AGROTECNIA DE LEGUMINOSAS

ALIMENTICIAS
Ciclo VI

Profesor
Ing. Ivan Granda Mora, PhD.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA

CARRERA DE INGENIERÍA AGRONOMÍA

ivang100@gmail.com
klever.granda@unl.edu.ec
27 de enero de 2018 1
 ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE?

Área
global de
los suelos
más
infértiles

Más del 40% de la población mundial viven en regiones tropicales

 ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE?
Ciclo del Nitrógeno

Componente
esencial de
ácidos
nucelicos
(ADN, ARN) y
proteínas

N2: 78.6%
 ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE?

• Es la tercera familia en importancia para la biodiversidad a nivel

global (cerca de 20 000 especies).
• Se cultivan en todas las latitudes y altitudes (menos de 0 hasta más
LEGUMINOSAS

de 4000 msnm).
• Recuperación de suelos degradados y erosionados.
• Fuente de alimentación para comunidades vulnerables.
• Alto contenido proteico y minerales (desde 20 hasta 40% de
proteínas).
• Presencia de sustancias antioxidantes.
• Contribuyen al balance del ciclo del nitrógeno a nivel global.
• Establecen el proceso de fijación simbiótica
del nitrógeno con bacterias del suelo.
 ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE?
Entradas de nitrógeno a los ecosistemas

SISTEMAS CANTIDADES
(106 t ha-1 año-1)
PROCESOS QUÍMICOS
Descargas eléctricas y erupciones volcánicas 30 (10.5%)
Incorporación industrial (proceso Haber Bosch) 80 (28.7%)
SUBTOTAL 110 (39.2%)
PROCESOS BIOLÓGICOS
Plantas no leguminosas 9 (3.1%)
Suelos improductivos 10 (3.5%)
Simbiosis Rhizobium-leguminosa 35 (12.3)
Océanos 36 (12.6%)
Bosques 40 (14.0%)
Pastos permanentes 45 (15.8%)
SUBTOTAL 175 (61.4%)
TOTAL 285
 ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE?
Impacto ambiental de los fertilizantes nitrogenados

• Aumento de las producciones de fertilizantes nitrogenados en los últimos 40

años de 3.5 a 80 millones de toneladas por año.
• Gasto incalculable de energía (1 % de la energía producida a nivel global; 200
oC y 200 atm) y aumento de los costos de producción a más de $ 20 billones

USD anualmente.
• Alrededor del 50 % de los fertilizantes nitrogenados aplicados a los cultivos es
absorbido por las plantas, el otro 50% o más es almacenado en el suelo
favoreciendo la erosión, salinidad y otros procesos de erosión (del 10 al 20% se
volatiliza por desnitrificación o causas eólicas, 30 % se lixivia)

• Contaminación atmosférica por el proceso natural de

desnitrificación: 90% de N2 y 10% de N2O (su
concentración en la atmósfera se incrementa 0.25% por
año. La ERM del N2O es 180 veces la del CO2).
 ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE?
Impacto ambiental de los fertilizantes nitrogenados
• Contaminación de las aguas subterráneas y el manto freático
mediante el proceso de nitrificación, debido a la lixiviación y el aumento
de las tasas de NO3, causando la enfermedades cerebrales.
• Riesgos de intoxicaciones químicas por el exceso de NO3 en los
alimentos.
•Disminución y/o eliminación de la FBN debido en gran medida a que es
inhibida por la presencia de N mineral en el medio.
 ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE?
Rangos de fijación de N por leguminosas

Leguminosa Kg N2 ha-1 fijado

Arachys hipogea (maní) 109
Cajamus cajan (gandul) 224
Cicer arietinum (garbanzo) 104
Glycine max (soya) 88
Lens culinaris (lentejas) 83
Lupinus angustifolius (lupinos) 160
Phaseolus vulgaris (frijol) 49
Pisum sativum (chícharo) 75
Vicia faba (haba) 114
Vigna unguiculata (chícharo de vaca) 198
 ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE?
Proceso de fijación simbiótica de N2

