MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL:

EMPLEO DE MICROORGANISMOS COMO

UNIDADES DE
PRODUCCIN, DE CONTROL O DE DIAGNOSTICO
VENTAJAS DE LOS MICROORGANISMOS COMO UNIDADES DE PRODUCCIN
Rapido crecimiento debido a la favorable relacin rea/ volumen
Diversidad metablica
Estabilidad genetica
Crecimiento en gran escala y separacion facil de productos y sustratos
* Adaptabilidad a distintos ambientes y condiciones de crecimiento (sustratos slidos,
lquidos, frascos, fermentadores)
Incrementar la productividad
* Facilidad de manipulacin gentica
Modificar los productos finales
* Habilidad para sintetizar enantimeros especficos.
* Tecnologias limpias

Los microorganismos pueden emplearse como :

Productores de metabolitos primarios y secundarios

Productores de biomasa y sus constituyentes (Protenas y aminoacidos,
Vitaminas, Acidos Nucleicos, Polmeros de H de C y esteres, Biomasa)

Huespedes para la expresion de genes homologos y heterologos

Unidades de Biotransformacion

METABOLITOS PRIMARIOS
1- Componentes esenciales y productos formados por los microorganismos:
proteinas, acidos nucleicos, polisacaridos (dextranos, alginatos, gelanos,
xantanos) y poliesteres (PHB y plasticos), acidos grasos (saturados e
insaturados), esteroles (ergosterol)
2- Derivados del metabolismo intermedio: azucares (fructosa, ribosa,
sorbosa), cidos organicos (gluconico, cido lctico, ctrico, acetico,
propionico, succinico, fumarico), alcoholes (xilitol, etanol, glicerol,
sorbitol, butanol), aminoacidos (Lys, Thr, Glu, Trp, Phe), vitaminas
(carotenos, B2, B12), nucleotidos saborizantes (acidos inocinico y
guanilico), polisacaridos y poliesteres de reserva.
Microorganismos productores: bacterias, levaduras y hongos.

Etanol
Producido por :
1- Levaduras
* Saccharomyces (a partir de hexosas)
* Kluyveromyces fragilis (a partir de
lactosa)
* Cndida o Pichia (a partir de
pentosas)
2- Bacterias* Clostridium (a partir de celulosa)
(termfilos, anaerobios)
* Zymomonas
3- RecombinantesE.coli recombinante: Introduccin de los
genes Alcohol deshidrogenasa y piruvato
decarboxilasa de Zymomonas.

Pir

acetaldehido

etanol

Aminocidos
Principales productores:
Bacterias
de
los
gneros
Corynebacterium y Brevibacterium
* Mutantes auxotrofas y regulatorias
* Mutantes alteradas en la secrecion
* Cepas recombinantes

Principales productos:
Acido glutmico 600,000
U$S 915 milliones
Lisina
U$S 500 milliones
Fenilalanina U$S 200 millones
Aspartato U$S 43 milliones

Toneladas/ ao

Vitaminas

Vitamina B12Microorganismos productores: Bacterias de los

generos Propionibacterium shermani y
Pseudomonas denitrificans.
Produccin: 150 mg/ L.
BiotinaMicroorganismo productor: cepas modificadas
(mutantes) de Serratia marcescens.Produccin:
150-600 mg/ L.
Vitamina B2 (Riboflavina)Microorganismos productores: -hongos
(Eremothecium ashby y Ashbya gossypii)
Candida sp
Bacillus subtilis recombinante
Produccin: 20 -30 g/ L

PRODUCCION DE METABOLITOS SECUNDARIOS

Los metabolitos secundarios funcionan en los
organismos que los producen como:
Reguladores del crecimiento
Ionoforos
Defensa frente a otros microorganismos
(antibiticos, toxinas, pesticidas)
Agentes de simbiosis
Efectores de diferenciacin
Respuesta a Stress

