
Urobilinógeno en la orina no producirán color.
Cantidades aumentadas (patológicas) del pigmento
urobilinógeno producirán un color rojizo cereza
que se observa bien mirando el tubo desde arriba
del tubo (boca del tubo) contra un fondo blanco.
INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN:

1.- Explique la formación de la bilirrubina.

2.- ¿En qué casos se produce una elevación de la bilirrubina total, tanto a
expensas de la bilirrubina directa como de la indirecta?

3.- ¿Cómo se forma el Urobilinógeno y qué importancia tiene?

4.- ¿Qué es la ictericia y como se evalúa?

5.- ¿Cuáles son los métodos conocidos para el dosaje de bilirrubina?

Fuente: Guía de práctica de Bioquímica y Nutrición UPSJB