• Intercambio de nutrientes entre las

leguminosas y las bacterias del
suelo (Rhizobium).
• Proceso dominado por señales
moleculares entre las plantas y los
microorganismos.
• Formación de un nuevo órgano en
las plantas leguminosas
denominado nódulo radical.
 ¿POR QUÉ ES IMPORTANTE?
Formación de nódulos en las raíces de las plantas
 EFICIENCIA DEL PROCESO SIMBIÓTICO
Grupos de inter-inoculación y asociaciones simbióticas.
Grupo de Inoculación Especies de Género Leguminosa
cruzada Rhizobium hospedero incluida
Grupo de alfalfa S. meliloti Medicago Alfalfa
Melilotus Trebol dulce
Trigonella Alholva
Grupo del trébol R. leguminosarum Trifolium Trebol
biovar trifolii
Grupo del Chícharo R. leguminosarum Pisum Arveja
biovar viceae Vicia Haba
Canthyrus Almorta
Lens Lenteja
Grupo del frijol R. etli, R. tropici, R. Phaseolus Frijol
galagae, R. pisi

Grupo de la soya B. japonicun Glycine Soya

Grupo del caupí Bradyrhizobium spp. Lupinus Altramuz

Arachis Maní
Vigna Caupí
 EFICIENCIA DEL PROCESO SIMBIÓTICO
¿Cómo obtener bacterias eficientes para el proceso?
Nódulos

1 2 3 4 5 6
1. Lavado de los nódulos en agua común.
2. Lavado de los nódulos con agua estéril.
3. Desinfección de los nódulos con hipoclorito de mercurio
(HgOCl2,durante 3´).
1. Lavado de los nódulos en agua estéril
(lavado intenso 3 veces durante 5´).
2. Realización del exudado (trituración de los
nódulos en agua estéril).
3. Realización del aislamiento en cuadrantes
o siembra en agotamiento por estrías.
 EFICIENCIA DEL PROCESO SIMBIÓTICO
Medios de cultivos sintéticos para el crecimiento de las
bacterias.
Componentes Cantidad (g)
Manitol 10
KH2PO4 0.5
MgSO4 0.2
NaCl 0.1
Extracto de levadura 10
Agua destilada 1000 ml
Agar 15
pH 6.7

Componentes Cantidad (g)

Triptona 5
Extracto de levadura 3 Incubación de placas de 28 a 30ºC
CaCl2 (medio autoclavado) 7 mM durante 72 h
 EFICIENCIA DEL PROCESO SIMBIÓTICO
Factores que afectan la nodulación y la FSN
1. Competencia con las cepas nativas y antagonismo con microorganismos
del suelo
• Altos índices de ocupación de las raíces por cepas nativas.
• Movilidad.
• Diferencias quimiotáxicas.
• Tiempo de respuesta al estimulo radical.
• Capacidad genética de las cepas para resistir presiones ambientales.
• Antagonismo por: Penicillium, Aspergillus, Ptotozoos, Pseudomonas,
Flavobacterium, Xanthomonas, Clavibacter, Arthrobacter, etc.
 EFICIENCIA DEL PROCESO SIMBIÓTICO
Factores que afectan la nodulación y la FSN
2. Nitrógeno combinado en el suelo
• Inhibición de la deformación de los pelos
radicales y primeros estadios de la
formación del nódulo.
• Reducción del aporte de energía (ATP),
debido a una disminución de los niveles de
sacarosa en los nódulos (disminución del
envío de fotoasimilados al nódulo).
• Efecto sistémico del NO3.
• Disminución en la afinidad de la
leghemoglobina (Lb) por el O2 debido a la
formación de Nitrosil-Leghemoglobina
(LbNO).
 EFICIENCIA DEL PROCESO SIMBIÓTICO
Factores que afectan la nodulación y la FSN
3. Temperatura del suelo
• Óptima: 20-25 ºC.
• < de 10 ºC afecta irreversiblemente el establecimiento de las
bacterias y la actividad de la nitrogenasa.
• > de 38 ºC afecta irreversiblemente el establecimiento de las
bacterias (desnaturalización de la pared y la membrana) y > de 32
ºC afecta irreversiblemente la actividad de la nitrogenasa, los
pSym y los genes Nod, Nif y Fix.

