Muestreo de Hexápoda

Maria Jose Canchila Toro

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 ARTÍCULO DE REVISTA

Un método para muestrear puparias

parasitadas de Drosophila suzukii (Diptera:
Drosophilidae) del suelo
Clarissa Capko, Jason Thiessen, Lana Harach, Jessica Fraser, Michelle Franklin, Paul
Abram
Journal of Insect Science
volumen 24, número 1, 2024 de enero de 14,
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 Objetivo del estudio
En este estudio, desarrollamos un método para muestrear pupas de D.
suzukii del suelo.

pupas de D. suzukii
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 Diseño de sistemas
Tres baldes plásticos de Tres tubos de riego Un tamiz de malla de 4,76
20 litros mm

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 Diseño de sistemas
Un tamiz de malla de 3,35 Un tamiz de malla de 1 Un tamiz de malla de
mm mm 250 µm

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 Diseño de sistemas

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 Diseño de sistemas

Imagen del sistema de flotación

de cangilones utilizado en este
estudio.

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 Presupuesto del diseño de sistemas

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 Presupuesto del diseño de sistemas

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 Métodos de muestreo
Colecciones de muestras de campo
60 muestras de suelo de una parcela
cultivada de mora (Rubus
fruticosus)
En el Centro de Investigación y
Desarrollo en Agassiz, Columbia
Británica (GPS: 49,24°, −121,75°)

Recolectaron veinte muestras en

cada una de las tres fechas de 2021:
16, 23 y 30 de marzo.
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 Métodos de muestreo
los parasitoides completaran su desarrollo
basándose en un umbral mínimo de
las muestras se colocaron en un refrigerador
desarrollo de 8,2 °C para G. brasiliensis y
a 5 °C (hasta por 2 meses) hasta su
10,5 °C para L. japonica.
procesamiento.

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 Métodos de muestreo
Para obtener muestras de suelo con
superficie expuesta y peso total similares,
retiramos la malla de un tamiz cilíndrico
(altura = 6,7 cm, diámetro = 21 cm)

Para tomar cada muestra individual, se empujó el

tamiz ahuecado en el suelo hasta el marcador de 3 cm
de profundidad y se eliminó el suelo con una paleta
manual
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 Métodos de muestreo
Procedimiento flotante para muestras recolectadas en el campo
El primer balde se llenó con agua, hasta el nivel
de los tubos de drenaje, para ayudar a mover la
puparia al segundo juego de tamices.

El peso de la muestra de suelo se midió con una

balanza y luego el suelo se depositó sobre el tamiz de
malla de 4,76 mm.
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 Métodos de muestreo
Para enjuagar la tierra se utilizó una manguera
con agua corriente, equipada con una válvula
manual para regular el flujo y un interruptor de
agua.

Luego se quitó el primer tamiz y se usó nuevamente el

agua para romper los grumos de tierra restantes a
través del tamiz de malla de 3,35 mm.
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 Métodos de muestreo
Luego se retiraron los tamices de malla de 1 mm
y 250 µm y se colocaron individualmente en una
bandeja de plástico blanca con 3–4 cm
(profundidad) de agua.

Cuando el estado de un pupario no estaba claro, se

observaba bajo un microscopio de disección para
buscar la masa de color claro dentro del pupario, lo que
indica la presencia de un parasitoide inmaduro.
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 Métodos de muestreo
Aparición de parasitoides a partir de muestras recolectadas en el
campo
Cada pupario se identificó individualmente
como puparia de D. suzukii o de una especie
desconocida (otras Drosophilidae) utilizando
morfología espiracular.

Las puparias de Drosophila suzukii se colocaron en

placas de Petri con un máximo de 30 puparias por
placa o individualmente en tubos Eppendorf.

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 Métodos de muestreo
Luego se colocaron en una incubadora a 21,25
°C y se comprobó su emergencia tres veces por
semana ( n = 1302)

Los parasitoides que emergieron de los tubos de

Eppendorf y las placas de Petri ( n = 727) se
identificaron inicialmente siguiendo a Abram et al.
(2022b)
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 Métodos de muestreo
para confirmar la identificación por el Dr. Matt
Buffington (Figitidae), el Dr. Robert Kula
(Braconidae) y el Dr. Michael Gates (Pteromalidae)
en el Laboratorio de Entomología Sistemática.

Tiempo de desarrollo de cada pupario de las placas de

Petri sólo para las especies L. japonica , G. brasiliensis y
Asobara cf. rufescens (Förster) (Hymenoptera: Braconidae)
( n = 550) se fijó como el punto medio entre la fecha de
emergencia y la observación anterior.
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 Métodos de muestreo
se calcularon utilizando datos de temperatura del
aire extraídos del sitio web de datos climáticos
históricos de Canadá sobre cambio climático y
medio ambiente.

Junto con estimaciones de umbrales térmicos más

bajos para el desarrollo de parasitoides de Hougardy
et al. (2019)
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 Métodos de muestreo
Validación de la Técnica Flotante
Se tomaron treinta muestras de suelo (aproximadamente 950
g cada una) de una parcela ubicada dentro de los 500 m de
nuestros sitios iniciales de recolección de muestras de suelo.

Las 25 muestras restantes se sembraron con entre 1 y

124 puparias de D. suzukii que contenían prepupas de
L. japonica (total = 665 puparias; media = 26,6).
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 Métodos de muestreo
Las puparias que contenían prepupas parasitoides se criaron mediante:
(i) colocación de 20 a 30 adultos de sexo mixto de D. suzukii en viales con
aproximadamente 20 ml de dieta en hojuelas de papa.

(ii) eliminar moscas y exponer D. suzukii inmadura a tres

hembras apareadas de L. japonica durante 2 a 3 días.

(iii) retirar los parasitoides e incubar los viales a 23 ° C,

fotoperíodo de 16: 8 h, 50% –70% de humedad relativa
durante 14 días.

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 Métodos de muestreo
Los viales se almacenaron a 8 °C para detener el desarrollo
de parasitoides; Luego se extrajeron los puparios parasitados
de los viales y se contaron haciendo flotar las muestras en
agua.

Luego se añadió un número conocido de puparias

parasitadas a cada una de las muestras de suelo, que
se mezclaron y luego se almacenaron a 5 °C hasta que
se procesaron usando el aparato de flotación

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 Métodos de muestreo
Análisis estadístico
La cantidad de puparias extraídas de cada muestra se correlacionó
con la cantidad conocida que se agregó originalmente a las
muestras de suelo.

Los análisis de correlación de Pearson y la producción

de gráficos se realizaron en R versión 4.2.3.

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MUCHAS GRACIAS!!
 Bibliografías
Capko, C., Thiessen, J., Harach, L., Fraser, J. L., Franklin, M. T., & Abram, P. K. (2024).
A method for sampling parasitized Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) puparia
from soil. Journal of Insect Science, 24(1), 14. https://doi.org/10.1093/jisesa/ieae004.
Biancheri, M. J. B., Suárez, L., Kirschbaum, D. S., Garcia, F. R. M., Funes, C. F., &
Ovruski, S. M. (2022). Natural parasitism influences biological control strategies against
both global invasive pests Ceratitis capitata (Diptera: Tephritidae) and Drosophila suzukii
(Diptera: Drosophilidae), and the Neotropical-native pest Anastrepha fraterculus
(Diptera: Tephritidae). Environmental Entomology, 51(6), 1120–1135.
https://doi.org/10.1093/ee/nvac085

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