CÓDIGO LB-FO-05

VERSIÓN 04
GUÍA DE LABORATORIO 26-ABR-
FECHA
2023
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CURSO Biología celular y molecular

PROGRAMA Medicina
ACADÉMICO
TEMA División celular
OBJETIVO DE Conocer el proceso de extracción de ADN a partir de tejidos vegetales
APRENDIZAJE
LABORATORIO Multidisciplinario
FECHA Y HORA Lunes 4 de marzo de 2024
ELABORADO Nataly Ruiz Quiñones
POR

FUNDAMENTO TEÓRICO
Los ácidos nucleicos son una de las 4 macromoléculas que componen los tejidos de los organismos vivos de
la tierra.

La composición básica de los ácidos nucleicos es un grupo fosfato, un azúcar ribosa y la base nitrogenada.
La unión de una base nitrogenada con un azúcar ribosa se denomina Nucleósido, mientras que este conjunto
unido a un grupo fosfato se conoce como Nucleótido (Figura 1)

Figura 1. Composición de los ácidos nucleicos

En la naturaleza existen cinco bases nitrogenadas distribuidas en dos grupos químicos. Las purinas,
caracterizadas por poseer dos anillos aromáticos en su base nitrogenada se componen por Adenina y Guanina;
las pirimidinas, se caracterizan por poseer un solo anillo aromático. A este grupo pertenecen la Citosina, la
Timina y el Uracilo (Figura 2)
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Figura 2. Clasificación de las bases nitrogenadas

Existen dos moléculas identificadas como ácidos nucleicos. La primera, de cadena sencilla, llamada ácido
ribonucleico o ARN, compuesta por las bases nitrogenadas Adenina, Guanina, Citosina y Uracilo. Ya el ácido
desoxirribonucleico ADN es una molécula de cadena doble antiparalela, que está integrada por las bases
nitrogenadas Adenina, Guanina, Citosina y Timina (Figura 3).

Figura 3. Representación gráfica de las cadenas de ácidos nucleicos y sus bases nitrogenadas.
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Una característica importante para diferenciar entre el ARN y el DNA se encuentra en el azúcar ribosa. Para
el ADN la ribosa pierde su grupo hidroxilo en el carbono 2, y por eso este ácido nucleico es nombrado
desoxirribosa (Figura 4.)

Figura 4. Estructura de la ribosa y la desoxirribosa presentes en las moléculas de ARN y ADN

respectivamente.

Debido a las características químicas de esta molécula la extracción de la célula se ve facilitada con el uso de
sustancias anfipáticas como lo son detergentes que remueven lípidos y proteínas de los componentes
celulares, y los diferentes grupos de alcoholes implementados en el protocolo de extracción ayudan en la
limpieza de residuos celulares tales como grasas que se degradan en contacto con el alcohol.

El material genético se disuelve en el agua y es sensible a degradación por la acción de enzimas DNAsa
(degradadoras de ADN) y RNAsa (degradadoras de ARN).

EQUIPOS DE LABORATORIO
Centrífuga

MATERIALES POR GRUPO DE TRABAJO

Material inerte:
Tubos de ensayo
Beaker de vidrio
Pipetas pasteur

Material biológico:
Material vegetal en buen estado

REACTIVOS POR GRUPO DE TRABAJO

Solución salina 5M
Bicarbonato de sodio como estabilizante de pH
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Lavaloza como surfactante aniónico

Solución de lisis:
500 mL de NaCl 5M pH 8
10% de detergente lavalozas, neutro

ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL (EPPs)

Para el desarrollo de la práctica es necesario que los estudiantes lleven los siguientes implementos:

❖ Bata antifluidos o desechable

❖ Guantes de látex o de nitrilo (llevar guantes de repuesto caso se rompan)
❖ Gorro de laboratorio
❖ Monogafas
❖ Tapabocas

La vestimenta deberá atender a los siguientes requisitos:

❖ Pantalón
❖ Zapatos cerrados
❖ Cabello recogido
❖ Sin joyas y sin maquillaje
PROCEDIMIENTO

Extracción de ADN humano

1. Con ayuda de un escobillón, realice un barrido de la primera capa de células del epitelio bucal
pasando por todos los lados de la boca. Recuerde dejar la muestra bien cargada.
2. Extraiga la muestra sumergiéndola en un tubo de ensayo con 5 mL de solución de lisis. La solución
debe verse turbia.
3. Agite vigorosamente la muestra y centrifúguela por 5 minutos a 2500 rpm (revoluciones por minuto)
4. Recupere el sobrenadante (líquido superior) y transfiéralo a un nuevo tubo de ensayo.
5. Adicione el mismo volumen de líquido de etanol absoluto helado o de alcohol isopropílico absoluto
helado. Debe colocarlo suavemente resbalando por la lateral del tubo.
6. Deje el tubo en el mesón por 5 minutos y luego observe la aglomeración del material genético
formando una banda entre el buffer de lisis y el alcohol.

Extracción de ADN vegetal

1. Previamente en su casa realice un concentrado de tomate o de una fruta. Para esto deberá licuarlo
o triturarlo hasta hacerlo un puré, sin adición de ningún líquido.
2. En un tubo de ensayo adicione 5 mL de la pulpa del vegetal y 10 mL de solución de lisis.
3. Agite vigorosamente la muestra y centrifúguela por 5 minutos a 2500 rpm (revoluciones por minuto)
4. Recupere el sobrenadante (líquido superior) y transfiéralo a un nuevo tubo de ensayo.
5. Adicione el mismo volumen de líquido de etanol absoluto helado o de alcohol isopropílico absoluto
helado. Debe colocarlo suavemente resbalando por la lateral del tubo.
6. Deje el tubo en el mesón por 5 minutos y luego observe la aglomeración del material genético
formando una banda entre el buffer de lisis y el alcohol.
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Al terminar la experiencia juague el material utilizado

REGISTRO DE DATOS

1. ¿Cuál es el tamaño del ADN de los materiales trabajados en el laboratorio?

2. ¿Cuál es el número de cromosomas que presentan los objetos de estudio? ¿Estos organismos son
diploides, triploides, tetrapolares, etc?

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Cooper, G.M., Hausman, R.E. & Wright, N. La célula. 2009 Quinta edición. Editorial Marbán. ISBN 8471016729

Madigan, M. T. Brock, biología de los microorganismos 12/e. 2009 España: Pearson Educación. ISBN
9788478290970