ANTIBIOTICOS
Desde 1940 se han introducido una gran
variedad de molculas con actividad antibitico
para su uso en medicina y agricultura.
En el mercado hay 160 antibiticos en uso por un
valor de 23,000 millones de U$S.
Se han descripto 6,000 antibiticos de los cuales
4,000 se han aislado de Actinomycetes, y se
describen alrededor de 500 antibiticos nuevos por
ao. Una sola cepa de Streptomyces hygroscopicus
produce aproximadamente 200 antibiticos.
Muchos nuevos antibioticos se obtienen por semisintesis, es decir, por modificacion de antibioticos
existentes

INHIBIDORES ENZIMATICOS
Ej. Estatinas y acido zaragozico
Inhibidores competitivos de
la
HMGCo A reductasa y escualeno
ciclasa, por lo cual se emplean como
anti- colesterolemicos.
Microorganismo productor:
Aspergillus terreus (hongos)
Ej. Acido clavulanico (inhibe
penicilasas)
Ej. Acarbosa: Inhibidor de la
glucosidasa intestinal. Disminuye la
hiperglucemia y tambin la sntesis de
triglicrido en los tejidos adiposos, el
hgado y las paredes intestinales de
individuos obesos, diabticos o con
trastornos de la lipemia.
Microorganismo productor:
Actinoplanes (actinomycetes)

BIOPESTICIDAS
Se aislaron en un principio como agentes
antibiticos y luego, en las sucesivas
investigaciones, surgieron nuevos usos o
usos mas especficos.
Fungicidas: kasugamycin, polyoxins,
anfotericina
Insecticidas: toxina de Bacillus
thuringiensis
Herbicidas: bialaphos
antihelminticos: avermectinas
Reguladores del crecimiento de plantas:
giberellinas
Inmunosupresores: ciclosporinas
Agentes antitumorales: mitomycin,
bleomycin
Antivirales: inhibidores de la
transcriptasa reversa y de la proteasa de
HIV (ritonavir, nevirapine, etc)

EMPLEO DE LOS MICROORGANISMOS COMO VECTORES

DE GENES HETEROLOGOS
Los principales huespedes que se emplean para la produccion de proteinas
recombinantes son E. coli, B. subtilis, S. cerevisiae, Pichia pastoris,
Hansenula polimorpha y Aspergillus niger.
Quimosina recombinante (Clonado del gen de la quimosina
bovina en una levadura). Se emplea para la coagulacion de la
caseina, en la obtencion de quesos.

Insulina humana (en E.coli)

Hormona de crecimiento humana (en E.coli y
levaduras)
Vacuna Hepatitis (en levaduras )
Farmacos (interferon 2 alfa)
EMPLEO DE PLANTAS TRANSGENICAS CON GENES
BACTERIANOS CLONADOS (bt)

MAIZ Y ALGODON BT

Uso de Microorganismos en biotransformaciones

Reacciones Quimicas realizadas por microorganismos:
Oxidaciones
* Hidroxilacion : introduccion de grupos HO con regio y estereo especificidad.
Ej obtencion de esteroides
Produccion de 11OH derivados y eliminacion de cadena lateral (cortisol,
prednisolona, testosterona, etc)
* Epoxidaciones
* Desaturaciones
* Rupturas oxidativa de anillos

Reducciones
Reacciones hidroliticas
Condensaciones

Resolution of b-amino acid esters using P. cepacia lipase.

Resolution of pipecolic acid by oxidation with D-amino acid oxidase and

recycling of the achiral oxidation product.

Overexpressio
n in E.coli

Ingenieria metabolica: ruta artificial para la

obtencion de hidrocortisona en levaduras
Artificial pathway for the
biosynthesis of the
hydrocortisone as rebuilt
in yeast

The enzymes in red come

from human, bovine and
plant organisms and their
genes were engineered
before introduction in yeast
cells.

Those in blue are original

yeast enzymes whose genes
were modified to change
their expression levels.

The green pathway is the

main pathway for
hydrocortisone production,
the red one corresponds to
controlled side reactions
and the yellow one to
secondary biosynthesis
pathway coexisting with
the major green one.

