PROTOCOLO DE INVESTIGACIÓN

1. Título del proyecto:

“Verificación de cinco analitos en el analizador Cobas c 501 Roche, Hitachi”

2. Lugar de realización: Hospital Público Descentralizado Dr. Guillermo Rawson,

Servicio de Laboratorio Central, sector Química.

3. Investigadores:

 Cassella, Fátima – DNI 36.031.918

 De Cara, Victoria – DNI 35.508.130
 Herrera, Gabriela – DNI 35.850.042
 Ibaceta, Ariel – DNI 36.033.836
 Martínez, Renzo – DNI 34.921.252
 Pósleman, Emilio - DNI 36.033.524
 Pérez Jacquelina - DNI 33.715.032
 Rodríguez, Federico - DNI 32.860.036

 Tutor: Castro Gerardo - DNI 30.835.853

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INDICE

1- Resumen ……………………………………………………………………………… página 3

2- Introducción …………………………………………………………………………… página 4
3- Objetivos……………………………………………………………………………….. página 4
3.1- General……………………………………………………………………… página 4
3.2- Específico…………………………………………………………………… página 4
4- Materiales y Métodos…………………………………………………………………. página 5
4.1- Tipo de estudio…………………………………………………………….. página 5
4.2- Población……………………………………………………………………. página 5
4.3- Variables y su operacionalización ……………………………………..… página 5
4.4- Técnicas e instrumentos de recolección de información………………. página 6
4.5- Plan de análisis de datos…………………………………………………. página 7
5- Características de la recolección de datos ………………………………………… página 8
6- Control de calidad ……………………………………………………………………. página 8
7- Aspectos éticos ……………………………………………………………………….. página 8
8- Cronograma de actividades ………………………………………………………… página 9
9- Presupuesto ………………………………………………………………………….. página 9
9.1- Recursos humanos………………………………………………………… página 9
9.2- Recursos materiales e insumos…………………………………………. página 9
9.3- Fuente de financiamiento………………………………………………... página 9
10- Bibliografía………………………………………………………………………….. página 10
11- Anexos ……………………………………………………………………………… página 11

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 1- Resumen

Para evaluar la confiabilidad de la ejecución analítica en los laboratorios clínicos se emplean

sistemas de control de calidad. La verificación consiste en la confirmación a través de
evidencias objetivas, que el método cumple con los requerimientos especificados para el
uso previsto y así garantizar la calidad de los resultados al paciente. En la actualidad en
nuestro laboratorio contamos con el equipo Cobas c501 (Roche, Hitachi) cuyos analitos no
han sido verificados en su totalidad. Por lo tanto, es de suma importancia comprobar que el
desempeño analítico cumpla con los requerimientos de calidad del laboratorio. Este trabajo
tiene como objetivo evaluar el desempeño analítico del equipo Cobas c 501(Roche, Hitachi)
verificando la precisión y exactitud en la determinación de proteínas totales, albúmina,
calcio, fósforo y magnesio. Para ello se utilizarán controles comerciales para la realización
del control de calidad suministrado por el fabricante. El mismo cuenta con dos niveles de
concentración, abarcando rango normales y patológicos de valores posibles de obtener. Se
realizarán los procesos de calibración y de control de calidad diario correspondiente,
debiendo los resultados encontrarse dentro del rango especificado en el protocolo. Se
analizarán dos niveles de concentración del material de referencia por día con cinco
replicados de cada uno. Los mismos se procesarán durante el transcurso de la jornada
laboral, durante cinco días. Todos los resultados serán volcados en una planilla de Excel
para luego realizar los cálculos necesarios. Luego de haber realizado los ensayos de
verificación de la exactitud y precisión se espera que los valores de los analitos evaluados
se encuentren dentro de los valores especificados por el fabricante para cada nivel de
concentración. La importancia de este proyecto es poder demostrar con evidencia que el
analizador emite resultados confiables de los analitos estudiados, ya que estos son
relevantes al momento de la toma de decisiones médicas, contribuyendo al diagnóstico
clínico.

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 2- Introducción

Para evaluar la confiabilidad de la ejecución analítica en los laboratorios clínicos se emplean

sistemas de control de calidad. Una de las herramientas básica y útil es el modelo propuesto
por el Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI), el cual elabora guías para la
validación y verificación de métodos analíticos con exhaustivos protocolos.(1) La verificación
consiste en la confirmación a través de evidencias objetivas, que el método cumple con los
requerimientos especificados para el uso previsto y así garantizar la calidad de los
resultados al paciente.(2)
Las guías de la CLSI proveen información sobre los parámetros de desempeño a evaluar y
el modo de proceder logrando unificar criterios. En el área de Química Clínica, la verificación
del analizador incluye la determinación de la precisión en condiciones de repetibilidad y
precisión intermedia, de la exactitud, de la linealidad, de intervalos de medición, del límite de
cuantificación y del intervalo de referencia.
La precisión es la proximidad de distintas medidas entre sí y puede analizarse bajo las
mismas condiciones (denominada repetibilidad) o en diferentes condiciones, mientras que la
exactitud refleja la concordancia de un valor real, estándar aceptado o con valor esperado.
La veracidad refleja la concordancia de un valor real, estándar aceptado o con valor
esperado.(3)
Los ensayos de laboratorio deben ser sometidos a una verificación por parte del laboratorio
antes de ser introducidos como método de rutina. En la actualidad en nuestro laboratorio
contamos con el equipo Cobas c501 (Roche, Hitachi) cuyos analitos no han sido verificados
en su totalidad. Por lo tanto, es de suma importancia comprobar que el desempeño analítico
cumpla con los requerimientos de calidad del laboratorio.

