Prctica 3.

Hidrlisis de una protena y ensayos para

protenas y aminocidos

Preparacin de disoluciones

Hidrlisis de
Previo al Grenetina sin
grenetina Grenetina hidrolizada y
seminario 1 Disolucin de Albmina
(disolucin A) neutralizada (Disolucin hidrolizar (disolucin
1 0 (Disolucin D)
B) C)
Matraz fondo
plano 200mL
0 Grenetina
3 0 Colocar: 5mL de disolucin A Vaso de
1g grenetina precipitados de
100mL Agitar 1 clara de
HCl 10mL HCl concentrado Neutralizar 10 seg
huevo
10mL agua destilada 0
3 1
NaOH al 10%
0 2.5g de grenetina
Calentar Adaptar refrigerante a NaOH 100mL agua destilada
0 0
por 35 min. reflujo
HO Agregar100mL
Esta HO
neutralizada?
Agregar 0.5 g de Agitar
carbn activado
No Si
Filtrar con un
Calentar Prueba de trozo de manta
identificacin de cielo.
Adicionar mas
Filtrar Filtrar
NaOH

Para:
Determinar el Cromatografa
punto de Prueba de Ninhidrina
neutralizacin Accin reguladora de
con papel pH aminocidos
 Reacciones de identificacin

Xantoprotica Precipitacin Biuret

Tubos de ensaye
Tubos de ensaye
Rotular 6 tubos de
1mL 1mL 1mL 1mL
1mL HO ensaye
disolucin A disolucin D disolucin A disolucin D

Adicionar
Agregar a cada tubo Agregar a cada tubo

1) o.5 mL 2) o.5 mL 3) o.5 mL 4) o.5 mL 5) o.5 mL

2.5mL NaOH al 10% disolucin 6) o.5 mL
0 2.5mL NaOH NaOH y o.5 NaOH y 0.5 NaOH y
0.5mL disolucin de D disolucin A
3 1 HNO (testigo) mL mL disolucin D
OX acetato de plomo disolucin C disolucin A
HNO

Calentar a bao
Mara 5
min Calentar y agitar
hasta ebullicin
0 Agregar a cada tubo 2 mL
Hay 2 0 sol. De CuSO al 2%
coloracin?
CuSO
Seguir
calentando

Agitar, observar y
concluir
Agregar NaOH al
10% hasta pH
bsico

Observar
coloracin
 Reacciones de identificacin

Reguladora de
cido aminocidos
Ninhidrina
nitroso

Colocar 1mL de Adicionar 1

Rotular 5 tubos Rotular 4 tubos disolucin B 1mL HO 2 0
de ensaye de ensaye
Adicionar Fenolftalena
1) 1.5 mL
2) 0.5mL 3) 0.5mL 4) 0.5mL 0 indicador rojo
1) 0.5mL 5) 0.5mL
disolucin disolucin disolucin 2 0 Congo
HO disolucin 3mL HCl
B C D 1% 2) HCl 1N Repetir
Rojo Congo
aminocido experimento
patrn con
Observar
fenolftalena
agregando
1) 1mL 2) 1mL 3) 1mL 4) Testigo NaOH 0.1 N
disolucin disolucin disolucin sin
Agregar a cada tubo 0.5 A C D protena
mL disol. Ninhrna al 3% Cromatografa en
capa fina

0 1mL de Aplicar muestra

Calentar a bao Mara
3 1 nitrito de de disolucin B
sodio al 5%.
Nitrito de sodio
Aplicaciones de
5 aminocidos
Observar
min Observar patrn

Mezcla de
isopropanol-agua
7:3

Eluir

Identificar
Secar y revelar con
aminocidos
Ninhidrina
con R.F