INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIÓLOFICAS

INSTITUTO POLITÉCNICO
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMIICA
ALUMNO: RIVERA HERNÁNDEZ JORGE ÓSCAR
GRUPO: 3IM2
NACIONAL
ESCUELA NACIONAL
DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INGENIERIA BIOQUÍMICA
“Laboratorio de Ing. Bioquímica”

BITACORA
Profesores: -Silva Elizondo
-Elizabeth Jiménez
-Sergio Meza
-Sakuntara Gozara

Alumno: Rivera Hernández Jorge Oscar

GRUPO: 3IM2
 INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIÓLOFICAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMIICA
ALUMNO: RIVERA HERNÁNDEZ JORGE ÓSCAR
GRUPO: 3IM2
Practica No.4.1: “Reacciones de óxido-reducción. Deshidrogenasa Succínica
y citocromos oxidasa”
 INTRODUCCIÓN:
La enzima succinato deshidrogenasa o deshidrogenasa del ácido succínico (SDH) es una Oxidorreductasa o
complejo II mitocondrial que cataliza la oxidación del succinato para formar fumarato siendo la coenzima el FAD
(Flavín-adeníndinucleotido). Esta enzima se localiza en eucariontes en la membrana mitocondrial interna que
interviene en el ciclo de Krebs, en la cadena de transporte de electrones. El FAD está unido por enlaces
covalentemente y cataliza la reacción.
La enzima está compuesta de 4 subunidades:
 Succinato deshidrogenasa subunidad A (SDHA).
Hidrofílicas
 Succinato deshidrogenasa subunidad B (SDHB).
 Succinato deshidrogenasa subunidad C (SDHC).
Hidrofóbicas
 Succinato deshidrogenasa subunidad D (SDHD).
Adicionalmente hay dos proteínas que participan en el montaje de la
succinato deshidrogenasa pero no forman parte de ella.
 Succinato deshidrogenasa factor de montaje 1 (SDAHF1):
Participa en la biosíntesis mitocondrial de los clústers de hierro-azufre.
 Succinato deshidrogenasa factor de montaje 2 (SDHAF2): Es
necesaria para la inserción del FAD en la SDHA.
No está claro si participa con actividad enzimática en la unión covalente
del FAD a la SDHA, o manteniendo a la SDHA en una conformación
adecuada para que el FAD se una a la SDHA.
El 𝐻2 cedido por el succinato puede ser transferido del FADH2 a un colorante
susceptible como el azul de metileno que al cambiar su estado redox pasa de
coloreado a incoloro o viceversa.
El malonato es un inhibidor competitivo de la deshidrogenasa succínica, de tal
manera que la presencia de malonato detiene el ciclo de Krebs. La reacción que
cataliza la enzima es la de deshidrogenar al succinato para producir fumarato y
FADH2. Detener el ciclo de Krebs implica parar la cadena respiratoria y por lo
tanto la maquinaria de producción de ATP.
Cuando ocurre la inhibición de una enzima que se encuentra dentro de una
determinada vía metabólica, el sustrato de la enzima tiende a acumularse, ya que
no puede ser transformado en un producto.
La citocromo C oxidasa cataliza las oxidaciones de un electrón de cuatro
moléculas de citocromo “C” reducidas consecutivas y la reducción simultanea de
cuatro electrones de una molécula de 𝑂2 . El núcleo de complejo IV se compone
de sus tres subunidades mayores y más hidrófobas, I, II, III, que están en codificados por el DNA mitocondrial.
Hay tres grandes tipos de citocromos llamados a, b y c, clasificados en función del espectro de
absorción y del tipo de grupo hemo.
 Citocromo a – Tiene una forma modificada de la protoporfirina IX
 Citocromo b – forma parte de la cadena respiratoria de eucariotas y procariotas aerobios
 Citocromo c – Proteína pequeña que funciona como transportador electrónico
mitocondrial
 OBJETIVOS:
 Determinar la actividad de algunas enzimas que participan en reacciones de óxido-reducción y discutir
la importancia de los cofactores y el efecto de algunos inhibidores
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ALUMNO: RIVERA HERNÁNDEZ JORGE ÓSCAR
GRUPO: 3IM2
 La actividad de le enzima Succinato Deshidrogenasa mediante una reacción colorimétrica.

