2do Parcial

Desarrollo Fetal

 Malformaciones
 Regulación génica Problemas en
 Influencias externas
 Diferenciación de tejidos

Modelos comunes: Ovejas (por excelencia), Ratones y ratas.

Ya existen protocolos de cirugías fetales pero aún no hay explicación de muchas cosas 
Madre, Padre y Producto: Cuestión fenética, Madre (Adaptación de la placenta)  afecta al
producto.

Teoría de la programación fetal

Enfermedades aumentan  Diabetes, Cardiopatías, Obesidad, Hipertensión, Enfermedades

mentales (Depresión, esquizofrenia, TOC, TB, BPD, etc)  Sin influencia genética aparente y
con un umbral de incidencia aún menor.

Si la madre tuvo una deficiencia de algo, aunque sea mínima  El ambiente placentario es
afectado (Durante el desarrollo sensible)  Se crea una nueva huella genética.

Crecimiento fetal y desarrollo

Existen 2 líneas principales de investigación:

 Control genético del crecimiento

 Terapia génica y modificaciones genéticas.
 Programación fetal de enfermedades en adultos
 Enfermedades en la adultez por alteraciones del desarrollo
Ej. Bajo peso al nacer

Fisiología fetal

 Humanos (Etapas):
o Blastogénesis: Día 0 a semana 2 post fecundación. Preimplantación,
implantación, post implantación y blástula. Periodo muy importante (Muy
vulnerable, conduce a abortos)
o Embrionario: 2-10 semanas. Desde la gástrula hasta la organogénesis.
Vulnerable, se producen las malformaciones.
o Fetal: 11 semana hasta el nacimiento. Crecimiento y maduración.
Malformaciones en órganos aún en desarrollo (corazón, cerebro y pulmones)
 Crecimiento
Duración de 38 semanas (266 días) a veces 40-42 semanas.
Término del embarazo entre 37-42 semanas.
Antes de las 37 los pulmones aún no están maduros.
42 o más se debe inducir porque puede defecar en el útero (meconio) lo cual puede
causar infección.
*Durante el embarazo la población celular del feto a término se ha multiplicado 42
veces (adultos 46)
*Población celular aumenta hasta 17,000 veces y más de 25, 000, 000 masa muscular.
  Periodos:
Crecimiento rápido en talla (10-28 semanas)
 Proliferación celular (no aumento de peso en la madre) 3-5 meses de embarazo
aumenta 5cm x mes.
 Escasa variación del peso
Aumento de peso 28 semanas – Término
 Domina la hiperplasia celular (últimos detalles)
 En los últimos dos meses gana 700g por mes
 Aumento de 500g a las 20 semanas
 Aumento de 1000 g a las 28 semanas
 3,200kg a término  si es más se monitorean por riesgo de diabetes.
 Controles de crecimiento:
o Genético: 22-24 semanas.
Detecta alteraciones cromosómicas en el crecimiento.
Influencia genética de padres del 15%
 Controles de crecimiento exógenos:
o Maternos:
 Estimulantes: Diabetes materna (Hipertrofia pancreática fetal).
Hipertensión. Acromegalia.
 Restrictivos: Crecimiento retardadado. Perfusión intrauterina.
Tabaquismo (semana 22). Malformaciones uterina, desnutrición
severa, hipoxigenación.
 Placentarios: Aumento de resistencia a insulina materna, aumento de
síntesis proteica materna.
 Fetales: Importancia a partir de la semana 24  Insulina. Tiroxina.
Síndromes malformativos.

Características del modelo: Parámetros de elección.

Ratón:

Sistema inmune, madurez y/o traducción celular, similar a la humana. Es necesario acceder al
feto en etapas tempranas (equivalentes al primer trimestre en humanos)

Acceso intracerebral, intracardiaca, intraperitoneal, intrahepática, intramuscular e intravenosa

en E14-18 (Días)  Equivalentes al segundo trimestre del embarazo.

Pero sólo está disponible intra amniótico (E9) con una punción muy invasiva en humanos
ayuda al diagnóstico genético

Ventaja: Poco tiempo de gestación (21 días) Modelos de oveja y primates no humanos. No
tienen problemas de acceso temprano.

Número de fetos

Especies pequeñas, tienen periodos cortos de gestación, muchos fetos por madre. Muchas
manipulaciones en diversos fetos.

