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INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
INTRODUCCIÓN
MATERIALES Y MÉTODOS
RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
INTRODUCCIÓN
• Coenzima Q10
• Es una quinona isoprenoide no proteica,
liposoluble, y móvil, que se encuentra
prácticamente en todas las membranas
celulares.
• Como antioxidante.
• Señalización celular y expresión génica.
Relación con procesos patológicos
Plaquetas,
músculo, linfocitos
• Concentración Q10 • Células predilectas por
plasmática no refleja la ser ricas en
concentración • Potenciales sustitutos del mitocondrias, fácilmente
intracelular de tejidos de estado de la Q10 en el aislables, presentar
interés médico. tejido. características similares
a las neuronas.
Necesidad otras
Plaquetas
matrices
Objetivos
Objetivo general:
Objetivos de la validación:
• Incertidumbre del método menor al 30%.
• Robustez del método dentro del rango: 90 a 110.
• Precisión: rango de repetibilidad y reproducibilidad menor a
0,05.
• Linealidad (correlación) igual o mayor a un R2 de 0,99.
• Veracidad (porcentaje de recuperación) mayor o igual al
90%.
Validación
• Exactitud, precisión y robustez
Validación
• Límite de detección y cuantificación
Validación
• Linealidad • Confirmación de identidad
CERTIFICADOS O
ALEATORIAS RESOLUCIÓN DE
EQUIPOS
REPRODUBILIDAD,
REPETIBILIDAD, BALANZA, MICROPIPETAS,
RESOLUCIÓN DE LA
EXACTITUD, LD, LC, BALANZA Y PUREZA DEL
RANGO (K,ΔØ,R2), STD.
LINEALIDAD, R2.
Criterios de inclusión:
Condiciones cromatográficas:
– Fase móvil: metanol 60%: 1-propanol
40%.
– Flujo: 0,4 ml/min.
– Volumen de inyección: 90 ul.
– Corrida isocrática.
– Temperatura de la muestra: 8ºC ± 2.
– Temperatura de la columna: 25ºC ± 5.
– Absorbancia: 275nm.
• Validación de la técnica
– Exactitud y robustez
1,10E- 4,30E-
CONCEN. {alto} {bajo} 10 10 2,47E+01 0,0001 Bilateral
04 06
1,10E- 1,70E-
CONCEN. {alto} {medio} 10 10 0,06 0,0003 Bilateral
04 03
Cromatograma de la inyección de
metanol grado HPLC.
Cromatograma de la inyección de la
fase móvil del método (metanol 60%:
1-propanol 40%).
Cromatograma de la inyección de 1-
propanol grado HPLC.
• Validación de la técnica
– Incertidumbre
Desviaciones estándares de las fuentes aleatorias de Incertidumbres asociadas a las fuentes sistemáticas de
incertidumbre del método (Evaluación Tipo A). incertidumbre del método (Evaluación Tipo B).
LC 0,001024374
Rango 0,000977813
Linealidad 0,000977813
Volumen de inyección.
• Componente clave para la visualización óptima del pico cromatográfico de
coenzima Q10 de las muestras.
• Validación
Exactitud.
Porcentaje de recuperación del 96,8%, cumple con objetivos de validación del
método y las normas internacionales. En comparación con Contin (2011): 89 –
95,3%, éste método es más exacto.
Precisión.
• Lím. Repetibilidad: 0,004 - 0,02, Lím. Reproducibilidad: 0,002 – 0,037.
• Lim. Repetibilidad Contin: 0,04 – 0,057, Lím. Reproducibilidad: 0,043 – 0,063.
Robustez.
• De 91,75 a 101,85% de recuperación, cumple con objetivo de validación (90 –
110%), recomendado por el Eurachem.
Sensibilidad.
• Dos criterios: límite de detección de 5,31 picomol/1E9 plaquetas y límite de
cuantificación de 8,04 picomol/1E9 plaquetas. En comparación con Contin: LD
de 21 picomol/1E9 plaquetas y LC de 84 picomol/1E9 plaquetas.
• Validación
Linealidad.
Coeficiente de correlación promedio: 0,998, cumple con objetivos de validación
y normas internacionales (Eurachem, ICH y USP).
Confirmación de identidad.
• No existe ninguna interferencia al tiempo de retención de la CoQ10.
Incertidumbre.
• Incertidumbre expandida del método: 14%, cumple con objetivos de validación
y criterios del Eurachem.
Muestras.
• Promedio concentración: 0,7uM. No correlación entre: edad, género, número
de plaquetas y concentración Q10 en plaquetas.
• Carta de control:30 muestras bajo control y 5 muestras atípicas.
CONCLUSIONES
Se estandarizó y validó un
protocolo de medición de
coenzima Q10 en plaquetas,
mediante la metodología de
HPLC.
La exactitud, precisión,
linealidad, y sensibilidad Se estableció que no
del presente método, existieron interferencias de
presentan mejores otros compuestos en la
resultados que los medición del analito,
obtenidos en el protocolo mediante esta
propuesto por Contin metodología.
(2011).
Se deben crear
estrategias de Ampliar este
Para la validación
verificación del estudio con una
Adicionalmente, se de métodos
control del método población
deben implantar analíticos es
a corto plazo. Así representativa del
medidas necesaria la
como a largo Ecuador para
sistemáticas para utilización de
plazo, para establecer una
el tratamiento de instrumentos
comprobar que la línea base de la
las muestras calibrados y
exactitud y concentración
atípicas o fuera de materiales de
precisión del intracelular de la
control. referencia
método siguen coenzima Q10 en
certificados.
estando bajo adultos sanos.
control.
AGRADECIMIENTO