ACTIVIDAD DE BIOLOGÍA MOLECULAR. CAPÍPTULO 9.

EXTRACCIÓN DE ADN
 Protocolo de extracción a partir de una muestra de
sangre
 Centrifugar la muestra 1. ¿Qué hay en el sobrenadante?
 Descartar SB 2. ¿Qué hay en el precipitado?
 Lavar las células con SF
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 Lisis de los eritrocitos
 Tampón de lisis I: Tris-HCl 10mM pH 8,
tritón X100 1% y sacarosa 11%
 Centrifugar a 12.000 rpm 3’
3. ¿Qué hay en el sobrenadante?
 Descartar SB
4. ¿Qué hay en el precipitado?
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 Lisis de los leucocitos
 Tampón de lisis II: Tris-HCl 10mM pH 8,
NaCl 400 mM, EDTA 2 mM, proteinasa K 5. ¿Qué es el SDS? ¿Qué efecto produce?
1mg/mL, SDS 1%, EDTA 2 mM y SDS 6. ¿Qué es la proteinasa k? ¿Qué efecto produce?
20% 7. ¿Qué es el acetato de potasio? ¿Qué efecto produce?
 Incubar 1 h a 65ºC (vortear cada 10’)
 Añadir acetato de potasio 3 M
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8. ¿Qué hay en el sobrenadante?
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 Centrifugar a 12.000 rpm 5’ 9. ¿Qué hay en el precipitado?
 Recuperar SB
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………………………. 10. ¿Qué hay en el sobrenadante?
 Añadir isopropanol y centrifugar a 12.000 5’ 11. ¿Qué hay en el precipitado?
 Desechar SB
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 Lavar el pellet con etanol 70% 12. ¿Qué hay en el sobrenadante?
 Centrifugar a 12.000 rpm 5’ 13. ¿Qué hay en el precipitado?
 Desechar SB
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 Resuspender el pellet en agua estéril