Especies más grandes

Ovejas  Uno o dos fetos (GESTACIÓN LARGA)

Gestación
Su tiempo es lo más importante para la elección del modelo.

Animales pequeños:

Ratón  18-21 días

Rata 21-23 días

Conejo 28-32 días

Animales más grandes:

Oveja  135 días

Primates  167 días

Parto

75% asociado con muerte o discapacidad del recién nacido.

En animales: No infecciones, hemorragias, sufrimiento fetal.

Estudios con ratones se centran en el desarrollo neuronal; en el papel de la progesterona y la

respuesta pro-inflamatoria.

Expresión de genes

Durante el desarrollo  con modelos murinos

ANIMALES TRANSGÉNICOS

Ratones knockout

Procedimiento

 Vector con transgen Entra a células embrionarias  Selección de clonas con

recombinación homóloga con el vector  Producción de quimeras  Línea transgénica del
homocigoto.

Ratones de sobreexpresión de algún gen

Procedimiento

-Construcción del vector con el transgen, con promotor y un gen reportero

-Microinyección en un oocito e implantes en ratas pseudopreñadas.

-Tener línea de modificación.

No todos los genes están implicados en el control fetal, sólo 20 en ratones (ej. Insulina)

Cada órgano tiene su propia vía de crecimiento

Cre recombinada –LoxP

Knockout global  frecuentemente da anormalidades y causa la muerte de feto

 Bloqueo de un gen en tejido específico

 Activación e inactivación del gen tejido específico es posible por su sistema Cre-loxP
 Exclusión de la región flanqueada por lox-P sólo si hay Cre-recombinasa  knockout
condicionado

Algunos promotores tejido específico son: alfa-fetoproteína en hígado, tie-1 en vasos

sangíneos fetales, etc (pero se tardan)

Sistema de recombinación Cre-lox-P

Cre-loxP  El bacteriófago P1 produce una enzima cre-recombinasa  Reconoce 34pb

(pertenecen a loxP que flanquean el gen diana en el vector) y lo cortan.

Si un ratón loxP y un ratón Cre tienen crías= Cre-LoxP

Variantes con tetraciclina

2 vectores

 Gen con el promotor tetO-CMV

 Tener otro con el activador transcripcional de la tetraciclina (molécula híbrida)
 Progenitor con ambos vectxores
 Modulado por análogos de la tetraciclina (doxicilina)

Hay una empresa que los hace: Cre-X-Mice

K.O. Convencional vs K.O. Condicional.

 Silvestre: Gen X normal

 Convencional: Gen X mutado en todos (muchos problemas)
 Específico de tejido: Gen X mutado puntualmente (desde el feto)
 Inducido: Gen X mutado en el momento elegido (control espacial y temporal)

Microarreglos

 1 muestra y muchos genes

 Emplea cDNA y membranas de nailon
 15000 genes en desarrollo de ratón
 289 en placenta y 61 son específicos
 Detecta genes durante el desarrollo y en la placenta

La oveja: Modelo de fisiología fetal

Cuidado

 Estudios en oveja anestesiada y feto exteriorizado.

-Se buscan estrategias que estresen menos al feto

-Muchos cuidados (+160 días de espera)

-Ciclo estral (Puede ser preñada, ovulación) 16-17 días.

-Se usan esponjas vaginales con acetato de medroxiprogesterona para sincronizar el estro.

Anestesia
  Se debe climatizar la oveja antes de la cirugía (separarla y mantenerla en el área de la
cirugía y recuperación para evitar estrés previo)
 No alimento, sólo agua para evitar complicaciones.
 Anestesia general (-%2 haloteno, en 40% de óxido de nitrógeno y 60% de oxígeno v/v)
 Debe estar con respirador.
 Puede usarse epidural con 1% w/v de hidrocloruro de tetracaína, suplementado con
ketamina intravenosa para sedación y anestesia local para incisión en la piel del feto:
Ketamina  droga y salta los ojos (necesario hidratarlos)

Cirugía

 Antes se debe lavar por completo

 Todo debe ser bajo asepsia
 Incisión en el abdomen por la línea media con bisturí que cauteriza para incisión en el
útero y la piel del feto.
 Se libera la cabeza o el torso del feto no olvidar poner clamps (para sellar, son pinzas
para menor pérdida de fluido)
 Suturar por puntos sucesivos

Cuidados postoperatorios

 Almacenar de forma individual

 Se debe cuidar:
o Que coma bien y cuidados intensivos de la madre
o Tratamiento con antibióticos (1 dosis pre cirugía, 1 dosis durante la cirugía y 2
dosis post-cirugía)
o Revisar el fluido de los catéteres y esterilizarlos y sus soluciones
o Evitar ketoacidosis (falla hepática) se debe procurar que se levante y coma)
o Revisar si come, bebe y defeca.
o Si no defeca probablemente hubo una complicación y debe ser sacrificada.

