ESPECTROSCOPIA

ULTRAVIOLETA VISIBLE
QUÍMICA ANALÍTICA
 CONCEPTOS PREVIOS
Radiación electromagnética: es la propagación de energía a través del espacio sin soporte de materia, es decir, a
través de ondas producidas por la oscilación o aceleración de una carga eléctrica (dualidad onda-partícula).

Naturaleza ondulatoria: caracterizada por su frecuencia (ν) o longitud de onda (λ).

ν = número de ondas que pasan por un punto en la unidad de tiempo. (1/s)

λ = distancia que hay ente dos puntos iguales de la onda, máximos,
mínimos. (m)
v = c/λ

Naturaleza corpuscular
COMO PARTÍCULA: Actúa como fotón, “pequeño paquete de energía”.
E = hv.

Sustituyendo tenemos: E = hc/λ, por lo que (E α v) y (E α 1/λ)

 CONCEPTOS PREVIOS
La radiación electromagnética se puede ordenar en un espectro que se extiende desde ondas de frecuencias muy
elevadas (longitudes de onda pequeñas; rayos gamma) hasta frecuencias muy bajas (longitudes de onda altas; ondas
de radio). La luz UV-visible es sólo una pequeña parte del espectro electromagnético, visible (780-380nm); UV
(380-200nm).

Esta radiación puede ser emitida por

sustancias bajo condiciones de gran
excitación, como por ejemplo, altas
temperaturas o descargas eléctricas.
 CONCEPTOS PREVIOS
La radiación electromagnética al incidir sobre la materia puede sufrir los siguientes procesos:

1. Absorción

2. Transmisión

3. Reflexión

4. Refracción

5. Dispersión

Se basa en estudiar la interacción de la radiación magnética con la materia: mide la cantidad de luz absorbida
en función de la longitud de onda utilizada. Permite identificar sustancias químicas (cualitativos) y determinar
su concentración (cuantitativos), (Worsfold y Zagatto, 2017).
 CONCEPTOS PREVIOS
∆E es característico de cada sustancia, lo que nos proporciona un análisis de un analito en una muestra. Además la
cantidad de E absorbida o transmitida es proporcional a la concentración de X con lo que también podemos hacer un
análisis cuantitativo.

La proporcionalidad entre intensidad de luz absorbida o transmitida y la concentración de analito viene definida por
la ley de Lambert-Beer.
Ley de Beer, que establece que para una
misma especie absorbente en una celda de
espesor constante, la absorbancia es
directamente proporcional a la concentración.

Cada sustancia tiene un espectro de absorción característico que

dependerá de la configuración electrónica de la molécula, átomo o
ión y de los posibles tránsitos electrónicos que se puedan producir
con la radiación que incide sobre ella.
 ANTECEDENTES (González, M. y Montaño, L., 2015)
● 1492-1519 Leonardo da Vinci observa el fenómeno de descomposición de la luz del sol sobre un vaso con agua
● 1666 Newton descubre el “Spectro” de la luz del sol
● 1760 Lambert publica su ley de la absorción
● 1859 Kirchoff y Eberhard descubren que las líneas espectrales son únicas para cada elemento
● 1861 y 1863 se descubren el Talio y el Indio utilizando el análisis espectral
● 1895 Wilhem Conrad descubre rayos X
● 1905 Albert Einstein descubre el efecto fotoeléctrico
● 1912 Walter Friedrich y Paul Knipping, difractan rayos X en una placa de zinc
● En 1919, el físico alemán Arnold Sommerfeld y Walter Kossel, notan que las líneas espectrales de cualquier átomo son
cualitativamente similares en la longitud de onda de los iones de un elemento de un número atómico más alto
● W. Saller construye un espectrómetro de rayos X
● Isidor Isaac y su equipo desarrollan la resonancia magnética de haces moleculares
● George Placzek desarrolla la teoría sistemática del efecto raman lo que dio inicio a la espectroscopia de raman
● 1940-1942 Arnold Orville desarrollo el espectrofotómetro UV- visible
 FUNDAMENTOS TEÓRICOS
La espectroscopía ultravioleta visible está basada en el proceso de absorción de la radiación ultravioleta-
visible (radiación con longitud de onda comprendida entre los 160 y 780 nm) por una molécula.

● regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagnético.

