DAS-ELISA

FOSFATASA ALCALINA

Tampón de recubrimiento Carbonatos. El tampón de recubrimiento de carbonatos

es utilizado para diluir el anticuerpo que viene concentrado. El volumen necesario
del tampón 1X depende del número de pozos usados, se necesitan 100 µl por pozo.
Para una tira de 8 pozos es necesario un volumen estimado de 1 ml, o 10 ml por
cada placa de 96 pozos.

Diluir 1 volumen del buffer de recubrimiento de carbonatos a una concentración de

10X con 9 volúmenes de agua destilada antes de usar.

Ejemplo: Para preparar 10 ml del buffer de recubrimiento mezclar 1 ml del tampón

concentrado 10X con 9 ml de agua destilada.

Tapón de sustrato PNP. El tampón de sustrato PNP es usado para diluir las tabletas
de sustrato PNP. El volumen necesario del tampón 1X depende del número de
pozos utilizados, son necesarios 100 µl por cada pozo, toda una placa de ensayo de
96 pozos requerirá 10 ml.

Diluir 1 volumen del tampón de sustrato PNP concentrado 5X con 4 volúmenes de

agua destilada antes de usar.

Ejemplo: Para preparar 10 ml del tampón de sustrato PNP, mezclar 2 ml del buffer
concentrado 5X con 8 volúmenes de agua destilada. Cada tableta de PNP hace 5 ml
de una solución a una concentración de 1 mg/ml.

Quince minutos antes de que termine el paso de incubación, medir 5 ml a

temperatura ambiente del tampón de sustrato PNP a 1X por cada tableta a utilizar.
Sin tocar las tabletas deberán ser agregadas al tampón PNP.

Tampón de lavado PBST. Para preparar el tampón PBST a una concentración de 1X

se debe de disolver el tampón en polvo en agua destilada de acuerdo a la siguiente
tabla:

Tampón---------5g
Agua destilada----500ml

Agitar perfectamente la botella donde se encuentra el polvo del tampón antes de

medir para asegurar que los componentes estén perfectamente mezclados. Medir el
agua destilada en un recipiente y añadir el polvo del tampón mientras se agita.
Revolver de 15 a 30 minutos o hasta que el polvo este disuelto.

Diluyente ECL para la enzima conjugada. El tampón ECL es usado para diluir el
concentrado de enzima conjugada.
El volumen del tampón ECL a una concentración 1X depende del número de pozos
utilizados, con 100 µl que se necesitan para cada pozo.

Para preparar el tampón ECL a una concentración de 1X se debe de disolver el

polvo del tampón ECL de acuerdo a la siguiente tabla:
 Tampón en polvo Agua Destilada
0.5g 15 ml
1g 30 ml
5g 150 ml

Agitar perfectamente la botella donde se encuentra el polvo del tampón antes de

medir para asegurar que los componentes estén perfectamente mezclados. Medir el
agua destilada en un recipiente y añadir el polvo del tampón mientras se agita.
Revolver de 15 a 30 minutos o hasta que el polvo este disuelto.

Tampón general de extracción. El tampón general de extracción (GEB) es usado

para moler y diluir las muestras. Para preparar el tampón a una concentración de 1
X disolver el polvo del tampón GEB en agua de acuerdo a la siguiente tabla:

Tampón en polvo 16.5 g

Agua destilada 500 ml
Tween 20 10.0 g

Agitar perfectamente la botella donde se encuentra el polvo del tampón antes de

medir para asegurar que los componentes estén perfectamente mezclados. Añadir
aproximadamente 10 ml de agua al polvo y se mezcla en una pasta lisa. Mientras
se mezcla, añadir lentamente el volumen restante de agua y el Tween-20 a la
solución