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DISEO Y CONSTRUCCION DE BIORREACTORES DE

LABORATORIO
I.

INTRODUCCIN
Un antibitico es una sustancia qumica producida por un organismo vivo que
muestra actividad inhibidora o germicida frente a microrganismos in vivo o in vitro.
Usualmente la definicin se aplica a los compuestos producidos por
microorganismos. Son metabolitos secundarios, producidos en la mayora de los
casos despus de la fase de crecimiento.
Los primeros procesos para la produccin de penicilina, que fue el primer
antibitico conocido, implicaban el crecimiento de Penicillium notatum sobre la
superficie de un medio lquido. El periodo de incubacin era usualmente de 6-12
das y posteriormente la penicilina se extraa con solventes previa separacin del
micelio. La historia de las innovaciones en la produccin de penicilina comenz en
1945 con el descubrimiento de una nueva especie, P. chrysogenum, la cual
permiti incrementar los rendimientos del producto.1
La produccin de penicilina como otros proceso biotecnolgicos est dominado
por su aspecto competitivo entre los grandes laboratorios productores, que
realizan permanentes esfuerzos de mejoramiento en cada rea del proceso; el
proceso a grandes rasgos implica el cultivo del microorganismos en reactores de
volumen creciente, lo que inicia con el diseo, construccin y monitoreo de
biorreactores a nivel de laboratorio.
El biorreactor ha sido concebido como el centro del bioproceso, que viene hacer el
recipiente o deposito en el que se produce una serie de reacciones biolgicas a
la cual se le adiciona uno u otro depsito a fin de dar condiciones ptimas para
que se desarrolle el bioproceso, considerndose adems, las caractersticas de las
fases abiticas y biticas. 2
Los primeros fermentadores industriales fueron tanques abiertos de madera para
la produccin de bebidas alcohlicas. Hasta antes de la dcadas de los 40s la
produccin de metabolitos microbianos que requeran oxgenos se llevaba en un
cultivo slido; ejemplo de ello son los el cido ctrico y la penicilina. 2
Los biorreactores pueden ser construidos con material poco sofisticado. Pero el
vidrio y acero inoxidable son los ms requeridos a nivel de escala de laboratorio.
La ingeniera de los biorreactores se sustenta en varios principios fundamentales,
entre los cuales se puede incluir: el balance de materia prima, las cinticas
implicadas en el proceso y los procesos de micromezclado que predominan en el
biorreactor durante el bioproceso.1
Para la produccin de penicilina, los microorganismos productores del antibitico
se cultivaran en un medio y en condiciones ptima para favorecer el crecimiento y

lograr la produccin de un rendimiento mximo del antibitico, ests condiciones


se lograran al disear y construir un biorreactor que cumplan con todas las
necesidades esenciales de este bioproceso.
II.

OBJETIVOS
Disear, construir y manipular un biorreactor a escala de laboratorio para la
produccin de penicilina.

III.

MATERIALES

3.1 Materiales varios

IV.

Frasco de vidrio de 4L
Botellas de vidrio
Bomba de aire
Motor de 12V
Piedra dispersadora de aire
Turbina de plstico de 6 cm.
Manguera de laboratorio (3m)
Varillas de vidrio
Varilla de metal
Vlvulas pequeas de plstico
Conectores de plstico
Paliglobos
Microporoso
Soldador
Pegamento de silicona
Pegamento SOLDIMIX
Hilo pabilo
Tijeras

PROCEDIMIENTO

a. En una concesin de mesa se escogi el producto a obtener en el biorreactor.


b. Se realiz una revisin bibliogrfica sobre el bioproceso y el producto que se
desea obtener, as como de los modelos de biorreactores usados para tal
propsito.
c. Con la informacin obtenida, se dise el biorreactor teniendo en cuenta las
necesidades de aireacin-agitacin, control del proceso, temperatura de proceso,
pH de produccin, diseo asptico y la instrumentacin.
d. Se plasm el diseo del biorreactor, y realiz la lista de materiales necesarios
(vlvulas, frascos de vidrio, mangueras, etc.)
e. Se realiz la adquisicin de los materiales para la construccin del biorreactor.
f. Se construy el biorreactor (cilndrico aireado-agitado) segn los siguientes pasos:

