LAB.

MICROBIOLOGÍA

PRACTICA N° 5

GRUPO: 2A2

TEMA: Actividad Enzimática de los Microorganismos

ESTUDIANTES:

✔ Leon Murrugarra, Manuel Sebastian

✔ Rojas Ccorahua, Susan Nayely

✔ Marcos Villanueva, Gustavo Adolfo

✔ Ramos Villon, Tracy Gabriela

DOCENTE:

● Loayza Gutiérrez, Lillyan Teresa

Lima - 2023

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 INTRODUCCIÓN:

Las enzimas son sumamente vitales para llevar a cabo las actividades metabólicas necesarias

para la supervivencia y el crecimiento celular. Según su función, las enzimas se clasifican en

diferentes categorías, siendo las hidrolasas un grupo fundamental en el metabolismo de

carbohidratos, lípidos y proteínas, entre otros compuestos. En el caso de los

microorganismos como; Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis.

estos suelen producir enzimas extracelulares para digerir sustancias y de esta forma obtener

nutriente para crecer y multiplicarse, gracias a esto se pueden identificar debido las

características de cada bacteria (si utiliza el almidón o no, si cuenta enzimas para hidrolizar

la caseína o no, etc). En la presente práctica se investigará la presencia de enzimas

extracelulares en algunas bacterias, incluyendo amilasa, gelatinasa, hidrolasa de la gelatina,

hidrolasa de la caseína y lipasa. El objetivo de esta práctica es conocer las técnicas de

siembra en placa Petri y tubos de ensayo, aislar colonias microbianas, describir la

morfología de las colonias aisladas y desarrollar habilidades en el trabajo de laboratorio. Al

entender cómo funcionan las enzimas y cómo se pueden detectar en microorganismos

específicos, se puede ampliar el conocimiento sobre la importancia de estas proteínas para la

vida en general.

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:

1. Realizar las pruebas de comprobación de actividad enzimática de algunos

microorganismos.

2. Identificar los microorganismos estudiados mediante estas técnicas de prueba.

3. Desarrollar habilidades en el trabajo de laboratorio.

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MATERIAL:

- Cultivo de Microorganismos en agar cuña de 18-24 horas: Escherichia coli,

Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis.

- Placas Petri con agar almidón, Agar gelatina, Agar caseína, Agar grasa (5 de cada

medio)

- Asa de kölle (2)

- Mechero Bunsen

- Gotero con 25 ml de solución de HgCl2

- Gotero con 25 ml de Lugol

- Gotero con 25 ml de solución de CuSO4

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PROCEDIMIENTOS:

1. Utilizando la aguja de kölle, colocar una estría central de cada cultivo en las placas con

agar almidón, agar gelatina, agar caseína, agar grasa.

2. Invertir las placas e incubar a 37° C por 24 horas.

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RESULTADOS:

1.Hidrólisis de la Caseína: 4. Hidrólisis de los lípidos:Positivo

No hubo Hidrólisis.
2.Hidrólisis de la
Gelatina: Positivo
(Salmonella spp, E.Coli)
Hubo Hidrólisis de la
gelatina por lo que aparece
una zona clara.
(S. aureus)
Se producio la lipolisis ya que se
presento un halo de color verde
azulado, lo que indica la producción de
la enzima lipasa.

Negativo (S.aureus,Bacillus
subtilis)
La gelatina no hidrolizada
forma un precipitado blanco
opaco con el reactivo.

3. Hidrólisis de
almidón:Positivo(Bacillus
subtilis)
Se evidenciaron zonas
transparentes alrededor de
las colonias bacterianas
indican la hidrólisis del
almidón, como
consecuencia de la actividad
β-amilasa.

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 TABLA DE RESULTADOS:

Microorganismo Agar almidón Agar gelatina Agar caseína Agar grasa

E.coli - positivo negativo negativo

S. aureus, - negativo negativo positivo

Salmonella spp - positivo negativo negativo

Bacillus subtilis positivo negativo negativo negativo

DISCUSIÓN: Se comparan nuestros resultados con los demás resultados obtenidos por

nuestros compañeros y se llegaron a los siguientes resultados:

E.Coli:
Con respecto al agar de gelatina, se le agregó cloruro de mercurio, este reaccionó de forma
positiva, evidenciando una zona clara, indicando la ausencia del precipitado en la zona del
crecimiento bacteriano, comparándolo con otro resultado de una universidad, nos indica que
salió de manera adecuada nuestra muestra.

S- Aureus:
Para este caso la S.aureus fue la única bacteria que dio positivo con el agar grasa, por lo cual

se entiende que hubo lipolisis, comparando nuestra muestra con otro grupo de laboratorio

que le dio el mismo resultado, podemos decir que hubo una coloracion en la zona de

crecimiento bacteriano, de color azul verdoso. El cambio se debe a que hay presencia de

lipasa.