La radiación absorbida por las moléculas

desde esta región del espectro provoca
transiciones electrónicas que pueden ser
cuantificadas.

La espectroscopia UV-visible se utiliza

para identificar algunos grupos
funcionales de moléculas, y además,
para determinar el contenido y fuerza de
una sustancia.
 PRINCIPIO FÍSICO
Todas las técnicas de absorción suponen que cuando una radiación incide sobre una muestra se
produce una absorción parcial de esta radiación, lo que hace que se produzca una transición entre los
niveles energéticos de la sustancia: átomo, molécula o ión, pasando ésta al estado excitado, el resto de
radiación es transmitida.

● se libera el exceso de energía en forma de calor.

● la luz visible o UV es absorbida por los electrones de
valencia
● estos son promovidos a estados excitados (de energía
mayor).
● al absorber radiación electromagnética de una
frecuencia correcta, ocurre una transición desde uno de
estos orbitales a un orbital vacío.
 PRINCIPIO FÍSICO

Para que la radiación electromagnética incidente interaccione con la materia tiene que tener una λ del
mismo tamaño o menor que las dimensiones del cuerpo irradiado. Es por ello que la radiación de la región
del ultravioleta (≈ 1-400 nm) nos permite obtener información de las transiciones electrónicas de las
moléculas.
 Cuando un haz de radiación UV-Vis atraviesa una disolución conteniendo un analito absorbente, la
intensidad incidente del haz es atenuada. Esta fracción de radiación que ha logrado traspasar la
muestra es denominada absorbancia.

TRANSICIONES
Dependiendo del tipo de enlace que consideremos como cromóforo la excitación electrónica que puede observarse es:
 PRINCIPIO FÍSICO

Cuando la radiación incide sobre una sustancia no toda ella se ve afectada por la misma; al átomo o
conjunto de átomos que absorben radiación se le denominaba cromóforo. En las moléculas existen
también átomos o grupos de átomos que no absorben radiación, pero hacen que se modifique alguna de
las características de la absorción del cromóforo, se denominaban a tales grupos auxocromos.
 AUXOCROMOS

grupos metilo, halógenos, hidroxi, alcoxi, amino.

 PRINCIPIO FÍSICO
Las muestras para espectrofotometría UV-Vis suelen ser líquidas, aunque la absorbancia de los gases e
incluso de los sólidos también puede medirse. Las muestras suelen ser colocadas en una célula
transparente, conocida como cubeta. Las cubetas suelen ser rectangulares, con una anchura interior de 1
cm.

La naturaleza del disolvente, el pH de la solución, la temperatura, la concentración de electrolitos, y la

presencia de sustancias interferentes pueden influir en los espectros de absorción de los compuestos
 PRINCIPIO FÍSICO: Espectrofotómetro

El espectrofotómetro se compone de siete partes principales, estos pueden variar según el aparato pero
conservan el mismo fundamento.
Lámpara. Monocromador o prisma. Rendija. Sistema óptico
Celda o cubeta.
Fotodetector. Detector. Amplificador.
Medidor.
 PRINCIPIO FÍSICO

Fuente de Radiación. Lámpara: Esta debe tener una corriente continua y policromáticas. Las lámparas de
deuterio son las fuentes más comunes de radiación UV, en un rango UV 190-370 nm. Las lámparas de
tungsteno proporciona estabilidad en el rango de las áreas visibles y cercanas a las infrarrojas del
espectro, cubriendo 320 – 1,100 nm

Estas consisten de materiales que

son excitados a niveles de
mayor energía, por medio de
descargas eléctricas de alto voltaje
o por calentamiento.
Se tiene que calentar.
También existen de Xenón y con
luz led (limitado)
 PRINCIPIO FÍSICO
El solvente de la muestra, la cual es responsable de la absorción de la radiación, debe ser
Las cubetas o celdas.
El monocromador
transparente ao la Para
prisma
regiónUV
sirve
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necesario
se utilizar celdas
descomponer
está estudiando la luz ydeaislar
y debe cuarzo,
disolver ya
lasuna que el vidrio
radiaciones
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de onda
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onda. esLentes
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absorbentes. deposita
y espejos. Lalaradiación
Por ejemplo, muestra
los disolventes
es colimadapolares, como el
y enfocada agua,
por alcoholes,
lentes ésteres
y espejos. y cetonas,
El material de los
tienden
lentes a difuminar
debe ser los espectros
por supuesto vibracionales
transparente y, porutilizada.
a la radiación consiguiente, no se deben usar cuando se
desea un espectro detallado.
 PRINCIPIO FÍSICO
Los detectores son sensores que captan la intensidad de la luz Medidor o sistema de lectura. Una
(o radiación) una vez que ha atravesado la muestra, y la envía vez que la señal de energía radiante
al dispositivo donde puede ser visualizada. Pueden ser ha sido transformada en una señal
eléctrica y amplificada
sensibles a los fotones o al calor.
posteriormente, dicha señal pasa a
Amplificador un sistema de lectura.
La señal electrónica generada por un detector de radiación,
debe ser convertida a una señal que el operador del Este sistema puede ser análogo
instrumento pueda leer e interpretar fácilmente. moviendo una aguja o puede ser
digital en una pantalla

