Bloque IV.

Biotecnología molecular de sistemas microbianos

Tema 10. Producción microbiana de antibióticos, vitaminas,

aminoácidos y biopolímeros

! Tipos de productos industriales de interés biotecnológico

! Obtención de células
! Biotransformación
! Ingeniería metabólica
! Productos de células: antibióticos, vitaminas, aminoácidos y
biopolímeros

Biotecnología 3º Curso
 Producción microbiana de productos comerciales
• Los microorganismos que sintetizan el producto de interés son aislados del medio
ambiente.

• Son modificados antes de entrar en la producción industrial por:

• Mutación espontánea: son muy poco frecuentes y la mayoría no tienen efecto.
Poco empleada.
• Utilización de agentes mutagénicos: se pueden emplear diferentes agentes
como UV, radiaciones ionizantes o bien agentes químicos que a menudo
interfieren en el proceso de replicación del ADN.
• Selección de aquellos mutantes más interesantes.
• Recombinación de mutantes seleccionados.

• De esta manera se consigue:

• Eliminación de vías metabólicas secundarias (simplificar el metabolismo del
microorganismo).
• Incremento de la producción del compuesto de interés.
• Las cepas de Penicillium chrysogenum industriales producen 70.000 U/ml
respecto a las 2 U/ml de Fleming (1928).

http://botit.botany.wisc.edu/toms_fungi/nov2003.html

Biotecnología 3º Curso
Mejora de las cepas
• La mejora genética de las cepas es:
• Fácil cuando interviene un solo gen.
• En general depende de diferentes caracteres génicos y por tanto se ha de
recurrir a procesos de mutación y selección.
• Seguimiento de la normativa legal:
• No está autorizada la utilización de cepas modificadas genéticamente para
la obtención de productos de consumo humano como el vino y la cerveza,
(procesos industriales tradicionales).
• Aun así hay aproximadamente 100 plantas transgénicas autorizadas en la UE.
• Problema de imagen.
 Tipos de productos industriales de interés biotecnológico

Biotecnología 3º Curso
 Obtención de células

• Fermentación aeróbica, hasta 200.000 litros

• Crecimiento con condiciones óptimas (temperatura y pH)
• Fuentes de carbono y nitrógeno económicas (melazas, fosfato y sulfato de amonio)
• Concentración por centrifugación
• Empaquetamiento

Biotecnología 3º Curso
 Biotransformación
• La síntesis química de cortisona se realiza en 37 pasos a partir de precursores
esteroides de origen vegetal (soja, colza).

• La utilización de microorganismos permite acortar la ruta de síntesis a tan solo 11

pasos. Así se reduce el coste, permite trabajar a presiones y temperaturas
menores y se reduce el uso de solventes orgánicos.

Fig. 11.15 Brock.

Más ejemplos: https://en.wikipedia.org/wiki/Bioconversion

Biotecnología 3º Curso
 Ingeniería metabólica
• Ruta de biosíntesis completa de cortisol (hidrocortisona) a partir de glucosa
en levaduras.

• Se han introducido 1 gen procedente de plantas y 8 genes de mamíferos

para reproducir la síntesis adrenal de cortisol.

Biotecnología 3º Curso
Ingeniería metabólica
Metabolitos primarios vs secundarios

Metabolitos primarios:

• Se producen durante la fase de crecimiento gracias al

propio metabolismo celular (el ejemplo más clásico es
la producción de alcohol).

Metabolitos secundarios:

• Proceso más complejo y muy especializado (es el

caso de la mayoría de antibióticos).

• Características:
• Los suelen producir muy pocos
microorganismos.
• No suelen ser esenciales para el crecimiento.
• La producción depende de las condiciones de
crecimiento y de la composición del medio
(producción reprimida).
• Su producción puede ser muy incrementada
(producción estimulada).

• Los metabolitos secundarios pueden ser producidos

a partir de un metabolito primario o varios.
 Productos de células: Antibióticos

• Productos del metabolismo secundario.

• Inhiben o eliminan el crecimiento de otros microorganismos.

• Se generan durante la fase estacionaria.

• Debido a su complejidad estructural es más fácil generarlos biológicamente.

• Se pueden modificar químicamente para obtener propiedades nuevas.

• Mayoritariamente producidos por hongos filamentosos o bacterias del

grupo actinomicetos (Streptomyces).

Biotecnología 3º Curso
 Penicilinas (b-lactámicos)

• Descubierta en 1928, producción a gran escala hacia la década de los

40 del S.XX.

• Afecta la formación de las paredes bacterianas.

• Producción muy elevada como antibiótico de uso humano y animal.