Antibióticos

 Administrar 3 días
 Estreptomicina y penicilina (muscular) y abiótica o venosa en el feto (menos dosis en
ratones y ratas)

Instrumentación

-Catéteres para soluciones (a veces con códigos de color)

 De flujo sanguíneo umbilical (insertar en feto)

 De flujo sanguíneo bajo: En vasos femorales o en el pie. No cambia la longitud en todo
el periodo
 De flujo sanguíneo alto: En el cuello del feto.
 Cavidad amniótica: Para administración e antibióticos o medir la presión arterial

-Electrodos de registro o estimulación en el esternón fetal, pared uterina, electrocardiograma,

electrocardiograma uterino.

Programación fetal

(Me dio flojera interpretar mis apuntes)

Mecanismos genéticos

Si hubo deprivación  Se desarrolla un ambiente económico (thrifty)  No hay todos los

nutrientes necesarios para +órganos como cerebro y células beta: Nunca se puede compensar
esta falta de nutrientes.
Modelos de restricción en Oveja

Carunlectomía

 La placenta de la oveja tiene de 40-100 cotiledones (botoncitos para alimentar al

feto  se cauteriza.
 Se remueve cierta cantidad de cotiledones.
 Los corderos tienen bajo peso al nacer
 También se usa para respuesta endócrina a esta deprivación.

Hipertermia

 40°C por 12h y 35°C por 12h durante el periodo de crecimiento máximo de la
placenta
 Causaba reducción en el peso y mal gestación.
 Revisar el consumo de comida que la pérdida de apetito indica estrés.

Embolización del cordón umbilical.

 En fases tardías de la gestación.

 Reducir el 35% del riego sanguíneo en el feto debido a la inyección de microesferas
dentro del cordón umbilical.
 Por 9 días  -20% del peso en el feto
 Usado para ver respuesta cardiovascular y endócrina

Restricción diertaria

 Mal nutrición maternal  Bajo peso al nacer

 Más usado la restricción de proteínas
 Depende del órgano (etapas tempranas o tardías se emplean)
 Se necesitan 4 grupos para las diversas etapas del crecimiento fetal.
 Una reducción moderada (15%) en los 70 días puede alterar el desarrollo
cardiovascular, causan baja presión, pero con tamaño normal y velocidad de
crecimiento normal.

Exposición de glucocorticoides (Para cuando los pulmones no se desarrollan bien)

 2 días en periodos tempranos causan hipertensión que permanece hasta por 5 años
(directo en el feto)
 Betametasona a la madre  Pierde homeostasis de la glucosa  Diabetes

Restricción Programación Fetal

Roedores

Siempre se deben pedir días antes para evitar que se infecten antes de la cirugía.

Modelo empleado para restricción dietaria

La restricción de comida es variable.

Ratas sólo comieron un 6% de proteína, los productos tuvieron un bajo peso al nacer y se
recuperaron al post nacimiento, pero tuvieron un bajo de glomerulos en el riñon examinado a
las 8 semanas.

Se volvieron hipertensas, su presión sanguinea continuó en aumento durante los siguientes

meses.

Ligación de arteria uterina

La ligación por cirugía de esta arteria

La arteria uterina suministra el oxígeno a los fetos

La gestación se continua a termino, pero se reduce el flujo sanguineo de la placenta un 25%

El peso del feto se reducen un 40%

Con decremento en el radio del peso del cerebro y del hígado

Modelo indicado para respuesta fetal endícrina y cardiovascular

Hipoxia hipoxica

140 millones de personas viven en una altitud mayor a las 2500m

Riesgo de restricción del crecimiento fetal y preclampsia

Se utilizan cerdos de guinea que son expuestos a alta altitud

Por medio de cámaras hipobáricas desde el día 6 de gestación