f.1. SISTEMA DE AIREACION


Para el sistema de aireacin se usaron tres botellas de vidrio iguales.
En las tapas de cada botella, se hicieron dos orificios equidistantes en el
centro de la superficie.
Posteriormente, se cortaron tres paliglobos de 14cm de largo y tres
paliglobos de 6cm de largo.
Los paliglobos se colocaron en los orificios, alternando un largo y un corto
por cada tapa de las botellas.
Se cortaron dos fragmentos de la manguera de laboratorio con una longitud
de 20 cm aprox., y dos fragmentos con una longitud de 50 cm.
El armado del sistema de aireacin se realiz usando los fragmentos de
manguera de 20 cm: se une un extremo de la manguera con el paliglobo
pequeo de la botella 1 y el otro extremo con el paliglobo largo de la botella
2; as mismo, el paliglobo pequeo de la botella 2 se une con el paliglobo
grande de la botella 3 haciendo uso de otro fragmento de manguera.
El paliglobo largo de la botella 1 se uni por un extremo del fragmento de la
manguera de 50 cm y el otro extremo se uni al orifico de salida del
aireador de pecera.
El paliglobo corto de la botella 3 se uni por un extremo del otro fragmento
de la manguera de 50 cm y el otro extremo se uni al orifico acondicionado
para el sistema de aireacin en el biorreactor.
f.2. SISTEMA DE AGITACIN
En la tapa del frasco de vidrio biorreactor, se realiz un orificio en el
centro de la superficie con ayuda de un taladro pequeo.
En la superficie externa se coloc un pedazo de microporoso del tamao
del motor a usar. As mismo, sobre este soporte se hace coincidir el eje del
motor con el orificio de la tapa.
Se sujet la tapa, el soporte y el motor atndolo con hilo pabilo, para evitar
el desarmado del sistema.
Por la superficie interna de la tapa, se uni y sujeto un extremo de la varilla
de metal con el eje del motor.
El otro extremo de la varilla, se uni la turbina de plstico, haciendo uso del
pegamento SOLDIMIX.
Se puso en funcionamiento el motor, realizando las conexiones adecuadas
con el adaptador, haciendo uso de un soldador.

f.3. BIORREACTOR
En el frasco de vidrio biorreactor se realiz un orificio en un costado de la
parte inferior (a unos 2 cm del fondo), ste orificio permitir la entrada de la
manguera proveniente del sistema de aireacin.

En el lado opuesto, a la mitad del frasco se realiz otro orificio, en el cual


se coloc una vlvula pequea de plstico (toma de muestra),
asegurndolo con pegamento SOLDIMIX y evitar la fuga de muestra.
Internamente, en el fondo del envase, se peg la piedra dispensadora de
aire. As mismo fue unida a la manguera proveniente del sistema d
aireacin.
Las varillas de vidrio (bafles), de 5cm aprox., fueron colocadas en cuatro
puntos opuestos en los costados internos del frasco.
Finalmente se mont el biorreactor adicionando el sistema de aireacin y el
sistema de agitacin al frasco de vidrio biorreactor, y se acondicion un
soporte de madera para un mejor funcionamiento.
g. Se hizo una simulacin del funcionamiento y monitoreo del biorreactor, para
asegurarse de evitar problemas al momento de la produccin.
V.

RESULTADOS
a. Sistema de aireacin

MANGUERAS DE
LABORATORIO

PALIGLOBO

AIREADOR

Botella
1

Botella
2

FRASCOS
DE VIDRIO

b. Sistema d
c.
d. Sistema de agitacin

Botella
3

MOTOR
ADAPTADOR
TAPA DEL
BIORREACTOR

VARILLA DE
METAL

TURBINA

e. Biorreactor

f.
MODELO
Cilndrico aireado-agitado
VOLUMEN
DEL
TAMBO
4L
DIMENSIONES DEL Dimetro:
BIORREACTOR
Altura:
MATERIAL
Vidrio

Hoja tcnica del biorreactor.

* Agitador tipo turbina


*Tensin nominal: 12V
* Velocidad: 73 - 100 rpm

AGITACION
VOLUMEN
TRABAJO

DE

DEFLECTORES
AIREACIN

VI.

