CUANTIFICACION DE BILIRRUBINA SERICA

I. INTRODUCCION:
Los hematíes tienen una vida media de 120 días, al cabo de la cual son
destruidos en el sistema retículo endotelial. La hemoglobina es liberada y se
separa la globina del hem, éste es convertido en biliverdina y luego en
bilirrubina. Este pigmento insoluble en agua es transportado unido a la
albúmina. La bilirrubina indirecta o no conjugada llega al hepatocito y se
separa de la albúmina, después de un proceso de captación y conjugación
con dos moléculas de ácido glucurónico por la enzima bilirrubina glucuronil
transferasa, se convierte en una forma soluble, denominada bilirrubina directa
o conjugada, que es finalmente excretada con la bilis al intestino por un
proceso de transporte activo; da color a las heces y ultrafiltra el glomérulo.

Cada gramo de hemoglobina degradada origina 35 mg de bilirrubina. La

concentración sanguínea de bilirrubina total es de 1 mg / dl, siendo en su
mayoría bilirrubina indirecta, que no se excreta por orina. La
hiperbilirrubinemia puede ser a predominio de la bilirrubina no conjugada
como en las anemias hemolíticas o en los defectos congénitos de
conjugación, o de la bilirrubina conjugada en las hepatopatías, donde el
defecto limitante es la excreción, o en las enfermedades extrahepáticas
obstructivas.

La manifestación clínica más importante de las hiperbilirrubinemias es la

ictericia, y el origen de esta alteración obedece a causas de origen pre
hepático, hepático y post hepático, que varían con la edad de presentación y
también en cuanto a su gravedad.

La fundamentación del método empleado se basa en que la bilirrubina

reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado produciendo un
pigmento de color rojo-violáceo (azobilirrubina) que se mide a 530 nm. Si bien
la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazorreactivo,
la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia de un desarrollador
acuoso (reactivo A) que posibilite su reacción. De formal tal que, para que
 reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en la
muestra, debe agregarse benzoato de cafeína al medio de reacción.

La finalidad de la presente práctica es determinar la concentración total de las

fracciones de bilirrubina en el suero o plasma de personas normales, por el
método de Malloy Evelyn, que utiliza el diazorreactivo de Erlich.

II. MATERIALES Y REACTIVOS A UTILIZAR:

- Reactivo A: solución acuosa de benzoato de cafeína 0,13 mol/l, tamponada
y estabilizada.
- Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 29 mmol/l y ácido clorhídrico 0.17
mol/l.
- Reactivo C: solución de nitrito de sodio 0.07 mol/l.
- Bilirrubina Estándar.
- Diazorreactivo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar 1 parte de
Reactivo C con 21 partes de Reactivo B. Rotular y fechar.
- Agua destilada
- Micropipetas.
- Tubos de ensayo.
- Gradillas.
- Baño maría.
- Espectrofotómetro.
- Suero.
III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES (Procedimiento)

Armar el siguiente sistema, con tres tubos marcados B (Blanco), D (Directa) y

T (Total), colocar:
COMPONENTES BLANCO DIRECTA TOTAL
Muestra (suero) 100 ul 100 ul 100 ul
Agua Destilada 1.25 ml 1.25 ml -----
Reactivo A ----- ----- 1.25 ml
Reactivo B 100 ul ----- -----
Diazorreactivo ----- 100 ul 100 ul
Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Luego de 5 minutos, leer en
espectrofotómetro a 530 nm, llevando el aparato a cero con agua destilada. Las
lecturas pueden efectuarse entre 4 y 15 minutos, excepto para la bilirrubina
directa que debe leerse a los 5 minutos exactos. Si lee antes, habrá
subvaloración de los resultados por reacción incompleta. Si lee después, habrá
sobrevaloración porque comienza a reaccionar la bilirrubina libre.

Cálculos:
 Bilirrubina Total (mg/l) = (T - B) x f
(0.12-0.05)19.8 = 1.36 mg/dl
 Bilirrubina Directa (mg/l) = (D - B) x f
(0.09-0.05)19.8 = 0.792
 Bilirrubina libre (indirecta) = B. Total – B. Directa.
(0.12-0.09)19.8 = 0.594
El factor debe calcularse con Bilirrubina Estándar: 19.8 mg/dl
Valores Referenciales:
Adultos:
- Directa: hasta 0.2 mg/dl.
- Total: hasta 1 mg/dl.

BLANCO DIRECTO TOTAL

CONCLUSIÓN:
 La bilirrubina directa se encuentra elevada, así mismo la
bilirrubina total
IV. CUESTIONARIO:

1. Haga un esquema del metabolismo de la bilirrubina.

EN EL HÍGADO

+ Ácido Glucurónico

Bilirrubina Directa o
Conjugada

Vesícula Biliar

Bilirrubina Indirecta o no
Conjugada (unida a la
albúmina)
Bilis

Heces Estercobilinógeno

Intervención de
bacterias saprofíticas

Orina
(urobilina)

Urobilinógeno

EN LA SANGRE

Fe 2+
Grupo Hemo

Hb Anillos pirrólicos Biliverdina Bilirrubina Indirecta

Globina

2. ¿Cuáles son las principales causas de hiperbilirrubinemia no

conjugada?

Los niveles aumentados de bilirrubina indirecta pueden indicar:

- Anemia hemolítica
- Eritroblastosis fetal
- Ictericia fisiológica del recién nacido
- Problemas en las transfusiones de sangre
 - Otras anemias
3. ¿Cuáles son las principales causas de hiperbilirrubinemia
conjugada?

- Cirrosis
- Hepatitis
- Obstrucción de vía biliar (colangitis, colelitiasis)
- Tumores de vías biliares
- Deficiencia enzimática
- Ictericia

4. ¿Por qué se denomina bilirrubina directa?

La bilirrubina conjugada o directa se desplaza libremente a través de su

torrente sanguíneo hasta su hígado. La mayor parte de esta bilirrubina
pasa al intestino delgado, pero una cantidad muy pequeña pasa a sus
riñones y es excretada en su orina. Esta bilirrubina también le da a la orina
su color amarillento distintivo.
Su nombre es debido a que esta se puede medir por métodos directos

5. ¿Cuál es el riesgo de aumento de bilirrubina no conjugada en el

recién nacido?

Los niveles altos de bilirrubina que causan ictericia grave pueden provocar
complicaciones importantes si no se tratan.

 ENCEFALOPATÍA BILIRRUBÍNICA AGUDA

La bilirrubina es tóxica para las células del cerebro. Si un bebé tiene ictericia
grave, hay riesgo de que la bilirrubina llegue al cerebro; es una enfermedad
llamada «encefalopatía bilirrubínica aguda». El tratamiento rápido puede
prevenir un daño duradero significativo.

Lo siguiente puede indicar encefalopatía bilirrubínica aguda en un bebé con

ictericia:

 Falta de energía o dificultad para caminar

 Llanto agudo

 Alimentación o succión deficientes

 Arqueo del cuello y del cuerpo hacia atrás

  Fiebre

 Vómitos

 ICTERICIA NUCLEAR

La ictericia nuclear es el síndrome que aparece cuando la encefalopatía

bilirrubínica aguda provoca daño permanente en el cerebro. La ictericia nuclear
puede provocar lo siguiente:

 Movimientos involuntarios y descontrolados (parálisis cerebral atetoide)

 Mirada hacia arriba permanente

 Pérdida de la audición

 Desarrollo inadecuado del esmalte dental