Existen varios tipos de espectrofotómetros pero los más comunes son los de Haz sencillo y los de Haz
doble
 Instrumental
El haz es dividido, incide en celda
De haz simple: blanco y celda muestra.

Calibrar el aparato a cero de Temporal y Espacial.

absorbancia
Comparación de ambas señales.
Requieren de componentes estables
y de alta calidad en la fuente Más complicados y costosos.

. Los parámetros iniciales deben

permanecer estables y reajustar
periódicamente.

Es más barato que los de doble haz

Se pueden utilizar ampliamente si los

resultados que se desean obtener no
requieren de muy alta precisión.
 APLICACIONES
•Determinación de grupos funcionales en
moléculas orgánicas
•Análisis de muestras biológicas

•Determinación cuantitativa de
iones metálicos de transición
•Análisis de semiconductores
•Pruebas de aseguramiento de
la calidad
 Soluciones de iones metálicos de transición
•Las soluciones de iones metálicos de transición pueden ser coloreadas (es decir,
absorben la luz visible).
•El color de las soluciones de iones metálicos se ve muy afectado por la presencia
de otras especies, como algunos aniones.

•Una solución diluida de sulfato de

cobre es muy azul; agregando
amoníaco cambia la longitud de onda
de absorción máxima.
 Análisis de semiconductores
El estudio por UV-Vis, permite obtener información para:

• La caracterización de las deposiciones para generar los recubrimientos.

 IMPORTANCIA
Las técnicas analíticas UV-Visible han recibido gran aceptación debido, entre otras a las siguientes
razones:

● Amplio campo de aplicación: muchas especies son activas en el Visible, y muchas más con un
tratamiento adecuado son capaces de formar especies coloridas.
● Selectividad adecuada: Aunque no es muy común si es posible tener interferencias en UV-Visible.
Cuando esto ocurre, es posible emplear los métodos para análisis de multicomponentes. Otra
alternativa es aislar el analito de la interferencia, o separa la interferencia misma.
● Buena Exactitud y Precisión: Se pueden tener errores relativos del 1 al 3 %, por lo cual se puede
considerar que se tendrán resultados analíticos con un mínimo de incertidumbre si se procede en la
forma correcta.
● Facilidad y Conveniencia: Es posible obtener resultados muy aceptables con instrumentos o
espectrofotómetros de los más sencillos en el mercado, a un costo muy accesible.
 ANÁLISIS DEL ARTÍCULO
In vitro antibacterial effects of silver nanoparticles synthesized using Verbena
officinalis leaf extract on Yersinia ruckeri, Vibrio cholera and Listeria monocytogenes
OBJETIVO

El presente estudio tuvo como objetivo evaluar los efectos antibacterianos de las nanopartículas de plata
sintetizadas por el extracto de hoja de Verbena officinalis contra Yersinia ruckeri, Vibrio cholerae y Listeria
monocytogenes.
 ANÁLISIS DEL ARTÍCULO
In vitro antibacterial effects of silver nanoparticles synthesized using Verbena
officinalis leaf extract on Yersinia ruckeri, Vibrio cholera and Listeria monocytogenes
PROCESO ADICIONAL
 Evaluación de los efectos antibacteriales de las nanoparticulas de plata:
concentracion inhibitoria minima
● Y. ruckeri, V. cholerae and L. monocytogenes fueron cultivadas en caldo nutritivo.
● Se utilizaron nanopartículas de plata sintetizadas a partir de extractos de V. officinalis
para evaluar los efectos antibacterianos en concentraciones de 10, 5, 2.5, 1.25, 0.62,
0.31 mg/mL.
● Se colocó un volumen de 100 μL de nanopartículas sintetizadas a una concentración
de 20 mg / mL en el primer pocillo de la placa de microtitulacion que contenía 100 μL
de medio NB para obtener una concentración de 10 mg / mL.
● Se realizó dilución en serie, Luego, se agregaron a los pocillos 100 μL de suspensión
bacteriana.
● Las placas se colocaron en incubadora a 37° para V. cholerae y L. monocytogenes y 30
° C para Y. ruckeri durante 18-24 horas. La concentración más baja a la cual no se
pudo encontrar crecimiento bacteriano visible se tomó como el valor MIC.
 Concentracion bactericida minima

