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BILIRRUBINA

USO DEL PRODUCTO De no ser posible, realizarlo dentro de las 48 horas conservando
Para la determinacin de Bilirrubina Directa y Total en Suero o la muestra en el refrigerador.
Plasma. Mtodo Color Diazo-Reaccin. Sustancias nterferentes
Ligera a moderada hemlisis causa interterencia.
SIGNIFICACION CLINICA Manipulacin y descarte
Las causas ms comunes del aumento de la bilirrubina directa Las muestras de pacientes deben manipularse considerndolas
son las enfermedades hepatocelulares y de los conductos bilia- potencialmente infecciosas, al igual que el material descartable
res. El aumento de la bilirrubina indirecta, puede indicar ; y los utilizados en el ensayo, que hayan estado en contacto con
1)Un aumento de la produccin (hemlisis ) las mismas. Un procedimiento aconsejado para descartarlos es
2)Disminucin en el transporte (anticuerpos y medicamentos) el siguiente: autoclavado a 121C durante una hora y el trata-
3)Defecto en la captacin ( defecto o bloqueo de los receptores ) miento de los liquidas residuales con hipoclorito de sodio duran-
4)Defecto en la conjugacin (enfermedad de Gilbert , te una hora a una concentracin final del 5%.
entre otras )
ENSAYO
FUNDAMENTO DEL MTODO Bilirrubina en suero o plasma
Se basa en la produccin de azopigmento rojo en medio neu- Procedimiento: En tres tubos rotulados colocar: (NOTA 1)
tro, por reaccin directa de la bilirrubina conjugada con el
cido sulfanilico diazotado con nitrilo. Bilirrubina
Para la reaccin de la bilirrubina no conjugada (indirecta) es
B Directa Total
necesario el agregado de un acelerador que aumente la
solubilidad del pigmento en medio acuoso. Muestra 200 l 200 l 200 l
H2O dest. 2,5ml. 2,5ml. -
REACTIVOS PROVISTOS
Acelerador: solucin acuosa de cafena: 257 mmol/I, benzoato Acelerador - - 2,5ml.
de sodio: 510 mmol/I, acetato de sodo: 860 mmol/I. Sulfanlico 0,2ml. - -
Sulfanlico: cido sulfanlco: 13 mmol/I en HCI: 0,18 mmol/I.
Nitrito: nitrito de sodio: 72 mmol/l en solucin acuosa. Rvo. Diazo - 0,2ml. 0,2ml.
Reactivo Diazo: Se prepara mezclando 20 partes del reactivo Mezclar cada tubo por inversin inmediatamente despus
Sulfanilico y una parte del reactivo Nitrito. (Ej: 1 ml y una gota del agregado del reactivo Diazo. Reposar a temp. ambiente.
50). Estable 15 das a (2-8C) A los 5 minutos exactos leer Bilirnubina Directa.
Estndar: Vial conteniendo 500 g de bilirrubina (provisto se- Entre 5-15 minutos leer Bilrrubina total. Espectrofotmetro a
paradamente) y frasco con Solucin Disolvente. 530 nm o fotocolormetro a 520-550 nm llevado a cero con
agua destilada.
REACTIVOS Y MATERIAL AUXILIAR NO PROVISTOS
-Bao Maria de 37C
-Timmer CALCULOS
-Pipetas y micropipetas Previamente corregir las lecturas de las muestras T y D,
-Tubos y Cubetas de Vidrio restndoles el Blanco.
-Fotmetro o Espectrofotmetro Bilirrubina Total mg/l = lect. corregida x fct.
Conservacin de los Reactivos provistos Bilirrubina Directa mg/I = ect. corregida x fct.
Todos los reactivos deben conservarse a temperatura ambiente Bilirrubina indirecta mg/l = Total - Directa
y protegidos de la luz. La estabilidad alcanza la fecha de venci-
miento indicada en la caja. CURVA DE CALIBRACION.
El Reactivo Diazo debe prepararse en cantidades suficientes para Factor colorimetro
el trabajo diario. Reconstitucin del Estndar de bilirrubina
Precaucines y advertencias sobre el uso de los Reactivos (PROTEGER SIEMPRE DE LA LUZ)
Todos los reactivos deben conservarse a temperatura (5-25 C) Agregar en el vial 5 ml exactamente medidos de Solucin
y protegidos de la luz. La estabilidad alcanza la fecha de venci- Disolvente. Dejar reposar a temperatura ambiente unos 10
miento indicada en la caja. minutos. Agitar otros 5 minutos hasta disolucin total.
Indicios de inestabilidad o deterioro La concentracin resultante es de: bilirrubina 100 mg/l.
Cambio de color o presencia de sedimentos es indice de Se recomienda su utilizacin dentro de la hora de preparado
deterioro. para obtener mxima precisin en el clculo del lactar. La esta-
bilidad de la solucin mantenida en el congelador es de por lo
MUESTRA menos 48 horas.
Suero o plasma recogido con heparina. Procedimiento: En tubos rotulados colocar:
Condiciones de conservacin de las muestras
Hasta el momento de realizarse la determinacin, las muestras
deben conservarse PROTEGIDAS DE LA LUZ. Procesar en el da.
concentracin 25 50 100
mg/l Intraensayo