3- Objetivos

3.1- General:

 Verificar el desempeño analítico del equipo Cobas c 501 Hitachi, en la

evaluación de cinco analitos, según la guía CLSI EP15 A3 (4).
 Verificar la precisión y exactitud de cinco analitos

3.2- Específicos:

 Verificar la precisión intraensayo e interensayo de albúmina, proteínas totales,

calcio, magnesio y fósforo.
 Verificar la exactitud de las determinaciones de albúmina, proteínas totales,
calcio, magnesio y fósforo.

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 4- Materiales y Métodos
4.1- Tipo de estudio: Es un estudio cuantitativo
4.1.2- Características del diseño: observacional analítico
4.2- Población: Material de referencia (PreciControl ClincChem Multi 1 y 2 marca Roche).
Se utilizará controles comerciales (material de referencia) para la realización del control de
calidad suministrado por el fabricante, denominado PreciControl ClincChem Multi (Roche).
El mismo cuenta con dos niveles de concentración (Multi 1 y 2), abarcando rango normales
y patológicos de valores posibles de obtener. El material de referencia es un control
liofilizado basado en suero humano. El contenido final en cada tubo es 5ml. La temperatura
de almacenamiento debe ser 2 – 8°C. El material se conserva estable -15 a -25°C.
PreciControl ClinChem Multi 1 (Control Normal)
Nombre Valor Rango 1S Unidad
ALB2 3,29 2,69 – 3,89 0,20 g/dl
(Albúmina)
CA2 8,94 7,86 – 10,02 0,36 mg/dl
(Calcio)
MG2 19,9 17,5 – 22,3 0,8 mg/L
(Magnesio)
PHOS2 41,5 35,2 – 47,8 2,1 mg/L
(Fósforo)
TP2 4,94 4,34 – 5,54 0,20 g/dl
(Proteínas
totales)

PreciControl ClinChem Multi 2 (Control Patológico)

Nombre Valor Rango 1S Unidad
ALB2 4,76 3,89 – 5,63 0,29 g/dl
(Albúmina)
CA2 13,6 12,1 – 15,1 0,5 mg/dl
(Calcio)
MG2 34,7 30,5 – 38,9 1,4 mg/L
(Magnesio)
PHOS2 80,9 68,9 – 92,9 4,0 mg/L
(Fósforo)
TP2 7,47 6,57 – 8,37 0,30 g/dl
(Proteínas
totales)

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4.3- Variables
Variables Tipo Definición Indicador Escala
operacional
Albúmina Cuantitativa Proteína sérica Concentración Continua
expresado en de albúmina en
g/dL suero
Calcio Cuantitativa Calcio sérico Concentración Continua
expresado en de calcio en
mg/L suero
Magnesio Cuantitativa Magnesio sérico Concentración Continua
expresado en de magnesio en
mg/L suero
Fósforo Cuantitativa Fósforo sérico Concentración Continua
expresado en de fósforo en
mg/L suero
Proteínas totales Cuantitativa Proteínas totales Concentración Continua
expresadas en de proteínas
g/dL totales en suero

4.4- Técnicas e instrumentos de recolección de información

Se utilizará el analizador Cobas c501 (Roche, Hitachi) para verificar cinco analitos.
Técnica para la Verificación de la precisión.(4) (Guía EP15A3)
1) Se realizarán los procesos de calibración siguiendo las instrucciones brindadas por el
fabricante
2) Se incluirá dentro de las corridas el material de control de calidad diario
correspondiente, debiendo los resultados encontrarse dentro del rango especificado
en protocolo de control de calidad interno.
3) Se analizarán 2 niveles de concentración del material de referencia por día con 5
replicados de cada uno. Los mismo se procesarán durante el transcurso de la
jornada laboral de 8 a 13hs, durante 5 días. Para cada análisis el equipo toma 12,5 µl
del material de referencia por lo que por día y por nivel de control se consumirán 62,5
µl.
4) Se recolectarán los datos obtenidos en la tabla descripta en el Anexo I.

Técnica para la demostración de la exactitud. (Guía EP15A3)

Procedimiento mediante comparación con materiales de referencia
Fuente: Material de control de calidad para 2 niveles de concentración
1) Se realizarán los procesos de calibración siguiendo las instrucciones brindadas por el
fabricante.