Salmonella spp:

Se utilizó cloruro de mercurio que ayudó a precipitar la gelatina que no se ha hidrolizado y

se formará una zona lechosa si es negativo y si ésta es positiva dará un resultado blanco

translúcido. En cuanto al agar gelatina en nuestro grupo dio positivo con la salmonella spp y

E.coli. Otro grupo obtuvo resultados positivos con el Bacillus subtilis

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Bacillus subtilis :
En las placas Petri se echo algunas gotas de lugol para saber si esta da positivo con la

hidrólisis del almidón dando positivo las zonas claras o transparentes alrededor de la colonia

como consecuencia de α-amilasa. Con respeto a nuestro grupo rotulamos en la placa los

nombre de la bacteria por lo que no pudimos reconocer con cual reaccionaba debido a que

este se movió, por otro lado, a un grupo le salio positivo con el bacillus subtilis

evidenciando la zona transparente alrededor de sus colonias.

CUESTIONARIO:

1. Describa las reacciones enzimáticas que se producen en cada medio de cultivo.

● Amilasa: Se requiere un medio de cultivo que contenga almidón como sustrato y que

también proporcione los nutrientes necesarios para que la bacteria o el hongo que

producen la enzima crezca. Un ejemplo de un medio de cultivo comúnmente

utilizado para la producción de amilasa es el medio de cultivo de almidón.

● Gelatinasa: Para que la gelatinasa funcione, se requiere un medio de cultivo que

contenga gelatina como sustrato y que también proporcione los nutrientes necesarios

para que la bacteria o el hongo que producen la enzima crezca. Un ejemplo de un

medio de cultivo comúnmente utilizado para la producción de gelatinasa es el medio

de cultivo de gelatina.

● Caseinasa: Se requiere un medio de cultivo que contenga caseína como sustrato y

que también proporcione los nutrientes necesarios para que la bacteria o el hongo

que producen la enzima crezca. Un ejemplo de un medio de cultivo comúnmente

utilizado para la producción de caseinasa es el medio de cultivo de caseína.

● Lipasa: Para que la lipasa funcione, se requiere un medio de cultivo que contenga

lípidos como sustrato y que también proporcione los nutrientes necesarios para que

la bacteria o el hongo que producen la enzima crezca. Un ejemplo de un medio de

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 cultivo comúnmente utilizado para la producción de lipasa es el medio de cultivo de

aceite de oliva.

2. Investigue sobre las actividades enzimáticas que realizan los siguientes

microorganismos:

● Salmonella spp.

➔ Pueden producir una variedad de fosfatasas, que les permiten hidratar

diversas grasas orgánicas e inorgánicas.

➔ Las proteasas de las especies de Salmonella les permiten descomponer las

proteínas del paciente y otros sustratos, lo que les ayuda a establecer y

mantener la infección.

➔ Las lipasas permiten que los lípidos del huésped y de otros sustratos se

descompongan, lo que permite que el huésped obtenga energía y nutrientes.

● Clostridium spp.

➔ Permiten la degradación del colágeno, un componente clave del tejido

conectivo del paciente.

➔ Puede producir una variedad de toxinas, incluidas la toxina botulínica y la

toxina tetánica, las cuales pueden ser extremadamente tóxicas para los

humanos y otros animales.

● Brucella spp

➔ Permite la descomposición del peróxido de hidrógeno producido por las

células infectadas durante la respuesta inmune.

➔ Descomponen el superóxido producido por sus células anfitrionas durante

una respuesta inmunitaria.

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 ➔ Permite la hidratación de la urea producida por las células del paciente,

ayudando a mantener un pH ventajosamente alcalino para su supervivencia y

reproducción.

CONCLUSIONES:
Cada microorganismo tiene su propia actividad enzimática y se puede identificar mediante

las pruebas en diferentes medios de cultivo. Estas pruebas son útiles para identificar y

caracterizar los microorganismos en diferentes aplicaciones, como en la industria

alimentaria o la salud pública y de esta manera evitar enfermedades transmitidas por

alimentos.

● Escherichia coli presentó actividad enzimática positiva en la hidrólisis de almidón y

grasa.

● Staphylococcus aureus mostró actividad enzimática positiva en la hidrólisis de

gelatina y caseína.

● Salmonella spp presentó actividad enzimática positiva en la hidrólisis de almidón.

● Bacillus subtilis demostró actividad enzimática positiva en la hidrólisis de almidón,

gelatina, caseína y grasa.

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REFERENCIAS:
● quiahuatl Ramos, M y Perez Chabela, M. 2004. Manual de Practicas del Laboratorio

de Microbiología General. División de Ciencias Biológicas y de la Salud.

Universidad Autónoma Metropolitana. México. Primera edición. [citado el 27 de

abril de 2023]. Disponible en:

https://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_R

AMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf

● Miranda C, Página R, Miranda Y María C, Rojo D. Clostridium perfringens:

INFECCIONES DE PIEL Y TEJIDOS BLANDOS [Internet]. Seimc.org. [citado el

27 de abril de 2023]. Disponible en:

https://www.seimc.org/contenidos/ccs/revisionestematicas/bacteriologia/Clostper.pdf

● Ramírez JR, Aceves MA. Enzimas: ¿qué son y cómo funcionan? [Internet].

Unam.mx. [citado el 27 de abril de 2023]. Disponible en:

https://www.revista.unam.mx/vol.15/num12/art91/

● UCV. HIDRÓLISIS DE GELATINA. [internet]. [Citado el 27 de abril de 2023].

Disponible en:

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/gelatina.p

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