4. pH del suelo
• Óptimo: neutro o cercano a la neutralidad
• < de 6 y > de 8 afecta el establecimiento de las bacterias y la
nodulación
• < de 4.5 y > de 9 afecta la disponibilidad de nutrientes (Fe, Mo y
P) indispensables para la nitrogenasa.
 EFICIENCIA DEL PROCESO SIMBIÓTICO
Factores que afectan la nodulación y la FSN
5. Humedad del suelo
• Óptima: 65-70% CC.
• Alta humedad atenta
contra la sobre vivencia
de las bacterias.
• Condiciones de sequía
favorece la nodulación
por cepas nativas
adaptadas a stress
hídricos.
 PREPARACIÓN DE BIOFERTILIZANTES
Tipos de biofertilizantes y soportes

Tipos de biofertilizantes:
• Líquidos: se utiliza para la inoculación de los suelos
• Granulados: se utiliza para la peletización de la semilla
• Liofilizados: reconstrucción en medios líquidos o granulados

Tipos de soportes para biofertilizantes:

• Líquidos: nitragina (no convencional) o agua
• Granulados: zeolita, materia orgánica o
compost, turba granulada o fina (más usado)
 PREPARACIÓN DE BIOFERTILIZANTES
Procedimientos para la inoculación de semillas (peletización)

1. Selección del microsimbionte adecuado para el cultivo en cuestión

(grupo de interinoculación)
2. Aplicación del adherente a utilizar
goma arábiga: 1 L para 50 Kg. de semilla
azúcar diluida al 30%
3. Aplicación del inoculante a dosis recomendada
1 Kg. de inoculante para 50 Kg. de semilla (siempre y cuando el
inoculante contenga título mayor de 1x109
10% de la cantidad de semilla
4. Secado al aire y a la sombra
5. Siembra inmediata al secado de las semillas
 PREPARACIÓN DE BIOFERTILIZANTES
Aspectos cualitativos de una cepa microbiana para la
producción de biofertilizante
 Eficiencia en la fijación de nitrógeno
 Habilidad industrial
 Adaptabilidad ecológica
 Estabilidad genética
 Compatibilidad interespecífica y comportamiento frente a factores
limitantes del suelo, tales como:
• competencia con cepas nativas del suelo
• persistencia en ausencia del hospedante.
 PREPARACIÓN DE BIOFERTILIZANTES
Aspectos a tener en cuenta para biofertiliantes de calidad

• Cepa de Rhizobium a utilizar.

• Número de bacterias por gramo de

inoculante (2x109 en fábrica y 1x109 en la
fecha de vencimiento).

• Ausencia de contaminantes y adecuada

esterilización del soporte.

• Adecuado transporte y manejo del

inoculante.

• La conservación debe emplearse en rangos

de 4 a 9 ºC.
 PREPARACIÓN DE BIOFERTILIZANTES
Aspectos a tener en cuenta para biofertiliantes de calidad

• Usar el inoculante específico para cada

leguminosa a sembrar.
• Desde el distribuidor hasta la inoculación,
mantener el inoculante en condiciones adecuadas
• Inocular cada leguminosa por separado y a la
sombra.
• No inocular más semilla que la razonable para
sembrar en un día.
• Inocular en un piso limpio y con implementos no
contaminados.
• Preparar la solución adherente adecuadamente
cubriendo las semillas, lentamente, evitando la
formación de grumos.
 APLICACIÓN DE BIOFERTILIZANTES
• Incrementos de los rendimientos agrícolas de 10 a 40% de forma
directa mediante el proceso de FSN. Sin embargo los resultados
son variables y están a expensas de las cepas y las condiciones
donde se aplican los biofertilizantes.