• Hongos de los géneros Penicillium y Aspergillus, determinados

procariotas.

• Estructura básica:

• Ácido 6-aminopenicilanico (6-APA)

• Anillo tiazolidina condensado con el anillo b-lactámico

• Diferentes modificaciones en la cadena lateral

Biotecnología 3º Curso
 Modificación de penicilinas (b-lactámicos)
La producción de penicilinas es una combinación biológica y química:

• Penicilina natural: cuando el proceso de fermentación se lleva a cabo sin añadir

precursores de la cadena lateral (penicilina G). Activa contra bacterias Gram+, no tan
efectiva sobre Gram-

• Penicilina biosintética: cuando en el medio de fermentación se han añadido precursores

para producir una penicilina específica (penicilinas I, II y III).

• Penicilina semisintética: La
síntesis resulta de la combinación
de procesos fermentativos y
modificaciones químicas.
Espectro más grande. Nuevas
propiedades como la ampicilina
que se puede emplear de forma
oral o la resistencia a las b-
lactamasas (oxacilina, meticilina).

Biotecnología 3º Curso
 Producción industrial de de las penicilinas (b-lactámicos)
• La producción de penicilinas es un proceso de
fermentación aeróbica en grandes
fermentadores (40.000-200.000 litros).

• Requiere métodos eficientes de aireación.

• El medio contiene corn steep liquor que

suministra nitrógeno y factores de crecimiento
y lactosa como fuente de carbono.

• Es un producto del metabolismo secundario,

durante la fase de crecimiento se produce
poco. Cuando se agota la fuente de carbono
se comienza a sintetizar.

• La penicilina es secretada al medio.

• Filtración para eliminar las células.
• Extracción y concentración en un
solvente orgánico antes de cristalizar.

Biotecnología 3º Curso
 Estreptomicinas (aminoglucósidos)
• Producidas por Streptomyces griseus
(descubierta en 1943).

• Inhibidores de la síntesis de proteínas.

• Proceso muy complejo y altamente

regulado, implica tres vías metabólicas
diferentes.

• El producto final, estreptomicina P (fosfato)

es un producto biológicamente inactivo del
metabolismo secundario. La pérdida del
fosfato genera el compuesto activo.

• Su regulación depende de la producción del

inductor Factor A (metabolito primario que se
origina en el metabolismo oxidativo de los
carbohidratos y que se secreta al medio).

• Hay derivados semisintéticos como Amikacina.

Biotecnología 3º Curso
 Tetraciclinas
• Producidas por Streptomyces aureofaciens
(descubierta en 1945).

• Amplio espectro en Gram+ y Gram-

• Inhibidores de la síntesis de proteínas.

• Estructura básica: anillo de naftaleno.

• Proceso complejo con un gran numero de

reacciones enzimáticas (300 genes implicados).

• El fosfato interfiere en la síntesis así como la

presencia de glucosa.

• Se utiliza corn steep liquor como fuente de

nitrógeno, sacarosa y otros nutrientes.

Biotecnología 3º Curso
 Productos de células: Vitaminas
• Utilizadas a nivel farmacológico y en la industria alimentaría.
• La mayoría se obtienen por síntesis química, solo algunas vitaminas muy complicadas
no se sintetizan y son producidas biológicamente.

Vitamina B12

• Sintetizada exclusivamente por microorganismos;

se asimila a través de la dieta.
• Coenzima necesaria para la síntesis de metionina y
el metabolismo de síntesis de purinas y timidina.
• La deficiencia causa baja producción de glóbulos
rojos (Anemia megaloblástica) y problemas
neurológicos.
• Propionibacterium (19-23 mg/l) y Pseudomonas
(60 mg/l).
• La vitamina B12 contiene cobalto en su estructura.
La adición de este elemento al medio favorece su
producción.

Biotecnología 3º Curso
 Productos de células: Vitaminas
Riboflavina (Vitamina B2)

• Sintetizada por bacterias, levaduras y hongos (Ashbya gossypii produce 7 g/l).

• Precursor de flavinas, FAD, FMN, coenzimas importantes en reacciones redox de
los organismos.
• Gran competencia entre la síntesis química y biológica.

Biotecnología 3º Curso
 Productos de células: Aminoácidos
• Aunque se pueden obtener por síntesis química, la forma biológicamente activa L
solo es producida por organismos.

• Glutámico, aminoácido más empleado en alimentación como potenciador del sabor

(glutamato monosódico).
• Ácido aspártico y fenilalanina (componentes del edulcorante artificial aspartamo).