PRINCIPALES ETAPAS DE UN PROCESO DE

PRODUCCION
Bsqueda y seleccin de microorganismos (Screening)
Organismos mesofilos
Organismos extremofilos
SI BIEN LOS MICROORGANISMOS SON BUENOS PORDUCTORES DE UNA
GRAN VARIEDAD DE COMPUESTOS, LOS PRODUCEN EN BAJA
CANTIDAD, POR LO QUE SE REQUIERE :

Aumentar los rendimientos mediante:

Obtencin de mutantes (tecnicas de mutagnesis, recombinacin gentica, fusin
de protoplastos)
Empleo de tecnologa de DNA recombinante (para aumento del dosaje gentico
de enzimas claves, utilizacin de nuevos sustratos, etc).
Diseo y seleccin de medios de cultivo que maximicen la produccion,
disminuyan los costos o faciliten la recuperacion de productos.
Diseo y seleccin de las condiciones y sistemas de cultivo mas convenientes

PRINCIPALES PRODUCTOS
PRODUCTO

ORGANISMO

PRODUCCION
(Ton/ao)

Solventes
Etanol
Acetona/butanol

Saccharomyces cerevisiae
Clostridium acetobutylicum

20 millones
2000

Biomasa
Starters para alimentos
Proteina unicelular

Levaduras y bacterias lacticas

Candida utilis

500,000
50,000

Acidos organicos
Acido citrico
Acido gluconico
Acido lactico

Aspergillus niger
Aspergillus niger
Lactobacillus delbrueckii

250,000
50,000
50,000

Aminoacidos
Acido glutamico
Lisina
Fenilalanina
arginina

Corynebacterium glutamicum
Brevibacterium flavum
Corynebacterium glutamicum
Brevibacterium flavum

300,000
30,000
2000
1000

PRODUCTO

ORGANISMO

PRODUCCION
(Ton/ao)

Enzimas
Proteasas
Alfa-Amilasas
Glucoa-amilasa
Glucosa isomerasa
Pectinasa
Renina
otras

Bacillus spp
Bacillus amyloliquefasciens
Aspergillus niger
Bacillus coagulans
Aspergillus niger
Mucor o levaduras recombinantes

600
500
500
500
100
50
50

Propionibacterium shermanii
Eremothecium ashbyii

10

Corynebacterium diphteriae
Clostridium tetani
Bordetella pertussis
Virus atenuado crecido en rion de mono
o celulas diploides humanas
Idem anterior
Antigenos de superficie expresados en
levadura

< 0.1

Claviceps paspali

Vitaminas
B12
Riboflavina
Vacunas
Difteria
Tetanos
Pertussis
Polio
Rubola
Hepatitis B

Alcaloides del ergot

PRODUCTO

ORGANISMO

PRODUCCION
(Ton/ao)

Pigmentos
Shikoninas
Beta-carotenos

Lithospermum (plantas)
Levaduras

< 0.1

Proteinas de uso teraputico

Insulina
Hormona de crecimiento
Eritropoyetina
FactorVIII-C
Activador del plasminogeno
Interferon alfa2

E. coli recombinante
E. coli recombinante o celulas de
mamfero recombinante
celulas de mamfero recombinante
celulas de mamfero recombinante
E. coli recombinante

< 0.1

Antibioticos
Penicilinas
Cefalosporinas
Tetraciclinas
Macrolidos (eritromicina)
Polipeptidicos (gramicidina)
Aminoglicosidos (estreptomicina)
Aromticos (griseofulvina)

Penicillum chrysogenum
Cephalosporium acremonium
Streptomyces aureofaciens
Streptomyces erythreus
Bacillus brevis
Streptomyces griseus
Penicillum griseofulvum

80,000
15,000
15,000
10,000
2,000
1,000

Insecticidas
Esporas bacterianas

Bacillus thuringiensis

< 0.1

Anticuerpos monoclonales

Celulas de hibridoma

< 0..01