1.5 L
Cuatro (4) de vidrio
simple
* Aireador de pecera
*Esterilizacin qumica:

DISCUSIN

La esterilidad es la caracterstica ms importante de los biorreactores; ya que se


elimina o retira microrganismos de un biorreactor y de todas las tuberas conectadas a l
con el propsito de asegurar que nicamente estn presentes biocatalizadores,
microorganismos o enzimas, responsables de efectuar la bioconversin de materias
primas a un producto especificado.
Se puede realizar la esterilizacin mediante: Calor hmedo (autoclave o chorro de vapor),
Radiacin (rayos UV), Producto qumico (lquidos o gases), Separando los organismos
viables mediante un procedimiento fsico como la filtracin (filtros de superficie o de
profundidad).
Para la produccin del antibitico penicilina, se ha construido un biorreactor del tipo
aireado- agitado cilndrico de vidrio, el cual tiene una relacin en cuanto a su altura y
dimetro, la eleccin de material de vidrio es porque posee ventajas tales como que
permite observar el proceso, resiste la presin, resiste las vibraciones de motor usado
para la agitacin, y puede esterilizarse sin problemas.
La agitacin se realizar mecnicamente y emplear una hlice; la cual es la tercera parte
del dimetro del cilindro, esto es importante ya que va transferir la energa, dispersar el
aire y mezclar homogneamente todos los componentes que van a ser utilizados en el
bioproceso para la produccin de penicilina.
Tambin al biorreactor se le adapto cuatro bafles simtricos que se van a encargar de
reducir los vrtices del lquido y por lo tanto mejoran la mezcla en el fluido en el
bioproceso. As como cortadores de espuma, los cuales van eliminar la espuma excesiva
mejorando el rendimiento del bioproceso para la produccin de penicilina.
Para la aireacin se usar una bomba de aire, este aire generado se har pasar por un
sistema de purificacin donde se usar sustancias como: Sulfato de cobre al 5% y Cloruro
de sodio al 23%, en este proceso se aprovecha la disociacin que sufren estos
compuestos qumicos en el agua (ion cobre y ion cloro) que son de naturaleza
antimicrobiana, y por ltimo para asegurar que este aire no lleve ningn residuo se har
pasar tambin por agua destilada estril. El aire estril se har llegar al biorreactor por la
parte inferior y con un difusor de aire cilndrico se facilitar la transferencia de oxgeno en

el medio, este proceso es esencial para obtener rendimientos ptimos de penicilina, ya


que es necesario para el desarrollo de mohos que son microorganismos aerobios.
La agitacin y aireacin del biorreactor se realiza para alcanzar los siguientes propsitos:
1. Suministra el oxgeno necesario a los microrganismos para que se realicen
apropiadamente sus actividades metablicas
2. Mantener en suspensin los microorganismos en el biorreactor de tanque agitado.
La agitacin de caldo nutritivo se lleva a cabo mediante las dos formas siguientes:
1. Por el movimiento de dispositivos mecnicos tales como impulsores de tipo
turbina.
2. Por el movimiento ascendente de burbujas de aire.
Por lo tanto, la intensidad de agitacin depende de la velocidad de movimientos de los
impulsores y de la velocidad de aireacin.
La agitacin puede describirse mediante el tiempo de mezclado, el cual se define como el
tiempo que transcurre despus de la adiccin de un trazador para alcanzar un
determinado grado de homogeneidad, generalmente del 95%, de los lquidos contenidos
en el biorreactor.
El medio se esterilizar directamente en el biorreactor mediante la exposicin a la luz
ultravioleta, durante 30 minutos a 20 cm de distancia de la exposicin de la luz, esto es
necesario para reducir al mximo el riesgo de contaminacin del sistema fermentativo.
Se realizar la medicin de varios parmetros en el bioproceso : volumen (2L), la
temperatura ptima para la produccin de penicilina que debe alrededor de 24C, regular
el pH es esencial durante la fermentacin, ya que a un pH alto no excesivamente bajo
origina considerables prdidas de penicilina. Segn Moyer y coghill, la prdida de la
penicilina es importante fuera del intervalo de pH 5 a 7,5. En una fermentacin normal el
pH sube de 4 hasta casi 8.
El pH del medio resulta afectado por el tipo y cantidad de glcidos presentes, existencia
de amortiguadores y otros factores.

VII.

CONCLUSIONES

Se consider el uso de un reactor por lotes agitado de vidrio, debido a que se


proporcionan un tiempo de contacto mayor entre las burbujas que ascienden y
el lquido, as, la presin hidrosttica es mayor en el fondo del reactor, adems,
la aireacin permite el suministro necesario de oxgeno a los microorganismos,
incluso, la agitacin ayuda a mantener las condiciones uniformes dentro del
reactor (Doran, 1998)

Se dise una adecuada aireacin esencial para obtener los rendimientos


ptimos de penicilina, ya que los mohos son organismos aerobios, y la
obtencin de energa para los procesos sintticos, incluso la constitucin de las
clulas de energa requiere la presencia de oxgeno.
Los fermentadores agitados de utilizan normalmente para cultivos aerbicos, el
suministro de oxgeno es suministrados mediante la creacin de burbujas de
aire debajo del impulsor, lo cual permite que se disperse mejor el oxgeno. Se
emplear una turbina tipo Rushton, ya que sta tiene un diseo sencillo, cabe
destacar que la agitacin no daa las hifas (Akitson, 1986).

VIII.

REFERENCIAS BIBLIGRAFICAS

(1)Atkison, B. 1986. Reactores Bioqumicos. Editorial Revert.S.A.


Barcelona. Espaa.
(2) Ertola, R; O. Yantorno y C. Mignone. 1994. Microbiologa
Industrial. OEA.USA
(3) Doran, P., 1998. Principios de ingeniera de los bioprocesos. s.l.:s.n
(4) Glnur, B., Cenk, . & Ali, C., 2001. A modular simulation package for
fed-bactch fementation:Penicillin production.

IX.

ANEXOS