• Lisina (aminoácido esencial para humanos y animales de granja).

Biotecnología 3º Curso
 Producción de L-glutámico
• Los aminoácidos se obtienen por fermentación en
procariotas.

• Las bacterias normalmente no secretan grandes

cantidades de aminoácidos ya que su biosíntesis está
altamente regulada y solo fabrican la cantidad justa para
la síntesis de proteínas.

• Por tanto es necesario obtener cepas mutantes que sean

más productoras.
• La producción de L-glutámico se desarrollo en Japón en
la década de los 50 a partir de Corynebacterium
glutamicum.

• La producción de L-glutámico no se conoce por

completo. Debe existir un exportador. Experimentalmente
se ha visto que limitando la biotina y en presencia de
penicilina o lisozima (afectan la composición de la
membrana plasmática y de la pared celular) se favorece
la salida de L-glutámico.

Biotecnología 3º Curso
 Producción de L-lisina

• Se produce en Brevibacterium flavum.

• La síntesis de lisina esta controlada a nivel de la

enzima aspartato quinasa. El exceso de L-lisina
inhibe la enzima (feedback negativo).

• Este feedback negativo se ha conseguido eliminar

seleccionando mutantes resistentes a un análogo
de la lisina no metabolizable (S-aminoetilcisteina).

• Mutagénesis sucesivas generan cepas cada vez

más productivas.

• Los niveles altos de L-lisina son tóxicos pero la

bacteria tiene una proteína en la membrana que
exporta el exceso de este aminoácido.

Biotecnología 3º Curso
 Productos de células: Enzimas
De ambientes extremos…

aislamos microorganismos
Hipertermófilos elevadas temparaturas
Psicròfilos bajas temparaturas
Halófilos concentración sal elevada
Alcalífilos resistentes a pHs básicos
Acidófilos resistentes a pHs ácidos

clonamos sus genes

y buscamos nuevas actividades

Biotecnología 3º Curso
 Productos de células: Enzimas

Biotecnología 3º Curso
 Productos de células: Enzimas
• Cada microorganismo suele producir enzimas diferentes.
• Las enzimas purificadas nos permiten procesar substratos complejos.
• Son catalíticamente muy específicas y eficientes.
• Se pueden mejorar con técnicas de ADN recombinante.

Sectores industriales donde se aplican:

• Bioenergía
• Procesamiento de comidas y bebidas
• Productos de limpieza (biodetergentes)
• Agricultura
• Tratamiento de pieles
• Procesamiento de textiles, madera y
papel
• Tratamiento de aguas residuales
• Biofarma
Tabla. 12.5 Brock.
• Biotecnología

Biotecnología 3º Curso
 Design and synthesis of a minimal bacterial genome
Science 25 Mar 2016. Vol. 351, Issue 6280.

Synthetic Genomics, Inc. intends to

synthesize the proposed minimal
genome, add the desired biological
capabilities, and insert it into an
environment that allows metabolic
activity and replication – the
creation of a synthetic cell.
 Productos de células: Biopolímeros
• La industria del plástico genera miles de toneladas anuales
de los cuales el 40% acaban en los vertederos. Los polímeros
son altamente resistentes a la oxidación. El uso de plásticos
con acetato de celulosa favorece su biodegradación. Todos
pueden ser reciclados si se recogen selectivamente pero
ninguno es “BIO”.

• A principios de los 80 ICI desarrollo polímeros de poli-b-

hidroxialkanoato (PHA-Biopol) sintetizados por Ralstonia
eutropha a partir de jarabe de maíz. El polímero es 100%
biodegradable en vertederos pero estable como contenedor.
Se conoce como Biopol y es uno de los pocos bioplásticos
comercializados.

• A finales de los 80 el MIT consiguió generar polímeros de

PHA empleando técnicas de ADN recombinante y la
tecnología fue licenciada en Metabolix. Esta empresa
dispone actualmente de la tecnología más avanzada para la
producción a gran escala de PHA mediante fermentación
bacteriana.

Biotecnología 3º Curso
 Productos de células: Biopolímeros
• Actualmente se está investigando la generación de plantas
transgénicas para abaratar el coste de producción de los PHAs.

• Otra posibilidad son los PLAs. Un polímero de ácido láctico

100% biodegradable que se puede convertir en fibras (textiles)
y contenedores (alimentación). El ácido láctico se obtiene por
fermentación bacteriana utilizando jarabe de maíz como fuente
de carbono y posteriormente se polimeriza químicamente. Los
más avanzados se producen en USA (Cargill Dow) y Japón
(Toyota y Mitsubishi).

Biotecnología 3º Curso