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 2) Se incluirá dentro de las corridas el material de control de calidad diario
correspondiente, debiendo los resultados encontrarse dentro del rango especificado
en protocolo de control de calidad interno.
3) Se analizarán 2 niveles de concentración del material de referencia por día con 5
replicados de cada uno. Los mismo se procesarán durante el transcurso de la
jornada laboral de 8 a 13hs, durante 5 días. Para cada análisis el equipo toma 12,5 µl
del material de referencia por lo que por día y por nivel de control se consumirán
62,5µl.
4) Se recolectarán los datos obtenidos en la tabla descripta en el Anexo I.

4.5- Plan de análisis de datos:

Cálculos para verificar la precisión

Los cálculos se realizarán utilizando el programa Microsoft Excel y se hará por separado
para cada nivel de concentración. Se obtendrán repetibilidad y precisión y los resultados
se compararán con las especificaciones del fabricante.

Repetibilidad.

Donde:
∑ indica que los términos a la derecha deben sumarse
D número total de días
n número total de replicados por día
xdi resultados por replicados por día
_
x promedio de todos los resultados por día

Precisión intralaboratorio

donde:
xd promedio de todos los resultados por día
x promedio de todos los resultados

donde:
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 n número de replicados por día

Comparación con especificaciones del fabricante

donde:
CV%r es la especificación del fabricante sobre repetibilidad

donde CV%l es la especificación del fabricante sobre precisión intralaboratorio.

Cálculos para verificar la exactitud

Los cálculos se realizarán utilizando el programa Microsoft Excel y se hará por separado
para cada nivel de concentración.

Cálculo de media y desviación estándar.

Test de aceptación
a. Definición del nivel de significación
b. Determinar el punto t; de la distribución t con un nivel de confianza (100 - α) y
5n-1 grados de libertad, donde n representa el número de muestras testeadas
y 5 el número de replicados.
c. Calcular en intervalo de verificación:

5- Características de la recolección de datos

Los datos serán recolectados en planillas confeccionadas en programa Excel. Anexo I
6- Control de calidad
El procedimiento de medición de los diferentes analitos cuenta con controles de calidad
interno y externo, los cuales están diseñados para dos niveles de concentración.
7- Aspectos éticos
El trabajo de investigación no requiere consentimiento informado ya que ningún
procedimiento involucra sujeto de estudio, por lo que se trabajará con material de referencia
comercial.

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 8- Cronograma de actividades:

Plan de actividades y cronograma:

Periodo de tiempo:
ETAPAS: Meses
ACTIVIDADES 1 2 3 4 5 6

Jul Ago-Sep Oct Nov Dic Ene

Lectura de material bibliográfico X X

Período de familiarización con el equipo Cobas c 501 X

Definir especificaciones de calidad para los analitos a evaluar X

Verificación de la precisión (Repetibilidad y precisión inter-ensayo) X X

Verificación de la exactitud (Determinación del sesgo) X X

Recolección de los resultados (confección de planillas) X

Análisis e interpretación de resultados X

Elaboración de conclusiones X

Redacción de trabajo X X

9- Presupuesto

9.1- Recursos humanos:

 Técnicos: Calibración del equipo

 Bioquímicos residentes: procesar los controles, analizar datos

9.2- Recursos materiales:

 Para llevar a cabo el proyecto se cuenta actualmente, en el laboratorio, con

un espacio dedicado al sector química, el cual posee un área específica
designada para el desarrollo de la jornada de trabajo del equipo a evaluar,
para la manipulación y procesamiento del material de referencia que se
utilizará. También se dispone de los reactivos e instrumentos necesarios, del
material de referencia adecuado para trabajar y de las guías apropiadas que
rigen las pautas para llevar a cabo el control de calidad.

9.3- Justificación de financiamiento público:

El financiamiento de este trabajo está contemplado dentro del presupuesto del

HPDDGR, ya que la verificación del analizador Cobas es un procedimiento necesario
para evaluar la confiabilidad de la ejecución analítica en el laboratorio.
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 10- Bibliografía:
1. Guglielmone R, De Elías R, Kiener O, Collino C, Barzón S. Verificación de métodos
en un laboratorio acreditado y planificación del control de calidad interno. Acta
Bioquim Clin Latinoam. 2011;45(2):335–47.
2. Delgado G. Validación y veri fi cación de métodos de ensayos . Un dilema en los
laboratorios de ensayos y en las auditorías de la acreditación. 2009;14–21.
3. Esteban HF, Eliseo R, Alicia C, Armando V, Zorayda G, Briceida L, et al. Desempeño
analítico de dos plataformas automatizadas para química clínica en un Instituto de
Salud Pediátrica. 2017;64(1):14–26.
4. R. NC. User Verification of Performance for Precision and Estimation of Bias; Approve
Guideline. Clin Lab Standars Inst. 2014;Thrid Edit:106 p. EP15 A3.

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 11- Anexos
Anexo I

Corrida 1 Corrida 2 Corrida 3 Corrida 4 Corrida 5

Replicados
Fecha Fecha Fecha Fecha Fecha

1
2
3
4
5

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