Seleccin, mantenimiento y mejoramiento de cepas microbianas Preparacin del medio de fermentacin Esterilizacin del aire y del medio de fermentacin

Inoculacin del fermentador

La actividad metablica slo se puede mantener si los nutrientes necesarios estn disponibles para la clula. Un medio se define como la substancia que esta alrededor de las clulas, la cual permite al microorganismo crecer y formar productos.

Mximo rendimiento y concentracin de producto o biomasa por unidad de masa de substrato Produccin mnima de metabolitos indeseables Calidad consistente del producto Problemas mnimos durante la esterilizacin y fermentacin

Medios definidos: consisten solamente de substratos qumicos precisamente definidos. Se deben utilizar a nivel de laboratorio y planta piloto donde los parmetros fsicos, qumicos y fisiolgicos necesitan estandarizarse. Medios complejos: estn compuestos de substratos con composicin indefinida, tales como extractos o hidrolizados de productos de desecho Medios tcnicos: utilizados a nivel industrial, son ms baratos. Generalmente pero no necesariamente los componentes principales son substratos complejos.

Los desechos industriales son la mayor parte del tiempo mezclas altamente impuras, las cuales requieren pre-tratamientos antes de poder ser utilizadas para un proceso de fermentacin. Ejemplos de estos son la harina de soya, suero lcteo, harina de pescado, extracto de malta

La optimizacin de un medio de fermentacin se hace a travs de un diseo experimental considerando las variables, ms que todo ingredientes del medio que tienen una influencia significativa en el proceso de fermentacin. El diseo experimental para el proceso de fermentacin involucra la determinacin de la composicin ptima del medio, mientras al mismo tiempo se deben determinar los mejores parmetros para el proceso.

En procesos industriales los substratos ms baratos se utilizan para mantener los costos de produccin bajos. Ejemplos: cebada, malta de cebada, harina de sangre, melaza de caa, harina de gluten de maz, harina de maz, licor concentrado de maz, harina de hueso, harina de avena, harina de man, salvado de arroz, harina de arroz, harina de soya, harina de trigo, polvo de suero de leche e hidrolizado de levaduras.

La razn de carbono a nitrgeno = C/N es un buen indicador para estudiar los requerimientos de crecimiento y formacin de producto. Generalmente el medio consiste en una solucin acuosa conteniendo sales nutrientes disueltas y un componente gaseoso.

FUENTE DE

NITRGENO

Fuentes de Carbono
Carbohidratos Alcoholes cidos Carboxlicos Grasas

Orgnica
Urea Amino acidos Purinas Pirimidinas

Inorgnica
Nitratos Nitritos Amonio Nitrgeno molecular

Elementos inorgnicos
Fsforo Azufre Magnesio Potasio

Vitaminas
Tiamina Riboflavina Piridoxina Biotina cido pantotnico Niacina Inositol Colina

Hidrocarburos Substratos gaseosos

Fuentes complejas como: CSL (corn steep Liquor) Hidrolizados de protena Levadura deshidratada

Calcio Cloro Cobalto Cobre Hierro Manganeso Molibdeno Zinc

Factores de crecimiento
Precursores Detergentes Agentes antiespumantes Agentes antimicrobianos

La conversin eficiente de un substrato a producto es sumamente crucial, en el estado de avance de la biotecnologa esto involucra el uso de ingeniera gentica de la cepa. El uso ptimo de substratos se logra con la ayuda de la ingeniera metablica.

La esterilizacin es necesaria para asegurarse de: que slo el microorganismo deseado esta presente en la fermentacin que los productos son de la calidad establecida que el medio ambiente esta protegido de contaminacin indeseable, y que se previene el deterioro (descomposicin microbiana) de los productos.