● El método usado es una versión modificada del procedimiento descrito en la

guia BSAC.
● Después de determinar la CIM se eliminaron 10 μL de todos los pocillos que
no tenían un crecimiento bacteriano visible y luego se cultivaron en los
medios de NA.
● A continuación, las placas se incubaron durante 1 noche a 37 ° C para V.
cholesee y L. monocytogenes y 30 ° C para Y. ruckeri.
● La MBC es la concentración más baja de agente antimicrobiano que mata
abiertamente a> 99.9% de la población bacteriana inicial donde no se
observa un crecimiento visible de la bacteria en el medio de NA
 Actividad bacteriana mediante agar con metodo de difusion

● La actividad antibacteriana de los AgNPs sintetizados se analizó utilizando el

método de ensayo de difusión en pocillos de agar.
● Se hizo el crecimiento bacterial en Agar Mueller-Hinton (MHA) durante 24
horas.
● Diferentes concentraciones de nanopartículas de plata fueron colocadas en la
superficie de las placas de agar
● La actividad antimicrobiana se midió en función del diámetro de la zona de
inhibición en mm.
● El análisis estadístico se realizó mediante un análisis de varianza de una vía
con la prueba de Tukey, que se utiliza para comparar las diferencias entre las
muestras.
● Los valores de p ≤ 0.05 se consideraron significativos y todos los ensayos
antibacterianos se realizaron con 3 repeticiones.
UV-Vis spectra of AgNPs biosynthesized from aqueous extract of Verbena officinalis.
● Cuando el extracto acuoso de la hoja de V. officinalis se agregó a la solución de nitrato
de plata, el color de la solución cambió de amarillo claro a marrón rojizo después del
proceso de reducción de Ag+ a Ag, lo que indica la formación de AgNPs.
● La Fig. 2 muestra el espectro UV visible de la formación de nanopartículas de plata
utilizando una concentración constante de AgNO 3 (2 mM) con extracto de hoja de V.
officinalis a 37 ° C después de 24 horas entre una longitud de onda de 280 a 700 nm.
● La solución que contenía las nanopartículas estaba a aproximadamente 420 nm.
Análisis de las propiedades antibacterianas
Concentracion inhibitoria minima y concentracion bactericida minima
 CONCLUSIÓN
La espectroscopia es el estudio de la interacción entre la radiación electromagnética y la materia, con absorción o
emisión de energía radiante. Tiene aplicaciones en astronomía, física, química y biología.

La espectroscopia ultravioleta-visible (UV/VIS) está basada en la cantidad de energía que puede absorber o
transmitir una muestra en función de la cantidad de sustancia presente

La espectrometría UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinación cuantitativa de soluciones de iones metálicos

de transición y compuestos orgánicos conjugados. Así como en la determinación de constituyentes orgánicos e
inorgánicos en una amplio ámbito: ambiental, bioquímica, farmacéutica, agronómica, clínica y alimenticia. La
técnica se ha utilizado más ampliamente para determinaciones indirectas que implican la conversión de analitos en
una especie química absorbente.

El análisis espectrofotométrico resultó imperante para conocer la concentración de bacterias en el extracto de V.

officinalis, obteniendo una escala de mayor a menor inhibición bacteriana; el análisis permitió validar los resultados
obtenidos mediante el cultivo bacteriano.
 Bibliografía
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México: Mc Graw Hill.
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México, México: CIA. Editorial continental.
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● Goacher, R. [Robyn Goacher]. (2017, agosto 15). Spectroscopy basis [Archivo de video]. Recuperado de:
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