Genética Molecular

Stefan Brück
 Tema
- Alteraciones en el DNA
- Mecanismos de reparación
- Recombinación

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 Por qué…?
...Es reparación de la ADN tan
importante?

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Errores de Replicación

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 Clases de daños del ADN
Cambios únicos en una base.
- Afecta a la secuencia del DNA.
- cambios ejercen sus efectos nocivos en futuras generaciones
- resultado de la mutación de una base in situ, o de un error de
replicación
- Tiempo de reparación limitado: mutación se incorpore
permanentemente por replicación
Distorsiones estructurales.
- bloquea la progresión de la replicación y/o de la transcripción
- enlaces covalentes entre bases adyacentes
- modificaciones de las bases (alquilaciones, depurinaciones)
- presencia de un nick o un gap en una de las cadenas
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Mecanismos de reparación
Base excision repair
Mismatch repair
Nucleotide excision repair

Direct repair fotoreactivacion

Recombinación

Error prone translesion synthesis repair

Non-homologous end joining (NHEJ)

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Cambios unicos en un base

Por qué tiene ADN T y ARN U?

Si C esta metilado -> deaminacion causa

producción de T -> riesgo de mutación 7
Distorsiones estructurales

8
Distorsiones estructurales

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 Mismatch repair

Mismatch: cuando dos bases opuestas no

aparean correctamente.
Usualmente son reparadas por sistemas de
excision:

•Nucleotide excision repair (NER)

•Base excision repair (BER)

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Nucleotide Excision repair

Que tipo de Nucleasa?

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 Xeroderma pigmentosum (XP)

- desorden patológico
- mutaciones en proteínas del sistema de
reparación por NER
- hipersensibilidad a la luz, particularmente
rayos UV
- Cuadro clínico: lesiones y enfermedades de
la piel, predisposición a desarrollar cáncer

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 NER in E. coli
Sistema uvr de E. coli

7 nts desde el 5’ de la base

dañada
4 nts desdes el 3’ de la
base dañada
y la base dañada

DNA pol I es la responsable de realizar la síntesis de reparación (~12nt)

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 Transcription coupled
repair
• RNApolimerasa para cuando
encuentra errores en la DNA
• Combinación de los proteinas para
NER/BER permite reparación directa

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El sistema uvr puede ser dirigido a
las lesiones por otras proteínas:
Reparación acoplada a la
transcripción

Sistema uvr de E. Coli y

transcription coupled repair
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Base excision
repair

Los enzimas que eliminan

bases se llaman
GLICOSILASAS o
LIASAS

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Base flipping

Glicosilasas
pueden
reconocer

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 Direct repair
Direct repair o reparacion directa:
1.La base es sacada o “flipped out” de la doble hélice
2.La base es introducida en el centro activo del enzima reparador
3.La base reparada es reintroducida correctamente en la doble
hélice

Ej: bases alquiladas (adenina DNA glicosilasa (AAG) o mecanismo

oxidante (alkB)), dimeros de timina (fotoreactivacion)

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 Direct repair:
Fotoreactivación
1. Luz UV (200-300nm) produce dimeros de timina

2. - fotoliasa reconoce distorsión en DNA causada por

- dímero, dos timinas adyacentes en una misma banda de
DNA unidas covalentemente por un anillo de tipo ciclobutano
- detienen la maquinaria de replicación y la transcripción

3. La luz ultravioleta (200-500 nm) activa dicha enzima,

encausando así la rotura del anillo ciclobutano y a
continuación se libera

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Polimerasas especializadas

- Pol V (umuCD) y Pol IV (dinB) de E. coli.

- Funcionan cuando la pol III (replicativa) esta
bloqueada,
por ej., ante un dimero de timina
- Inserta bases aleatorias, normalmente incorrectas:
baja fidelidad.
- La mutacion quedara fijada en generaciones
futuras.

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 Emergency repair
• Mucho daño -> mismatch repair falla
• Polimerasas de replicación ->alta fidelidad -
>alta sensibilidad -> para en caso de error
• Activación polimerasa de emergencia (en
ser humanos >10)

= Error prone translesion synthesis repair

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 Emergency repair
DNA polimerasa Función Estructura
Replicasas de alta fidelidad
a Replicación nuclear 350 kD

d Lagging strand 250 kD

e Leading strand 350 kD

g Replicación 200 kD
mitocondrial
Reparación de media fidelidad
b Base excision repair 39 kD

Reparación de baja fidelidad

z Base damage bypass Heteromero

h Thymine dimer bypass Monomero

i Requerido en meiosis Monomero

k Deletion and base Monomero

substitution
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 Emergency repair
Enzima Gen Función

I polA Reparación

II polB Replicación restart

III polC Replicasa

IV dinB Translesión
replicación

V umuD’2C Translesión
replicación

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 Emergency repair
• Ruptura de duplex DNA:
– Radiación ionizante
– Error de replicación
– Agentes oxidantes

• Recombinación homologa
• Nonhomologous end joining

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 Somatic vs.Gametic
• Error en célula somática
– > mal para el individuo

• Error en célula gamética

– > mal para las futuras generaciones
Non homologous end
joining

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NHEJ

Deja cicatriz reconocible

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 Fábricas de reparación
• Eucariotas aumentan effectividad de
reparación por la formación de
´”fábricas de reparación”

• Brca1 y Brca2 reclutan factores de

reparación al sitio de daño

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 SOS response
• Bacterias aumentan expresión de
proteinas de reparación en caso de
daño:
– Enzimas de NER
– Polimerasas de “error prone DNA repair”

Aumenta supervivencia de la bacteria

Aumentan tasa de mutación!

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 Recombinación
Cuatro procesos:

1- Durante meiosis (profase I de la primera división meiótica):

EVOLUCION Y DIVERSIDAD GENETICA

2- Recombinación especifica de sitio:

descubierta en la integración de genomas de fagos en cromosomas
bacterianos y en replicación transposicional

3- Recombinación somática:
(ej. recombinación del sistema inmune)

4- Recombinación mitótica:
reparación de lesiones y restart de bifurcaciónes de replicación
bloqueadas
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 Recombinación
homologa
4- Recombinación
mitótica:
reparación de lesiones
(DSB) y restart de
bifurcación de replicación
bloqueadas

Porque homologa?

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Recombinación homologa

32
Recombinación homologa

33
Recombinación homologa
1- Durante meiosis (profase I de la primera división
meiótica):
EVOLUCION Y DIVERSIDAD GENETICA

BIVALENTES QUIASMA
CROSSING-OVER 34
 Recombinación homologa
2- Recombinación especifica de sitio:
descubierta en la integración de genomas de
fagos en cromosomas bacterianos.

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 Recombinación homologa

2- Recombinación especifica de sitio:

Replicación transposicional

Elemento transposicional:
elemento genético movíl

Primera causa de la evolución?

Modulación de enzimas

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 Recombinación homologa
3- Recombinación somática
(ej. recombinación del sistema inmune)

V(D)J
recombinación

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