Esterilizacin por incremento de la temperatura lograda por calentamiento directo o indirecto por vapor o electricidad, este es el mtodo ms popular y ms eficiente. Esterilizacin del medio para cultivo de clulas animales por filtracin por membranas con poro de 0.1-0.04 m. Irradiacin por microondas, la cual es utilizada comnmente en las industrias de alimentos. Tcnicas ms modernas tales como pulsos elctricos de alto voltaje y polvos fotosemiconductores. Los cuales involucran la ruptura de las membranas celulares al incrementar el campo elctrico a travs de la membrana ms all de cierto valor lmite.

Las ventajas de la esterilizacin batch son bajos costos de capital, bajo riesgo de contaminacin, control manual ms fcil y adecuado para medios que contienen gran proporcin de slidos. La esterilizacin contina tiene la ventaja de recuperacin de energa, baja degradacin de nutrientes termosensibles debido a tiempos de sostenimiento de la temperatura ms cortos. Sin embargo, una desventaja es que la presencia de slidos puede dar lugar a una esterilizacin ineficiente, requiriendo un diseo apropiado.

Un esterilizador continuo tiene la ventaja de ser ms econmico en rea de construccin. Tambin ofrece ms posibilidad de automatizacin y reduccin de los ciclos de tiempo de los procesos de esterilizacin, resultando en una mnima sobre-esterilizacin y facilidad de escalamiento. Los requerimientos de servicio para vapor y agua son constantes, comparados con la fluctuante demanda de la esterilizacin batch. No es econmico para fermentaciones de poca capacidad.

Los procesos de fermentacin aerbica requieren cantidades significativas de aire estril. La esterilizacin del aire en el sentido estricto bacteriolgico significa la eliminacin de todos los microorganismos viables. La remocin de bacterias por medio de filtros de profundidad consistentes en carbono granular o medio fibroso es la que ms se utiliza.

En la mayora de sistemas de fermentacin un pre filtro hecho de celulosa, viscosa o lana de vidrio se instala previo al filtro absoluto para remover polvo, gotas de aceite y humedad del aire de proceso. El material de membrana ms comn de construccin de un cartucho de filtro absoluto es politetrafluoroetileno (PTFE) construido con pliegues tambin de PTFE, el cual es hidrofbico y resiste la humectacin. La membrana esta ntimamente soportada por material tambin con pliegues el cual previene la distorsin bajo presiones de gas o hidrulicas elevadas.

La valoracin de los filtros absolutos es de 0.2-0.01 micrometros (para la remocin total de bacterias, virus, bacterifagos o partculas esfricas de este tamao y puede ser esterilizado utilizando vapor. Despus de una filtracin de aire, los filtros se mantienen bajo presin positiva hasta el final de la fermentacin.

El proceso de inoculacin es la transferencia de material semilla o inculo en el fermentador.

La inoculacin de un fermentador de laboratorio se realiza generalmente utilizando tubos pre-esterilizados y una bomba peristltica. A gran escala, la transferencia del inoculo se hace aplicando presin positiva en el fermentador y conectndolo de forma asptica al fermentador de produccin. Las lneas de conexin se esterilizan antes de utilizarse para la transferencia del inoculo.

El comportamiento de un proceso de fermentacin es dependiente en gran medida del estado fisiolgico del inoculo. Es necesario que el tiempo de transferencia del inoculo sea determinado experimentalmente a escala de laboratorio y que se determine un set de condiciones estndar para el desarrollo del inoculo. La transferencia de inoculo se hace comnmente con biomasa creciendo de forma vegetativa por parmetros tales como turbidez, volumen de clulas empacadas, peso seco, peso hmedo, o caractersticas morfolgicas.

Los parmetros en lnea que se consideren para la transferencia del inoculo incluyen pH, oxgeno disuelto y la concentracin de oxgeno y dixido de carbono en el gas de salida

Al evaluar edad del inoculo y rendimiento se concluy que la fase logartmica del inoculo dio una concentracin ms alta significativamente en comparacin con las otras dos (fase inicial y fase desacelerada) en el fermentador.