UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GRHOMANN

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA ACADÉMICA DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS
 

 
DETEDETERMINACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA DOMINANTE
(D) PARA: GLUCOSA, XILOSA, GALACTOSA, BETA GLUCANO
(MÉTODO DE FENOL SULFÚRICO: VIS – UV.) Y AZUL DE METILENO
 

Prof. Dr. Miguel A. Larrea Céspedes

  
INTRODUCCIÓN
  Los carbohidratos abarcan uno de los mayores grupos de compuestos
orgánicos encontrados en la naturaleza, y juntamente con las proteínas forman
los constituyentes principales del organismo vivo, además de ser la más
abundante y económica fuente de energía para el hombre. La glucosa es el
monosacárido más importante y constituye la unidad estructural de los
polisacáridos de mayor importancia.
En la mayoría de las tablas de composición de alimentos, los carbohidratos
son generalmente determinados como “Carbohidratos Totales” y son obtenidos
por diferencia.
Entre los métodos para cuantificar los azucares, está el método de FENOL
SULFURICO. Cuando los azucares son tratados con ácidos fuertes,
principalmente ácido sulfúrico concentrado, hay formación de hidroximetil
furfural por deshidratación que reacciona con una gran variedad de compuestos
(FENOL) dando un color anaranjado que puede ser cuantificado
colorimetricamente.
Durante las determinaciones espectrofotométricas, los picos de absorción
UV/Vis están estrechamente relacionados con el tipo de enlace, estando
restringida a un número limitado de grupos funcionales llamados cromóforos;
Herramienta útil para identificar grupos funcionales en una molécula,
determinación cuantitativa de compuestos que contienen grupos absorbentes.
Ello supone la elaboración de una curva de calibración que debe es construida
ploteando la concentración vs. La absorbancia.

En algunas ocasiones no se conoce exactamente a que longitud de onda

se hará las lecturas de absorbancia, por lo que esta debe determinarse
experimentalmente a través del espectro de absorción de dicha substancia.
IV. CALCULO DE LA LONGITUD DE ONDA DOMINANTE - VISIBLE
 
 Preparar un tubo de ensayo conteniendo 5 ml de solución patrón de glucosa
anhidra al 0,01 %; es decir 0,1 g de glucosa / 1000 ml de agua destilada.
 Adicionar 5 ml de agua destilada
 Adicionar 1,0 ml. de reactivo de fenol al 5 %
 Adicionar 5,0 ml de ácido sulfúrico concentrado, pureza analítica
 Determinar el espectro de absorción, considerando toda la región visible,
ploteando para ello valores de longitud de onda desde 380 a 770 nm, a
intervalos de 10 nm. Cada lectura; vs. los valores de absorbancia observados
a cada longitud de onda.
 Determinar el pico más alto observado
 Trazar una perpendicular al eje de las abscisas, donde quedará establecida la
longitud de onda dominante.
IV. CALCULO DE LA LONGITUD DE ONDA DOMINANTE - VISIBLE
 
 Preparar un tubo de ensayo conteniendo 5 ml de solución patrón de glucosa
anhidra al 0,01 %; es decir 0,1 g de glucosa / 1000 ml de agua destilada.
 Adicionar 5 ml de agua destilada
 Adicionar 1,0 ml. de reactivo de fenol al 5 %
 Adicionar 5,0 ml de ácido sulfúrico concentrado, pureza analítica
 Determinar el espectro de absorción, considerando toda la región visible,
ploteando para ello valores de longitud de onda desde 380 a 770 nm, a
intervalos de 10 nm. Cada lectura; vs. los valores de absorbancia observados
a cada longitud de onda.
 Determinar el pico más alto observado
 Trazar una perpendicular al eje de las abscisas, donde quedará establecida la
longitud de onda dominante.
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 DETERMINACIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA DOMINANTE
PARA AZUL DE METILENO

PROCEDIMIENTO

DISOLUCIÓN ESTANDAR (PATRÓN) DE AZUL DE METILENO

a) Disolver 0,250 mg de azul de metileno en 100 ml de agua destilada

b) Tomar 0,5 ml y transferir a un matraz aforado de 25 ml y enrasar con agua
destilada

PROCEDIMIENTO ANALITICO

 Realizar un espectro en el intervalo 450 - 700 nm realizando mediciones

de absorbancia cada 20 nm.
 Dibujar el espectro en una hoja de Excel y determinar la longitud de onda
de máxima absorción.
MÉTODO ÁCIDO SULFURICO-UV

El método de Albalasmeh, Berhe y Ghezzehei, tiene como procedimiento

que a 1 mL de las soluciones de carbohidratos, se agregue 3 mL de
ácido sulfúrico concentrado y posteriormente se agite durante 30 s. La
solución se enfría en baño de hielo durante 2 min. Finalmente, se realiza
la medición en el espectrofotómetro utilizando una longitud de onda de
315 nm.

La figura 2 muestra los espectros de absorción, después de haber

realizado la reacción con el ácido sulfúrico, de carbohidratos de
diferentes tamaños como: Gal, Xyl, Glu y βglucano a longitudes de onda
entre 200 y 400 nm. Se encontraron los picos máximos de absorción a
307,0, 313,5, 316,0 y 315,0 respectivamente.
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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 
1. Dubois, M.; Gilles A.; Hamilton, J.; Rebers, P. y Smith, F. 1956. Colorimetric
2. Nielsen, S. 1998. Food Analysis. Kluwer Academic Publications
3. Robert K. 1988. Harper Bioquímica Ilustrada. Editorial: El manual moderno.
MéxicoDf.
4. ALBALASMEH, A.; BERHE, A. A.; GHEZZEHEI, T. "A new method for rapid
determination of carbohydrate and total carbon concentrations using UV
Comparación de métodos que utilizan ácido sulfúrico para la determinación
de azúcares totales Rev. Cubana Quím., vol. 29, no. 2 mayo-agosto, 2017. e-
ISSN 2224-5421 197 spectrophotometry". Carbohydr Polym. 2013, 97 (2),
253–261. DOI 10.1016/j.carbpol.2013.04.072.
5. RAO, P.; PATTABIRAMAN, N. "Reevaluation of the phenol-sulfuric acid
reaction for the estimation of hexoses and pentoses". Anal Biochem. 1989,
181 (1), 18–22. DOI 10.1016/0003-2697(89)90387-4.
PARTES DE UN INFORME DE LABORATORIO

1. Título
2. Introducción
3. Objetivos
4. Revisión de Literatura
5. Material y Métodos
 Materiales
 Reactivos
6. Procedimiento
7. Resultados
8. Discusiones
9. Conclusiones
10. Recomendaciones
11. Referencias Bibliográficas
https://es.scribd.com/document/360687484/4d-Edison-Salazar-Pl3

https://es.scribd.com/document/365480442/Longitud-de-Onda-Dominante-en-
Espectrofotometria