Inicio  DIAGRAMA DE FLUJO:

3.-
2.-
1. Obtención de la deshidrogenasa
succínica (SDH) y citocromo oxidasa Mezclar
Añadir 𝑇1: 1, 𝑇2: 3: , 𝑇3: 1.5, 𝑇4: 0
Sacrificar una rata y obtener el corazón se (, 𝑇5 : 0.5, 𝑇6 : 0.75, 𝑇7 : 0.25)𝑚𝐿 de agua Leer el color antes de iniciar la reacción
puede usar corazones previamente congelados
Colocar 2mL de SDH-CIT a todos los tubos a excepción del Adicionar 1m L de
Partir el corazón a la mitad, lavarlo con agua tubo 2 P-fenilén diamina1%
fría hasta quedar libre de cuagulos y coratrelo (recién preparada)
Mezclar y mantener en hielo hasta agregar
en fragmentos pequeños
en cada tubo 0.5mL aceite vegetal
Incubar a baño maría durante 37°C
Colocarlos en un mortero, sumergido en hielo
No agitar los tubos e incubar a baño maría a 37°C
Iniciar las lecturas en las
Adicionar 25m L de NaHP𝑂4 0.06M, pH: 7 y observación inicial, (1, 2, 4, 6,8,
aproximadamente 1 g de arena Iniciar las lecturas después de la decoloración del 𝑇1 10)min

Triturar el corazón en frio. Iniciar las lecturas en las observación

Fin
inicial, (2, 4, 6, 8,10, 15, 20) min
Centrifugar a 2500rpm durante 15min
Sucinato de Sodio
1) Citocromos y citocromo oxidasa
Recuperar el sobrenadante,
2) s
Preparar una serie de 8 tubos
Completar el volumen necesario
con solución de fosfatos
Colocar al (𝑇1 : 0, 𝑇2 : 0, 𝑇3 : 1, 𝑇4 : 0
Etiquetarlo como “SDH-Cit” , 𝑇5 : 0, 𝑇6 : 0, 𝑇7 : 1𝑇8 : 1)𝑚𝐿 de KCN0.5%
Cianuro de potasio

Desechar el precipitado Colocar al (𝑇1 : 0, 𝑇2 : 0, 𝑇3 : 0, 𝑇4 : 0,

𝑇5 : 0.1, 𝑇6 : 0.1, 𝑇7 : 0.1, 𝑇8 : 0.1)𝑚𝐿 de α-naftol0.15%
Determinación de la actividad enzimática
Colocar al (𝑇1 : 1.1, 𝑇2 : 2.1, 𝑇3 : 0.1, 𝑇4 : 2.1
3) Deshidrogenasa Succínica , 𝑇5 : 1, 𝑇6 : 2, 𝑇7 : 0, 𝑇8 : 1)𝑚𝐿 de agua

Colocar al (𝑇1 : 1, 𝑇2 : 0, 𝑇3 : 1, 𝑇4 : 1
Preparar una serie de 7 tubos , 𝑇5 : 1, 𝑇6 : 0, 𝑇7 : 1, 𝑇8 : 0)𝑚𝐿 de SDH-CIT

Añadir (𝑇1: 0.5, 𝑇20.5: , 𝑇3: 0, 𝑇4: 0.5,

𝑇5 : 0.5, 𝑇6 : 0.5, 𝑇7 : 0.5)𝑚𝐿 de
 BIBLIOGRAFIAS:
3.-
succinato de sodio 0.1M Libros:
 Melo Ruiz, Virginia. “Bioquímica de los procesos metabólicos”
Colocar 0.30mL de Azul de metileno 0.002M Reverté, México 2006. Pág 160.
 Voet, Donald “Fundamentos de bioquímica: la vida a nivel
Añadir (𝑇1: 0, 𝑇20: , 𝑇3: 0, 𝑇4: 1.0, molecular” 2ª edición, Medica panamericana. Buenos Aires,
𝑇5 : 0.5, 𝑇6 : 0.25, 𝑇7 : 0.25)𝑚𝐿 de
Malonato de Sodio 0.01M
Argentina. Pág 530, 564.
Fuente de internet:
 https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de
2.- laboratorio/prueba-de-lactato-deshidrogenasa-ldh/