Extraccion de DNA apartir de levadura
Objetivos:
• Analiza las características estructurales y funcionales de los Ácidos nucleicos.
• Aísla, fraccionar e identificar mediante pruebas colorimétricas el azúcar y el grupo fosfato
contenidos en la molécula de ácidos nucleicos.
EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
Colocar 20 gramos de levadura de
panadería en un vaso de
precipitados de 250 ml, agregar 30
ml de NaOH al 30%. Agitar con una
varilla de vidrio durante 20
minutos hasta formar una
suspensión.
Añadir con agitación HCl
concentrado hasta acidificar la
solución, utilice papel indicador
para verificar el pH. Con esto se
precipitan los ácidos nucleicos.
Filtrar la suspensión obtenida a
través de papel filtro, lavar el
residuo con agua destilada
recuperando ambos filtrados en un
vaso, este filtrado se desecha.
HIDRÓLISIS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
Disolver una pequeña porción del ácido
nucleico obtenido en 5 ml de NaOH 1N.
Calentar en baño de agua hirviendo
durante 15 minutos. Dejar enfriar.
IDENTIFICACIÓN DE FOSFATOS
En un tubo de ensaye de 18 x 150
colocar una porción del ácido
nucleico obtenido. Añadir 2 ml de
H2SO4 3N. Hervir lentamente
durante 5 min para hidrolizar los
ácidos nucleicos. Enfriar
Filtrar la suspensión a través de un
Lavar la pasta adicionando 15 m de
embudo de filtración
Adicionar 20 ml de agua destilada y agua destilada recuperando el
implementado con una capa de
mezclar. Añadir 10 ml de FeCl3 al lavado en el vaso de precipitados
gasa. Exprimir la pasta usando
10% y mezclar nuevamente. donde recuperó el filtrado
guantes. Recoger el filtrado en un
anterior.
vaso de precipitados de 250 ml
A la mezcla de filtrados de les Si la mezcla de los dos filtrados
adiciona 50 ml de etanol al 95% El residuo de la gasa se elimina está turbia filtre nuevamente
con agitación constante utilizando papel filtro.
El residuo retenido en el papel
filtro son los ACIDOS NUCLEICOS,
serán utilizados para realizar los
siguientes ensayos:
En un tubo de ensaye de 18 x 150 se
colocan 3 ml del Reactivo de Bial, añadir 1
Acidificar la solución hasta un pH 3.5 con ml del hidrolizado anterior. Calentar al
HC1 0.1Nmanteniendo de tubo de ensayo mechero con agitación, hasta que las
en un baño de hielo. Con este hidrolizado primeras burbujas alcancen la superficie.
se lleva a cabo la PRUEBA DE BIAL:
Observar el color desarrollado por la
solución.
Añadir 0.5 ml de H2S04 10N, 1 ml
de solución de molibdato de
Correr como controles una solución
Transferir 1 ml del hidrolizado a un amonio al 2.5% y 5 gotas de cloruro
de KH2PO4 0.1M y agua destilada
tubo de 18 x 150. estannoso. Dejar reposar durante
en lugar de muestra.
10 minutos. Observar el color
desarrollado.