Tubo B1 1 B2 2 B3 3 Nivel Medio Rango D.S. C.V.%


Estndar 50 l 50 l 100 l 100 l 200 l 200 l D 2,1 mg/l 1,9-2,2 mg/l 0,11 mg/l 5,2
H2O dest. 2,6ml - 2,6ml - 2,5ml - T 45,2 mg/l 42,3-47,9 mg/l 0,52 mg/l 1,1
Acelerador - 2,6ml - 2,6ml - 2,5ml Interensayo
Sulfanlico 0,2ml - 0,2ml - 0,2ml -
Nivel Medio Rango D.S. C.V.%
Mezclar agitando moderadamente
T 45,1 mg/l 42,2-48,1 mg/l 0,61 mg/l 1,3
Rvo.Diazo - 0,2ml - 0,2ml - 0,2ml

Mezclar cada tubo por inversin inmediatamente despus del agrega- PRESENTACION
do del reactivo Diazo. Cdigo 81010: 100 determinaciones
Reposar 5 minutos a temp. (15-25c) Cdigo 81020: 200 determinaciones
Cdigo 86004: Estndar Bilirrubina 5 ml/6 curvas
Leer en espectrofotmetro a 530 nm o fotocolormetro a 520-550
nm llevando a cero con agua destilada.Color estable 15 minutos.
NOTAS:
1. Los volmenes de muestras y reactivos a utilizar, pueden dis-
Curva De Calibracion. minuir o aumentar siempre que se mantengan las proporciones
Si bien la reaccin es lineal hasta 150 mg/l, es conveniente ve- establecidas en el procedimiento.
rificar la respuesta del sistema a la longitud de onda de trabajo. Aplicacines para autoanalizadores se encuentran disponibles.
Con los valores de lectura corregidas y los correspondientes a la 2.La reaccin colorimtrica sigue la ley de Beer hasta 150 mg/l.
concentracin, construir un grfico. Para valores superiores debe emplearse para la misma tcnica
Si se verifica respuesta lineal, calcular para cada tubo: cantidades inferiores de muestra. (Ej.100 l, 50l 20l). Los re-
sultados obtenidos se corrigen multiplicando por los siguientes
Factor colorimtrico = Bilirrubina mg/l factores:
--------------------- 100 l de muestra: resultado x 1,93
Lect. corregida 50 l de muestra: resultado x 3,79
20 l de muestra: resultado x 9,38
factor colorimtrico promedio de los valores de trabajo
(fct) = anteriores BIBLIOGRAFIA
1. JENDRASIK, GRAFT: Biochem. 2,297,6 (1938).
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda procesar juntamente con las muestras, sueros
control normal y anormal para controlar la perfomance del en- INDICACIONES AL CONSUMIDOR
sayo. Se aconseja el uso de Qualiset Sueros Control Nivel 1 y 2 Garanta de Calidad del Producto
GT Lab (Cdigos 602105-602205) Cada Laboratorio debe dise- GT Laboratorio elabora y comercializa productos para anlisis uno IN VITRO siguien-
ar su propio sistema de Control de Calidad Interno y establecer do normas GMP, ISO 9001:2008 e ISO 13485: 2003. Los trminos y condiciones de
las medidas correctivas si se superan los limites de tolerancia calidad son absolutos dentro de la competencia de responsabilidad, que corresponda
aceptables. a GT Laboratorio.
Cualquier alteracin en los productos elaborados por GT Lab sern reconocidos sin
VALORES DE REFERENCIA cargo de ningn tipo para el usuario. Todo reclamo de calidad deber efectuarse por
Adultos escrito debidamente firmado y sellado por el profesional responsable, con el detalle
Bilirrubina total: hasta 10 mg/l del desperfecto, acompaando el producto en cuestin para su exanimacin tcnica
Bilirrubina Directa: 0-2mg/l por el Departamento de Control de Calidad de Gt Lab. Los reclamos debern ser en-
Recin nacido viados a travs del Distribuidor que efectu la venta. Las reposiciones y/o respuestas
Hasta 60 mg/l dentro de las primeras 24 horas de vida, pudien- tcnicas sern cursadas de forma fehaciente al Profesional usuario
do llegar hasta 100 mg/l al cumplir la semana de vida. INFORMACION PARA CONTACTARSE
Los valores esperados para prematuros son mayores para los GT Laboratorio s.r.l
Necochea 3274 (S2001QXL) Rosario Santa Fe Argentina
mismos tiempos ya que la inmadurez heptica es ms Tel / Fax: +54 (341) 481-1002 y rot.
significativa. e-mail: infoporofesional@gtlab.com.ar
USO PROFESIONAL EXCLUSIVO.
SISTEMA ANALTICO Autorizado por A.N.M.A.T. Diso N:438
Elaborado por GT Laboratorio S.R.L.
1. Linealidad: Hasta 150 mg/l. Establecimiento Inscripto y Habilitado por ANMAT
2. Sensibilidad: Dependiendo del espectrofotmetro, alcanza Industria y Tecnologa Argentina
generalmente a 0,2 mg/l. Dir. Tec: Daniel Gazzola. Bioqumico
3. Precisin: Elaborado por: GT Laboratorio s.r.l
Industria y Tecnologa Argentina
Cdigo y Fecha de Revisin: 81090000/14