• Incrementos de los rendimientos agrícolas de 10 a 20% de forma

indirecta mediante la supresión de plagas y enfermedades.
• Localización de bacterias benéficas en sitios de colonización
de microorganismos patógenos.
•Inducción de resistencia sistémica.
 MÉTODOS PARA EVALUAR LA FSN
1. Producción de Materia seca
usado para evaluar gran número de cepas de Rhizobium y líneas de
plantas hospederas.
el incremento de materia seca se correlaciona positivamente con el N
derivado de la fijación.
Requisitos: se utiliza cuando el principal factor limitante para el
crecimiento de las plantas es el N.
2. Diferencia de N total
se utiliza el análisis de Kjeldahl
se obtiene información precisa del porcentaje de N incorporado por las
plantas fijadoras y las no fijadoras
Requisitos: las plantas fijadoras y no fijadoras deben absorber
cantidades similares de N del suelo; se requiere de tiempo (método de
refractancia infrarroja)
 MÉTODOS PARA EVALUAR LA FSN
3. Observación de nódulos
el incremento de la nodulación se correlaciona positivamente con la
cantidad de N fijado.
cuando se mide la nodulación en conjunción con otras medidas son
especialmente útiles para estimar la FSN.
Requisitos: se requiere de la presencia de nódulos en las raíces de las
plantas.
4. Actividad de reducción de acetileno (ARA)
las raíces noduladas son incubadas en acetileno y el etileno producido
en un tiempo determinado es medido por cromatografía de gases
estima cualitativamente la actividad de la enzima nitrogenasa
Desventajas: no se utiliza para cuantificar las tasas de fijación de N; se
requiere de equipamiento; la atmósfera de incubación disminuye la
actividad de la nitrogenasa. Solo se disminuye un 10% del aire del
contenedor donde se incuban las raíces.
 MÉTODOS PARA EVALUAR LA FSN
5. Solutos en el xilema
comparación de los compuestos nitrogenados de la savia del xilema de
plantas fijadoras y no fijadoras (N2 fijado o N tomado del suelo).
la cantidad de solutos en el xilema se correlaciona positivamente con la
estimulación en la fijación de N
Exportación de fuentes nítricas en el xilema de las leguminosas
Leguminisas tropiacales (frijol, soya, caupí, etc.): ureidos (alantoína y
ácido alantóico)
Otras leguminosas (maní, lupino, haba, alfalfa, trébol etc.): amidas
(aspargina y glutamato)
Requisitos: se requiere de cultivo fijador y no fijador de la misma
especie; el método es usado preferentemente para leguminosas
tropicales por presentar menos variación en la respuesta a los cambios
en las fuentes de N; requiere de equipamiento necesario
 MÉTODOS PARA EVALUAR LA FSN
6. Técnicas isotópicas de 15N
a) Uso de gas 15N2 (Burris y Miller, 1941)
permite conocer con precisión fenómenos cuantitativos y cualitativos de
removilización de N en las plantas
la concentración de 15N en las plantas expuestas al gas (15N2) es mayor
que la abundancia natural (0.3663%) si ocurre la fijación
la cantidad de 15N que es detectada en la planta provee una estimación
de la proporción de N en dicha planta derivado de la atmósfera durante
el tiempo de incubación
Requisitos: solo puede ser usado en experimentos de laboratorio o
invernadero debido a que las plantas necesitan de cámaras que no
resisten condiciones prolongadas; el cultivo no fijador debe tener tasas
de absorción similar al cultivo fijador; requiere de equipamiento para la
detección y medición (espectrómetro de masa)
 VENTAJAS DE LA APLICACIÓN DE
BIOFERTILIZANTES
• Disminución y/o eliminación de la aplicación de fertilizantes nitrogenados
• Disminución del desbalance del ciclo del nitrógeno y la contaminación
ambiental
• Aumento de la disponibilidad de microorganismos benéficos en los
ecosistemas
• Incremento de las tasas de FSN
• Incremento de rendimientos agrícolas de los cultivos
• Aumento de la calidad nutricional de los alimentos
• Disminución de los costos de producciones agrícolas
• Aumento de la calidad de vida de comunidades rurales
• Reabilitacion de ecosistemas degradados
• Aplicación de prácticas sostenibles para la producción agrícola
 ¿COMO MEJORAR LA FSN? PERSPECTIVAS

I. Programas de selección de leguminosas (cultivares o líneas)

adaptadas a una zona en particular y altamente eficientes en la FSN
con cepas nativas
II. Considerar las necesidades nutricionales de la planta seleccionada de
forma tal que la FSN no se vea afectada. Considerar: cantidad de N a
aplicarse; época de siembra; temperatura y fotoperiodo
III. Selección de cepas nativas altamente competitivas, persistentes y
eficientes para reducir el N2 indispensable
IV. El sistema de inoculación ha sido una consideración limitante en el
éxito de los programas de campo. Existen una gran cantidad de
soportes y técnicas, pero hasta el presente no existe realmente una
tecnología satisfactoria que permita introducir microorganismos que
puedan competir e incluso desplazar a las poblaciones nativas.